宋伯騏 張亞蘭 王乾娜 賀煜竣 楊凌毓 付磊 劉未艾

〔摘要〕 目的 觀察針刺風(fēng)池、外關(guān)、陽陵泉對硝酸甘油（NTG）誘導(dǎo)的偏頭痛（ME）大鼠核因子-κB（NF-κB）P65、IκB激酶（IKK）β、NF-κB抑制蛋白（IκB）α的影響，探討針刺治療ME可能的作用機(jī)制。方法 將40只SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、針刺組、西藥組，每組10只?？瞻捉M不做任何處理;模型組采用皮下注射NTG造模;針刺組造模后給予針刺風(fēng)池、外關(guān)、陽陵泉干預(yù)治療8 d;西藥組造模后給予鹽酸氟桂利嗪藥液灌胃干預(yù)治療8 d。觀察并記錄各組大鼠造模前、造模后、治療后的行為學(xué)變化以及50%機(jī)械縮足閾值（PWT）;采用蛋白免疫印跡（WB）法檢測各組大鼠腦膜NF-κB P65、IKKβ、IκBα的蛋白表達(dá);反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCT）法檢測各組大鼠三叉神經(jīng)脊束核NF-κB P65、IKKβ、IκBα的mRNA表達(dá)。結(jié)果 （1）造模后，除空白組外其余3組大鼠均出現(xiàn)耳紅、咬尾、爬籠等行為，行為學(xué)評分增加，50% PWT降低（P<0.01），表明造模成功。（2）造模后，與空白組比較，模型組大鼠行為學(xué)的評分均明顯升高（P<0.01）;治療后，與模型組比較，針刺組和西藥組行為學(xué)評分明顯降低（P<0.01）;與西藥組比較，針刺組差異不明顯（P>0.05）。（3）造模后，與空白組比較，其余3組大鼠50% PWT均顯著降低（P<0.01）;治療后，與模型組比較，針刺組和西藥組50% PWT明顯升高（P<0.01）;與西藥組比較，針刺組差異不明顯（P>0.05）。（4）與空白組比較，模型組NF-κB P65、IKKβ、IκBα的蛋白含量明顯升高（P<0.01）;與模型組比較，針刺組與西藥組NF-κB P65、IKKβ、IκBα的蛋白含量明顯降低（P<0.01），其中針刺組與西藥組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（5）與空白組比較，模型組NF-κB P65、IKKβ、IκBα的mRNA表達(dá)明顯升高（P<0.01）;與模型組比較，針刺組與西藥組NF-κB P65、IKKβ、IκBα的mRNA表達(dá)明顯降低（P<0.01），其中針刺組與西藥組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 針刺風(fēng)池、外關(guān)、陽陵泉能夠減輕ME大鼠的疼痛程度，有效下調(diào)腦膜及三叉神經(jīng)脊束核中NF-κB P65、IKKβ、IκBα的蛋白含量與基因表達(dá)，這可能是針刺風(fēng)池、外關(guān)、陽陵泉治療ME的機(jī)制之一。

〔關(guān)鍵詞〕 偏頭痛;針刺;風(fēng)池;外關(guān);陽陵泉;NF-κB;IKKβ;IκBα

〔中圖分類號〕R245? ? ? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.09.007

Effect of Acupuncture at “Fengchi” （GB20）， “Waiguan” （SJ5） and “Yanglingquan” （GB34） on

NF-κB P65， IKKβ， IκBα in Migraine Rats

SONG Boqi1， ZHANG Yalan2， WANG Qianna2， HE Yujun2， YANG Lingyu2， FU Lei2*， LIU Weiai2*

（1. The First Affiliated Hospital of Nanchang University， Nanchang， Jiangxi 330200， China;

2. The Second Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410005， China）

〔Abstract〕 Objective To observe the effects of acupuncture at “Fengchi” （GB20）， “Waiguan” （SJ5） and “Yanglingquan” （GB34） on NF-κB p65， IKKβ and IκBα in migraine （ME） rats induced by nitroglycerin （NTG）， and to explore the possible mechanism of acupuncture in treating ME. Methods 40 SD rats were randomly divided into blank group， model group， acupuncture group and western medicine group， with 10 rats in each group. The blank group was not given any treatment; the model group was modeled by subcutaneous injection of NTG， the acupuncture group was intervened treatment by acupuncture at “Fengchi” （GB20）， “Waiguan” （SJ5） and “Yanglingquan” （GB34） for 8 days after modeling， the western medicine group was intervened treatment by intragastric administration of flunarizine hydrochloride for 8 days after modeling. Behavioral changes and 50% mechanical shrinkage threshold （PWT） were observed and recorded before modeling， after modeling and after treatment. The protein expression levels of NF-κB P65， IKKβ and IκBα in meninges were detected by Western blot （WB）. The mRNA content of NF-κB P65， IKKβ and IκBα in spinal trigeminal nucleus was detected by reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR）. Results （1） After modeling， except for the blank group， the other three groups all had red ears， tail biting and cage climbing behaviors， the behavioral score increased and 50% PWT decreased （P<0.01）， indicating the success of modeling. （2） After modeling， the behavioral scores of rats in model group were significantly higher than those in the blank group （P<0.01）; after treatment， compared with the model group， the behavioral scores of the acupuncture group and the western medicine group were significantly lower （P<0.01）; compared with the western medicine group， there was no significant difference in the acupuncture group （P>0.05）. （3） After modeling， except for the blank group， the 50% PWT of rats in the other three groups was significantly lower than that in the blank group （P<0.01）; after treatment， compared with the model group， the 50% PWT in the acupuncture group and the western medicine group was significantly increased （P<0.01）; compared with the western medicine group， there was no significant difference in the acupuncture group （P>0.05）. （4） The content of NF-κB P65， IKKβ and IκBα protein in the model group was significantly higher than those in the blank group （P<0.01）; the protein content of NF-κB P65， IKKβ and IκBα in acupuncture group and western medicine group were significantly decreased （P<0.01）， and there was no significant difference between acupuncture group and western medicine group （P>0.05）. （5） Compared with the blank group， the mRNA levels of NF-κB P65， IKKβ and IκBα in the model group were significantly higher （P<0.01）; compared with model group， the mRNA levels of NF-κB P65， IKKβ and IκBα in the acupuncture group and western medicine group were significantly decreased （P<0.01）， and there was no significant difference between acupuncture group and western medicine group （P>0.05）. Conclusion Acupuncture at “Fengchi” （GB20）， “Waiguan” （SJ5） and “Yanglingquan” （GB34） can relieve the pain of ME rats， effectively reduce the protein and gene expression of NF-κB P65， IKKβ and IκBα in the meninges and trigeminal spinal tract nucleus， which may be one of the mechanisms of acupuncture at “Fengchi” （GB20）， “Waiguan” （SJ5） and “Yanglingquan” （GB34） in the treatment of ME.

〔Keywords〕 migraine; acupuncture; “Fengchi” （GB20）; “Waiguan” （SJ5）; “Yanglingquan” （GB34）; NF-κB; IKKβ; IκBα

偏頭痛（migraine， ME）屬于慢性發(fā)作性神經(jīng)血管疾患，其嚴(yán)重程度常被公眾和許多醫(yī)務(wù)人員低估，有時也會與其他類型的頭痛（如緊張型頭痛）相混淆，往往缺乏正確的診斷以及適當(dāng)?shù)闹委焄1]。《2016年全球疾病負(fù)擔(dān)研究》指出，ME作為世界第六大常見疾病和第二大致殘性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，在全球有將近30億患者[2]。目前，ME的治療仍以藥物治療為主，存在許多不良反應(yīng)，如乏力、睡眠困難、惡心和嘔吐[3]，且費(fèi)用昂貴、難以根治，最終導(dǎo)致患者依從性差，難以得到很好的療效。而針灸治療ME療效確切并且十分安全[4-6]，已被西方國家日益接受作為治療ME的替代療法[7]。關(guān)于ME的發(fā)病機(jī)制，目前主流學(xué)說認(rèn)為與三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)的激活有關(guān)，其主要生理病理改變?yōu)槟X膜血管擴(kuò)張、炎性因子釋放導(dǎo)致的神經(jīng)源性炎癥以及中樞痛覺傳導(dǎo)抑制的減弱。核因子κB（nuclear factor kappa-B， NF-κB）與炎癥的發(fā)生關(guān)系密切，參與多種炎癥反應(yīng)的的基因轉(zhuǎn)錄過程。研究表明[8]，NF-κB在ME發(fā)病過程中起著重要作用。本團(tuán)隊(duì)在前期研究[9-10]中發(fā)現(xiàn)，針刺風(fēng)池、外關(guān)、陽陵泉可以提高M(jìn)E大鼠的疼痛閾值，降低大鼠疼痛敏感性，并通過調(diào)控ME大鼠外周血清的相關(guān)血管活性物質(zhì)和神經(jīng)遞質(zhì)的表達(dá)，從而抑制神經(jīng)源性炎癥（neurogenie inflammation， NI），能夠預(yù)防和治療ME的急性發(fā)作。本實(shí)驗(yàn)研究以鹽酸氟桂利嗪為對照，通過觀察針刺風(fēng)池、外關(guān)、陽陵泉對偏頭痛模型大鼠NF-κB P65、IKKβ、IκBα的影響，從NF-κB信號傳導(dǎo)通路的角度探討其可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1? 實(shí)驗(yàn)動物

健康SPF級SD大鼠40只，3～4月齡，體質(zhì)量（225±25） g，雌雄各半，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)單位許可證號：SYXK（湘）2013-0005。實(shí)驗(yàn)動物的質(zhì)量合格證號：43004700035050。

1.2? 主要儀器與試劑

華佗牌針灸針、電子針療儀（蘇州醫(yī)療用品，規(guī)格0.25 mm×13 mm，型號：SDZ-Ⅱ）;Von Frey纖毛機(jī)械刺激針（瑞沃德）;臺式冷凍離心機(jī)（黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司，型號：TGL-18R）;電泳儀（美國Bio-rad公司，型號：164-5050）;電泳槽（北京六一儀器有限公司，型號：DYCZ-24EN）;轉(zhuǎn)膜儀（北京六一儀器有限公司，型號：DYCZ-40A）;熒光定量RCP儀（美國Thermo公司，型號：PIKO REAL 96）;熒光PCR板（美國Thermo公司，型號：SPL0960）。硝酸甘油注射液（河南潤弘制藥，國藥準(zhǔn)字H20057216）;常規(guī)化學(xué)試劑（上海國藥生物有限公司）;RIPA裂解液（長沙維世爾生物有限公司）;逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（北京康為世紀(jì)有限公司）;引物（上海生工）。

1.3? 動物分組及處理

大鼠常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d。采用數(shù)字隨機(jī)表法將40只SD大鼠隨機(jī)分成4組，分別是模型組、空白組、針刺組、西藥組，每組10只?？瞻捉M：不做任何處理;模型組：正常飼養(yǎng)8 d，第8天皮下造模;針刺組：針刺風(fēng)池、外關(guān)、陽陵泉干預(yù)7 d，每天1次，每次30 min，第8天皮下造模，30 min后行針刺治療30 mim;西藥組：鹽酸氟桂利嗪藥液灌胃干預(yù)7 d，每天1次，第8天皮下造模，30 min后行灌胃治療1次。

為保持齊同可比性，除空白組外，各組與西藥組同時段灌胃等量生理鹽水，與針刺組同時段捆綁束縛30 min。

1.4? 造模及模型評價

1.4.1? 造模方法? 參照Tassorelli C等[11]的方法造模：臀部皮下，注射NTG注射液1次，10 mg/kg。

1.4.2? 模型評價? （1）行為學(xué)[12]：皮下注入NTG后，大鼠雙耳會發(fā)紅，并出現(xiàn)爬籠次數(shù)的增多，前肢頻繁撓頭，咬尾、豎毛等活動增加，蜷縮以及焦躁不安的行為改變，證明造模成功。（2）50% PWT：用纖維絲疼痛測試儀[13]對后爪足底機(jī)械痛閾進(jìn)行測定，記錄大鼠的后肢縮足反應(yīng)測量出的刺激力，用來推算50% PWT，從而判斷ME大鼠疼痛程度。對造模成功標(biāo)準(zhǔn)的判定：大鼠造模成功后其對疼痛的敏感性將會增加（造模后的50% PWT測定值比造模前低）。

1.5? 穴位定位與針刺方法

根據(jù)郭義主編《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》[14]的“動物針灸穴位圖譜”，結(jié)合解剖學(xué)知識。風(fēng)池：位于寰椎翼前緣的直上方凹陷內(nèi)，刺針時需向鼻尖方向斜2～3 mm。外關(guān)：位于前肢外側(cè)距腕關(guān)節(jié)3 mm處，在尺、橈骨間。刺針直刺1 mm。陽陵泉：位于距后三里（大鼠膝關(guān)節(jié)下側(cè)腓骨小頭下約5 mm）上外側(cè)5 mm，直刺6 mm。

針刺方法[15]：華佗牌φ0.25 mm×13 mm一次性針，對大鼠雙側(cè)風(fēng)池、陽陵泉以及外關(guān)穴進(jìn)行針刺，進(jìn)針需1～6 mm，平瀉平補(bǔ)，捻動180°、120 次/min、0.5～2 min，行針完成后，把針刺組調(diào)成同側(cè)的外關(guān)和陽陵泉連接針刺儀（SDZ-Ⅱ型）導(dǎo)線正負(fù)極，用疏密波10/50 Hz，0.5～1.0 mA對其進(jìn)行刺激，當(dāng)大鼠雙上肢出現(xiàn)規(guī)律性抖動或者局部肌肉收縮為強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)，30 min/次。

1.6? 動物給藥及灌胃

取鹽酸氟桂利嗪膠囊（5 mg），加生理鹽水（40 mL），制成濃度為0.125 mg/mL的鹽酸氟桂利嗪溶液，4 ℃保存。按照10 mL/kg劑量進(jìn)行灌胃給藥[16]。灌胃方法見參考[17]。

1.7? 檢測指標(biāo)及取材方法

1.7.1? 行為學(xué)觀察? 觀察造模前、造模后、治療后30 min內(nèi)大鼠爬籠、咬尾、前肢撓頭、往返活動等行為次數(shù)總和（出現(xiàn)1次計(jì)1分）。

1.7.2? 50% PWT測量? 分別在造模前、造模后、治療后，將各組大鼠放置于測試架上，用動物圍欄隔開，充分暴露后大鼠足底，以使得實(shí)驗(yàn)者可自由接觸到，用纖維絲疼痛測試儀，對其同側(cè)后爪趾面的中間區(qū)域進(jìn)行刺激，對大鼠后下肢縮足反射進(jìn)行觀察，推算出50% PWT。

1.7.3? 腦膜及三叉神經(jīng)脊束核取材? 待各組大鼠處理完畢后，20%烏拉坦4 mL/kg腹腔注射，去掉大鼠頭部及頸部毛發(fā)，再用75%酒精消毒剪去毛發(fā)的部位，然后剪開頭皮，暴露顱骨，用小咬骨鉗以枕骨大孔為入口將大鼠枕骨去掉，并進(jìn)一步擴(kuò)大創(chuàng)口，使大腦表面完整暴露，剝離出腦膜、三叉神經(jīng)脊束核，用冰生理鹽水沖洗后速入液氮中凍存，-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.7.4? 蛋白免疫印跡法（Western blot， WB）檢測大鼠腦膜IKKβ、IκBα、NF-κB P65蛋白的表達(dá) 剪取0.025 g組織，冰上蛋白裂解10 min，離心（4 ℃，12 000 r/min，15 min），取上清，測定蛋白濃度。經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉后，稀釋IKKB （1∶1 000）;IKBA （1∶10 000）;NF-κBP65 （1∶800）;β-actin （1∶5 000），4 ℃孵育過夜。稀釋HRP標(biāo)記的二抗（1∶6 000），鼠抗（M）（1∶5 000），孵育90 min。ECL化學(xué)發(fā)光液孵育3 min，X膠片曝光、顯影。使用Quantity one軟件進(jìn)行灰度值分析。

1.7.5? 反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCT）檢測大鼠三叉神經(jīng)脊束核IKKβ、IκBα、NF-κB P65基因的表達(dá)? 腦膜組織0.02 g+1 mL Trizol+0.2倍的三氯甲烷，混合液低溫離心（12 000 r/min，15 min）。取上清，加入等體積的異丙醇（IPA），室溫下靜置10 min后低溫離心（12 000 r/min，15 min），去上清，加入75%乙醇1 mL，低溫離心（12 000 r/min，15 min）。去上清，空氣干燥5～10 min。加入無菌無酶水50 μL溶解沉淀后測定RNA濃度。以組織總mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄cDNA。42 ℃孵育30～50 min，85 ℃孵育5 min。以β-actin為內(nèi)參，采用2-△△Ct法對數(shù)據(jù)進(jìn)行相對定量分析。其中各基因PCR引物序列見表1。

1.8? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)用“x±s”進(jìn)行表示，所有相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性和方差齊性檢驗(yàn)。當(dāng)滿足正態(tài)性條件后，多組計(jì)量數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，當(dāng)方差齊時行LSD檢驗(yàn)，當(dāng)方差不齊時需行Dunnett T3法檢驗(yàn);當(dāng)數(shù)據(jù)不滿足正態(tài)性情況時，用秩和檢驗(yàn)。均以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)意義。

2 結(jié)果

2.1? 各組大鼠行為學(xué)比較

造模前，4組大鼠行為學(xué)評分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說明有可比性。造模后，除空白組外其余3組大鼠行為學(xué)的評分與空白組相比均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），提示造模成功。治療后，與模型組比較，針刺組和西藥組行為學(xué)評分明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;與西藥組比較，針刺組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見圖1。說明針刺風(fēng)池、外關(guān)、陽陵泉和鹽酸氟桂利嗪均能改善偏頭痛大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)。

2.2? 各組大鼠50% PWT比較

造模前，各組大鼠50% PWT數(shù)值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），證明其有可比性。造模后，除空白組外其余3組大鼠大鼠50% PWT與空白組比較均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），表明造模成功。治療后，與模型組比較，針刺組和西藥組50% PWT明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;西藥組與針刺組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見圖2。

說明針刺風(fēng)池、外關(guān)、陽陵泉和鹽酸氟桂利嗪均能提高偏頭痛大鼠的疼痛敏感度。

2.3? 各組大鼠腦膜NF-κB P65、IKKβ、IκBα蛋白表達(dá)水平比較

與空白組比較，模型組NF-κB P65、IKKβ、IκBα蛋白含量明顯升高，且差異有統(tǒng)計(jì)意義（P<0.01）;與模型組相比，針刺組與西藥組NF-κB P65、IKKβ、IκBα蛋白含量均明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;西藥組與針刺組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見圖3-4。說明針刺風(fēng)池、外關(guān)、陽陵泉和鹽酸氟桂利嗪均能下調(diào)NF-κB P65、IKKβ、IκBα蛋白在腦膜的表達(dá)。

2.4? 各組大鼠三叉神經(jīng)脊束核NF-κB P65、IKKβ、IκBα mRNA表達(dá)水平比較

與空白組比較，模型組NF-κB P65、IKKβ、IκBα mRNA相對表達(dá)量均顯著提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;與模型組比較，針刺組和西藥組NF-κB P65、IKKβ、IκBα mRNA相對表達(dá)量均下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;西藥組與針刺組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。說明針刺風(fēng)池、外關(guān)、陽陵泉和鹽酸氟桂利嗪都均能下調(diào)NF-κB P65、IKKβ、IκBα基因在三叉神經(jīng)脊束核的表達(dá)。見圖5。

3 討論

中醫(yī)稱ME為“首風(fēng)”“邊頭風(fēng)”，是中醫(yī)頭痛中的一類病證。其好發(fā)于頭側(cè)部，為少陽經(jīng)循行之處，故多以少陽樞機(jī)不利為主要病機(jī);“少陽為樞”是對少陽生理功能的總概括?！墩f文解字》曰：“樞，戶樞也”，“主發(fā)之機(jī)”，提示少陽是氣機(jī)升降之樞紐。手足少陽經(jīng)均與氣機(jī)升降聯(lián)系密切，《難經(jīng)·六十六難》曰：“三焦者，原氣之別使，主通行三氣”，三焦經(jīng)既是氣機(jī)升降的重要通道，更是總司氣化及氣機(jī)的重要場所;少陽膽經(jīng)多氣少血，而《東垣十書》中曰：“足少陽膽經(jīng)之脈，起于目銳眥，上抵頭角，病頭角額痛，如頭半邊痛者，先行手少陽陽明，再走足少陽陽明，此為偏頭痛也”。故ME治以通調(diào)氣機(jī)為要，針刺選穴以少陽二經(jīng)穴位為主。

ME的發(fā)病機(jī)制目前尚不完全明確，主流為三叉神經(jīng)血管源性學(xué)說[18]：該學(xué)說把血管、神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)三者結(jié)合，認(rèn)為發(fā)生ME的主要生理病理改變?yōu)槟X膜血管擴(kuò)張、炎性因子釋放導(dǎo)致的NI以及中樞痛覺傳導(dǎo)抑制的減弱，而整個過程與三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)的激活有關(guān)。腦膜及腦膜血管是偏頭痛外周疼痛敏感組織，當(dāng)腦膜及腦膜血管受到刺激，刺激信息被周圍三叉神經(jīng)的末梢接收，由傳入纖維傳進(jìn)與頭痛相關(guān)的二級神經(jīng)元三叉神經(jīng)脊束核導(dǎo)致中樞致敏，隨后該信號被傳到丘腦三級神經(jīng)元中，進(jìn)行傷害性刺激，最終將其傳進(jìn)扣帶回、額葉、島葉，從而引起ME[19]。近年研究證實(shí)，NF-κB在ME發(fā)病過程中起著重要作用[8]，在靜止?fàn)顟B(tài)下，NF-κB轉(zhuǎn)錄因子以抑制蛋白作用下的非活性二聚體的形式存在于靜止的硬腦膜細(xì)胞的胞漿里。遇到有害刺激，IκB激酶復(fù)合物激活導(dǎo)致獨(dú)立IκB蛋白磷酸化，然后磷酸化的IκB進(jìn)行泛素化和蛋白酶體降解以釋放使NF-κB二聚體（P50/P65）自由進(jìn)入細(xì)胞核，與炎癥相關(guān)基因位點(diǎn)相互結(jié)合并復(fù)制，使血管滲透性增強(qiáng)，最終導(dǎo)致組織水腫，疼痛敏感提高。

IKKβ是IKK復(fù)合體中的一個催化亞基，參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答過程。細(xì)胞遭受相應(yīng)刺激后，活化細(xì)胞內(nèi)的一些上游激酶，降解IKKβ磷酸化IκBα分子中Ser32和Ser36，使NF-κB從復(fù)合體中解離出來轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核內(nèi)啟動下游基因轉(zhuǎn)錄，因而，IKKβ成為了激活NF-κB經(jīng)典途徑有關(guān)的關(guān)鍵亞基[20]。IκBα作為IκB家族的核心成員，結(jié)合NF-κB雜二聚體，在靜止?fàn)顟B(tài)下位于細(xì)胞質(zhì)中，抑制NF-κB的活化[21]，有研究[22]表明，細(xì)胞中IκBα的分布呈動態(tài)性，IκBα可以抑制NF-κB的活化，反饋調(diào)節(jié)NF-κB系統(tǒng)。NF-κB P65是最典型的 NF-κB 轉(zhuǎn)錄因子，也是其主要的活性形式[23]，異源二聚體主要由P65組成的異源二聚體N短含有Rel同源結(jié)構(gòu)域（發(fā)揮轉(zhuǎn)導(dǎo)功能主要場所）[24-26]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明：NTG造模后，大鼠行為學(xué)評分增加（P<0.01），50% PWT降低（P<0.01），腦膜及三叉神經(jīng)脊束核中NF-κB P65、IKKβ、IκBα蛋白與基因表達(dá)均明顯上升（P<0.01），與現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)研究[12，27]結(jié)果一致。針刺風(fēng)池、外關(guān)、陽陵泉可以下調(diào)大鼠腦膜及三叉神經(jīng)脊束核中NF-κB P65、IKKβ、IκBα蛋白含量和基因表達(dá)（P<0.01），其原因可能如下：（1）針刺能夠調(diào)節(jié)調(diào)整血管的異常收縮和舒張狀態(tài)，減輕三叉神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)源性炎癥，抑制痛覺從外周向中樞的傳導(dǎo)，從而達(dá)到治療ME的效果。已有研究[28]證明，針刺能單向抑制NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，通過影響NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核，從而調(diào)控基因調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的過程。（2）電針在針刺的基礎(chǔ)上，結(jié)合電的生理效應(yīng)，使針刺信號不斷向中樞傳導(dǎo)，更好的發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用，同時采用疏密波能夠有效的促進(jìn)局部的血液循環(huán)，抑制血管的緊張，有利于致痛物質(zhì)的吸收[29]。（3）選用風(fēng)池、外關(guān)、陽陵泉治療ME在本課題組前期[30-31]已證明其經(jīng)穴的特異性。據(jù)報(bào)道，風(fēng)池、外關(guān)、陽陵泉均能不同程度參與NF-κB信號通路中，抑制NF-κB通路因子的釋放，有效控制炎癥[32-34]。筆者認(rèn)為將針刺效果、疏密波針刺效果與穴位效果相互疊加，共同作用，最終導(dǎo)致了ME大鼠腦膜及三叉神經(jīng)脊束核中NF-κB P65、IKKβ、IκBα蛋白含量和基因表達(dá)的下降。

綜上所述，針刺風(fēng)池、外關(guān)、陽陵泉能夠減輕ME大鼠的疼痛程度，有效下調(diào)腦膜及三叉神經(jīng)脊束核中NF-κB P65、IKKβ、IκBα的蛋白含量與基因表達(dá)，這可能是針刺風(fēng)池、外關(guān)、陽陵泉治療ME的機(jī)制之一。

參考文獻(xiàn)

[1] PETERS G L. Migraine overview and summary of current and emerging treatment options[J]. The American Journal of Managed Care， 2019， 25（2 Suppl）： S23-S34.

[2] COLLABORATORS G 2 H. Global， regional， and national burden of migraine and tension-type headache， 1990-2016： A systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016[J]. The Lancet Neurology， 2018， 17（11）： 954-976.

[3] TFELT-HANSEN P C. Evidence-based guideline update： Pharmacologic treatment for episodic migraine prevention in adults： Report of the Quality Standards subcommittee of the American Academy of Neurology and the American Headache Societyc[J]. Neurology， 2013， 80（9）： 869-870.

[4] ALECRIM-ANDRADE J， MACIEL J A， CLADELLAS X C， et al. Acupuncture in migraine prophylaxis： A randomized sham-controlled trialc[J]. Cephalalgia， 2006， 26（5）： 520-529.

[5] ZHAO L， CHEN J， LI Y， et al. The long-term effect of acupuncture for migraine prophylaxis[J]. JAMA Internal Medicine， 2017， 177（4）： 508-515.

[6] DIENER H C， KRONFELD K， BOEWING G， et al. Efficacy of acupuncture for the prophylaxis of migraine： A multicentrerand?omised controlled clinical trial[J]. The Lancet Neurology， 2006， 5（4）： 310-316.

[7] ZHAO L， ZHANG F W， LI Y， et al. Adverse events associated with acupuncture： Three multicentre randomized controlled trials of 1968 cases in China[J]. Trials， 2011， 12（1）： 1-9.

[8] 張? 芹，齊丹丹，張忠玲.核轉(zhuǎn)錄因子-κB信號通路在偏頭痛發(fā)病機(jī)制中的相關(guān)研究進(jìn)展[J].國際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志，2016，43（1）：87-90.

[9] 劉秋佳，葉意紅，王乾娜，等.電針少陽經(jīng)穴對偏頭痛大鼠行為學(xué)、50%縮足閾值及血清ET、NO、CGRP含量的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2019，34（1）：5428-5432.

[10] 王乾娜，劉秋佳，葉意紅，等.不同時期電針少陽經(jīng)特定穴對偏頭痛大鼠血清中5-HT及SP含量的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2019，30（11）：2795-2798.

[11] TASSORELLI C， GRECO R， WANG D C， et al. Nitroglycerin induces hyperalgesia in rats： A time-course study[J]. European Journal of Pharmacology， 2003， 464（2/3）： 159-162.

[12] 周? 莉，蔡秀英，倪健強(qiáng).偏頭痛實(shí)驗(yàn)動物模型的行為學(xué)評價[J].中國疼痛醫(yī)學(xué)雜志，2016，22（4）：293-297.

[13] DETLOFF M R， FISHER L C， DEIBERT R J， et al. Acute and chronic tactile sensory testing after spinal cord injury in rats[J]. Journal of Visualized Experiments， 2012（62）： e3247.

[14] 郭? 義，方劍喬.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].3版.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2012：47-48.

[15] 劉? 璐，裴? 培，王麟鵬.針刺治療實(shí)驗(yàn)性偏頭痛模型大鼠機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中國針灸，2016，36（3）：331-336.

[16] 王清清，劉玉敏，林? 曉，等.鹽酸氟桂利嗪干預(yù)硝酸甘油致偏頭痛大鼠的代謝組學(xué)研究[J].中國藥學(xué)雜志，2019，54（3）：193-199.

[17] 施新猷.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物學(xué)[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2000.

[18] 董蘭真，蒲圣雄，周冀英.偏頭痛與神經(jīng)源性炎癥的研究進(jìn)展[J].重慶醫(yī)學(xué)，2015，44（8）：1126-1128.

[19] 劉頂鼎，郭建生.降鈣素基因相關(guān)肽與偏頭痛三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)機(jī)制的關(guān)系[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2015，32（3）：381-385.

[20] 王曉璐，方玉春，李靜.IKKβ結(jié)構(gòu)與功能及其抑制劑研究進(jìn)展[J].中國藥理學(xué)通報(bào)，2012，28（2）：158-161.

[21] GHOSH S， HAYDEN M S. Celebrating 25 years of NF-κB research[J]. Immunological Reviews， 2012， 246（1）： 5-13.

[22] HINZ M， ARSLAN S ?， SCHEIDEREIT C. It takes two to tango： IκBs， the multifunctional partners of NF-κB[J]. Immunological Reviews， 2012， 246（1）： 59-76.

[23] ZHANG Z Q， RIGAS B. NF-kappaB， inflammation and pancreatic carcinogenesis： NF-kappaB as a chemoprevention target （review）[J]. International Journal of Oncology， 2006， 29（1）： 185-192.

[24] 楊麗白，王淑麗，牛爭平.核因子 KB 在偏頭痛發(fā)病機(jī)制中的作用[J].國際腦血管病雜志，2007，15（3）：214-217.

[25] KAILEH M， SEN R. Role of NF-kappaB in the anti-inflammatory effects of tocotrienols[J]. Journal of the American College of Nutrition， 2010， 29（3 Suppl）： 334S-339S.

[26] HAYDEN M S， GHOSH S. Shared principles in NF-kappaB signaling[J]. Cell， 2008， 132（3）： 344-362.

[27] 蒲玉婷，王小強(qiáng)，楊思進(jìn)，等.顱痛顆粒對偏頭痛模型大鼠行為學(xué)及NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2019，36（4）：569-573.

[28] 鐘國新.針刺對慢性萎縮性胃炎模型大鼠NF-κB轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)影響的研究[D].廣州：廣州中醫(yī)藥大學(xué)，2014.

[29] 黃? 彬，姜岳波.疏密波電針治療緊張型頭痛療效觀察[J].針灸臨床雜志，2013，29（3）：46-48.

[30] 王乾娜，劉秋佳，葉意紅，等.電針少陽經(jīng)特定穴與非經(jīng)非穴對偏頭痛大鼠血清中相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)及50%縮足閾值的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2018，29（11）：2802-2804.

[31] 葉意紅，劉秋佳，康樂薔薇，等.電針少陽經(jīng)特定穴對偏頭痛大鼠血清中NO、ET-1含量及50%PWT的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2018，38（12）：1453-1457.

[32] 馬天明，李然，程為平.針刺百會和風(fēng)池穴對神經(jīng)性皮炎模型大鼠NF-κB信號通路的影響[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，19（8）：124-127.

[33] 林? 棟.針刺大鼠外關(guān)穴對不同腦區(qū)CREB磷酸化及相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究[D].廣州：廣州中醫(yī)藥大學(xué)，2011.

[34] 倪? 偉.電針陽陵泉等下合穴對急性膽囊炎模型豚鼠NF-κB及IL-1β的對比研究[D].長沙：湖南中醫(yī)藥大學(xué)，2016.