李蘭亞 伍廣 屠濤 張麗

研究表明，慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)患者病情惡化與免疫功能損害有一定聯(lián)系，對(duì)患者預(yù)后情況也有影響[1]。有研究發(fā)現(xiàn)，非特異性免疫對(duì)抑制CHB病情的發(fā)展也有重要作用[2]。而自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell，NK)屬于非特異性免疫的一部分，可能也參與或推動(dòng)了CHB肝纖維化的發(fā)生[3-4]。本研究通過(guò)分析外周血NK細(xì)胞表達(dá)水平對(duì)CHB患者肝纖維化的影響及預(yù)測(cè)價(jià)值，以指導(dǎo)未來(lái)CHB患者肝纖維化的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與干預(yù)。

資料與方法

一、一般資料

選取2017年3月至2020年2月收治的83例CHB患者作為研究對(duì)象。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò)，患者與家屬均知情且自愿簽署同意書(shū)。研究對(duì)象中，男性46例，女性37例；年齡22～56歲，平均年齡(40.59±7.50)歲；體質(zhì)指數(shù)18.12～24.75 kg/m2，平均體質(zhì)指數(shù)(21.57±1.89)kg/m2；病程1～15年，平均病程(5.98±3.82)年。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《CHB防治指南(2015年版)》[5]中CHB診斷標(biāo)準(zhǔn)；②經(jīng)病理學(xué)、實(shí)驗(yàn)室檢查等確診為CHB；③腎、肺等重要臟器檢查正常；④無(wú)血液系統(tǒng)疾病或凝血功能障礙。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并甲、丙等其他肝炎病毒感染；②合并自身免疫性肝病或者酒精性肝??；③合并惡性腫瘤；④既往半年曾使用腎上腺皮質(zhì)激素、抗病毒藥物等。

三、研究方法

(一)基線資料收集方法 比較基線資料，包括性別(男/女)、年齡、體質(zhì)指數(shù)[體質(zhì)指數(shù)=體質(zhì)量(kg)÷身高(m)的平方]、病程、家族史、吸煙史(根據(jù)世界衛(wèi)生組織定義，吸煙者為一生中連續(xù)或累積吸煙6個(gè)月或以上者)、飲酒史(世界衛(wèi)生組織定義10～30 g/d為適量飲酒)等。

(二)血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)方法 入院時(shí)，采集1 mL外周靜脈血，EDTA-K2抗凝，100 μL EDTA-K2抗凝血加入20 μL的CD16+56+PE并混勻，15～20 min的室溫避光孵育，上機(jī)溶血，使用流式細(xì)胞儀(安捷倫公司，NOVOCYTE D2040R型)測(cè)定CD16+56+水平陽(yáng)性細(xì)胞占比，以代表NK細(xì)胞的含量。

(三)肝纖維化評(píng)估方法及分組 根據(jù)Scheuer評(píng)分系統(tǒng)[6]評(píng)估，進(jìn)行S(纖維化分期，分0～4期)分級(jí)，S0表示無(wú)肝纖維化，S1～S2表示輕度肝纖維化，S3表示中度肝纖維化，S4表示重度肝纖維化。將S0級(jí)無(wú)肝纖維化的患者納入對(duì)照組，其他納入肝纖維化組。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

結(jié) 果

一、肝纖維化結(jié)果及基線資料比較

本研究納入的83例CHB患者中，57例患者發(fā)生肝纖維化，肝纖維化發(fā)生率為68.67%(57/83)。對(duì)比肝纖維化組與對(duì)照組基線資料發(fā)現(xiàn)，兩組性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)、病程、家族史、吸煙史、飲酒史比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；肝纖維化組外周血NK細(xì)胞水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

二、外周血NK細(xì)胞水平影響CHB患者肝纖維化的Logistic回歸分析結(jié)果

(一)二元Logistic回歸分析 將外周血NK細(xì)胞表達(dá)水平作為協(xié)變量，將CHB患者肝纖維化作為因變量(1=發(fā)生肝纖維化，0=無(wú)肝纖維化)，經(jīng)二元Logistic回歸分析結(jié)果顯示，外周血NK細(xì)胞低表達(dá)可能是CHB患者肝纖維化的影響因素(OR>1，P<0.05)。見(jiàn)表2。

(二)多元回歸分析 將外周血NK細(xì)胞表達(dá)水平作為協(xié)變量，將CHB患者肝纖維化作為因變量(1=發(fā)生肝纖維化，0=無(wú)肝纖維化)，同時(shí)將其他基線資料(性別、年齡等)納入，校正其他基線資料帶來(lái)的影響并構(gòu)建多元回歸模型行多因素分析發(fā)現(xiàn)，外周血NK細(xì)胞低表達(dá)是CHB患者肝纖維化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(OR>1，P<0.05)。見(jiàn)表3。

表1 兩組基線資料比較

表2 外周血NK細(xì)胞水平影響CHB患者肝纖維化二元Logistic回歸分析結(jié)果

表3 外周血NK細(xì)胞水平影響CHB患者肝纖維化二元Logistic回歸分析結(jié)果

三、外周血NK細(xì)胞水平預(yù)測(cè)CHB患者肝纖維化風(fēng)險(xiǎn)價(jià)值

繪制ROC曲線(圖1)發(fā)現(xiàn)，外周血NK細(xì)胞預(yù)測(cè)CHB患者肝纖維化風(fēng)險(xiǎn)的AUC為0.842(95%CI：0.759～0.924，P<0.001)，有一定預(yù)測(cè)價(jià)值，最佳閾值9.12%、特異度0.731、靈敏度0.985、約登指數(shù)0.716。

圖1 外周血NK細(xì)胞水平預(yù)測(cè)CHB患者肝纖維化風(fēng)險(xiǎn)的ROC曲線圖

討 論

研究表明，CHB患者發(fā)生肝纖維化風(fēng)險(xiǎn)高[7]。本研究結(jié)果顯示，83例CHB患者中57例患者發(fā)生肝纖維化，肝纖維化發(fā)生率為68.67%(57/83)，與上述研究結(jié)論一致。NK細(xì)胞是人體免疫系統(tǒng)中的效應(yīng)細(xì)胞，在抗感染免疫方面具有重要作用。以往通常認(rèn)為，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)是導(dǎo)致CHB患者肝損傷和肝纖維化進(jìn)展的重要因素，但近年來(lái)研究表明，NK細(xì)胞對(duì)肝臟疾病的發(fā)展具有推進(jìn)作用，與CHB關(guān)系緊密[8]。由此推測(cè)，NK細(xì)胞表達(dá)水平的高低可能也會(huì)對(duì)CHB患者肝纖維化造成影響。本研究初步對(duì)比肝纖維化組與對(duì)照組基線資料發(fā)現(xiàn)，肝纖維化組外周血NK細(xì)胞表達(dá)水平低于對(duì)照組。分析原因可能為：NK細(xì)胞水平的波動(dòng)可能受乙肝病毒所影響，引起NK細(xì)胞再分布，表現(xiàn)為NK細(xì)胞選擇性集中于肝臟內(nèi)，減少了外周血中的NK細(xì)胞含量[9-10]。CHB伴隨炎癥反應(yīng)，隨著炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展，部分炎性因子遷移至肝臟，肝臟受到侵犯后大量募集NK細(xì)胞，造成外周血NK細(xì)胞水平降低[11-12]。而發(fā)生肝纖維化的CHB患者相對(duì)炎癥反應(yīng)更為嚴(yán)重，因此肝纖維化組患者外周血NK細(xì)胞水平低于無(wú)肝纖維化的患者[13]。

本研究初步對(duì)比了肝纖維化患者與無(wú)肝纖維化患者基線資料及外周血NK細(xì)胞水平，并做二元Logistic回歸分析后建立多元回歸模型行多因素分析，結(jié)果顯示，外周血NK細(xì)胞低表達(dá)可影響CHB患者肝纖維化，且經(jīng)ROC檢驗(yàn)證實(shí)，外周血NK細(xì)胞含量用于預(yù)測(cè)CHB患者肝纖維化的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)均有理想價(jià)值。分析原因可能為：NK細(xì)胞對(duì)肝炎具有抗病毒感染的功能，通過(guò)合成細(xì)胞毒物質(zhì)，如顆粒酶，參與溶解和破壞靶細(xì)胞并達(dá)到殺傷作用[14]。NK細(xì)胞是淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的一種特異性細(xì)胞，在外周血中表達(dá)水平降低是由于其集中于肝臟中，引起NK細(xì)胞在肝臟浸潤(rùn)中過(guò)度應(yīng)答反應(yīng)，造成肝細(xì)胞破壞和肝臟損傷，導(dǎo)致肝細(xì)胞的壞死，從而引起肝纖維化[15-16]。同時(shí)，NK細(xì)胞在肝臟內(nèi)聚集后，NK細(xì)胞表達(dá)活性的增加會(huì)造成腫瘤壞死因子-α、γ干擾素的釋放，進(jìn)一步加重炎性反應(yīng)，誘導(dǎo)肝纖維化的發(fā)生發(fā)展[18]。因此，外周血NK細(xì)胞表達(dá)對(duì)CHB患者的肝纖維化發(fā)生有一定影響。

綜上所述，外周血NK細(xì)胞低表達(dá)可能與CHB進(jìn)程相關(guān)，影響肝纖維化發(fā)生，早期檢測(cè)外周血NK細(xì)胞水平可預(yù)測(cè)CHB患者與肝纖維化風(fēng)險(xiǎn)并指導(dǎo)早期干預(yù)，可能對(duì)改善患者預(yù)后有積極意義。