程歡歡，宋 輝，劉博男，汲晨鋒，孫向明，李文蘭*，曲中原*

1哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院；2哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥物工程技術(shù)研究中心，哈爾濱 150076

胃癌是全球常見的惡性腫瘤，預(yù)后相對(duì)較差，嚴(yán)重威脅人類生命健康。超過70%的胃癌新發(fā)病例發(fā)生在發(fā)展中國家，約50%的病例發(fā)生在亞洲東部，主要集中在中國，胃癌的發(fā)病率和病死率均居中國惡性腫瘤的第2位，且發(fā)病率尚未見下降趨勢(shì)，是危害中國居民健康的主要疾病[1,2]。

樺褐孔菌(Inonotusobliquus，IO)為多孔菌科的藥用真菌，其資源主要分布于我國東部地區(qū)，以吉林、黑龍江為主。經(jīng)臨床藥理研究證實(shí)，樺褐孔菌具有廣泛的藥理作用，包括：降血糖、降血脂、抗腫瘤、抗病毒、護(hù)肝作用等。16世紀(jì)時(shí)，樺褐孔菌在我國東北民間就屬于藥食兩用的佳品[3]。研究發(fā)現(xiàn)，晚期胃癌患者服用樺褐孔菌后，飯量增加、情緒提升、還可以降低病人的疼痛感[4]。研究表明，羊毛甾烷型四環(huán)三萜類化合物是樺褐孔菌的主要活性成分，質(zhì)量分?jǐn)?shù)占比約1.5%，主要包括樺褐孔菌醇、羊毛甾醇、栓菌酸等[5]。因其具有顯著的抗腫瘤作用，樺褐孔菌三萜類化合物(triterpenoids ofInonotusobliquus，IOT)可以有效的抑制腫瘤細(xì)胞增殖。本課題組前期對(duì)樺褐孔菌三萜類成分提取純化工藝及體外抗腫瘤作用進(jìn)行研究，結(jié)果表明，三萜濃度為20、50、100 μg/mL的樺褐孔菌分別作用于人胃癌細(xì)胞株24和48 h，細(xì)胞生長抑制率分別為27.80%、39.20%、58.41%以及42.50%、52.70%、66.14%，純化后的樺褐孔菌三萜具有顯著抑制人胃癌細(xì)胞株生長作用(P<0.05)[6]，但樺褐孔菌三萜抗胃癌的作用靶點(diǎn)及機(jī)制尚未明確。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于多學(xué)科理論從多角度對(duì)藥物干預(yù)疾病作用靶點(diǎn)及機(jī)制進(jìn)行分析的新方法。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，篩選樺褐孔菌三萜類活性化合物作用于胃癌的潛在靶點(diǎn)，發(fā)掘其分子機(jī)制，構(gòu)建其抗胃癌多靶點(diǎn)、多通路的藥理網(wǎng)絡(luò)，并進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證，為進(jìn)一步研究樺褐孔菌三萜類成分抗胃癌的作用機(jī)制及藥物開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)[7]。

1 資料與方法

1.1 候選成分的獲取與活性成分的篩選

根據(jù)查閱文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)樺褐孔菌總?cè)祁惓煞诌M(jìn)行搜集，列為候選化合物?；赥CMSP數(shù)據(jù)庫篩選樺褐孔菌總?cè)频幕钚猿煞郑O(shè)置閾值：口服利用度(oral bioavailability，OB)≥30%、類藥性(drug-like，DL)≥0.18；利用ChemDraw軟件畫出候選成分的結(jié)構(gòu)式，將其“Sdf”格式文件上傳至SwissADME平臺(tái)進(jìn)行預(yù)測(cè)。首先，腸胃吸收為“High”，說明化合物具有較好的口服利用度。其次，類藥五原則(Lipinski、Ghose、Veber、Egan、Muegge)中有大于或等于2個(gè)結(jié)果為“Yes”。同時(shí)滿足以上兩個(gè)條件的化合物可以納入活性化合物范圍中。查閱文獻(xiàn)補(bǔ)充與抗胃癌相關(guān)的活性顯著的化合物，最終匯總確定樺褐孔菌三萜類化合物發(fā)揮抗胃癌的活性成分。

1.2 活性成分作用靶標(biāo)及胃癌靶標(biāo)的獲取

在TCMSP、ETCM數(shù)據(jù)庫中檢索獲取樺褐孔菌三萜類活性成分相關(guān)靶點(diǎn)信息，再將活性化合物的“Sdf”格式文件導(dǎo)入SwissTargetPrediction數(shù)據(jù)庫、STITCH數(shù)據(jù)庫、PharmMapper數(shù)據(jù)庫中，設(shè)置屬性為“Homo sapiens”，利用UniProt數(shù)據(jù)庫將靶基因名稱校正為官方名稱，得到樺褐孔菌三萜類活性成分的預(yù)測(cè)靶點(diǎn)。去重，整合得到樺褐孔菌三萜類活性成分靶點(diǎn)信息庫。利用GeneCards、DisGeNET、OMIM數(shù)據(jù)庫，檢索關(guān)鍵詞Gastric cancer，篩選、下載與胃癌相關(guān)的靶標(biāo)，去掉重復(fù)的靶標(biāo)。疾病靶點(diǎn)與活性成分靶點(diǎn)進(jìn)行比對(duì)，篩選出樺褐孔菌三萜活性成分與胃癌的共同靶標(biāo)。

1.3 “活性成分-靶標(biāo)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

基于Cytoscape 3.7.1軟件，將“1.1”項(xiàng)得到的樺褐孔菌三萜的活性成分、“1.2”項(xiàng)收集的活性成分抗胃癌的靶標(biāo)導(dǎo)入，構(gòu)建“活性成分-靶標(biāo)”關(guān)系網(wǎng)絡(luò)，在網(wǎng)絡(luò)圖中，“節(jié)點(diǎn)(node)”代表化合物和靶點(diǎn)，“邊(edge)”代表2個(gè)節(jié)點(diǎn)之間的相互作用。

1.4 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

基于STRING數(shù)據(jù)庫，將“1.2”項(xiàng)樺褐孔菌三萜類活性成分抗胃癌靶標(biāo)導(dǎo)入，說明蛋白質(zhì)之間的相互作用關(guān)系。設(shè)置“Homo Sapiens”物種，隱藏游離靶標(biāo)，設(shè)定蛋白相互作用分值為0.4，下載為TSV格式，導(dǎo)入Cytoscape 3.7.1，獲取相應(yīng)的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系。

1.5 GO富集分析和KEGG通路富集分析

將樺褐孔菌三萜類活性成分抗胃癌靶標(biāo)導(dǎo)入DAVID 6.8數(shù)據(jù)庫，最終獲得作用靶標(biāo)的GO富集分析及KEGG通路富集分析，獲取與胃癌疾病相關(guān)的生物過程及通路，利用微生信平臺(tái)對(duì)通路進(jìn)行可視化分析。

1.6 成分-靶點(diǎn)分子對(duì)接

基于Chem3D 18.0軟件，將“1.1”項(xiàng)下篩選的主要活性成分“Sdf”格式導(dǎo)入進(jìn)行優(yōu)化，利用Open Babel為分子結(jié)構(gòu)加氫原子，選擇MMFF94力場(chǎng)加電荷、能量最小化，用AutoDcok Tools將化合物轉(zhuǎn)化為PDBQT格式文件；從PDB網(wǎng)站下載需要對(duì)接的篩選的主要蛋白晶體結(jié)構(gòu)，其中靶點(diǎn)蛋白的選擇遵循以下原則：①人源蛋白；②選擇分辨率高的；③優(yōu)先選擇具有原始配體的。利用AutoDock Tools處理靶蛋白和小分子配體，導(dǎo)出PDBQT格式文件；采用Vina依次將活性成分與靶蛋白進(jìn)行對(duì)接打分，并做熱圖分析?；钚猿煞峙c靶蛋白的對(duì)接模式，利用PyMol軟件進(jìn)行分析作圖。以上所用網(wǎng)址詳見表1。

表1 數(shù)據(jù)庫及分析平臺(tái)Table 1 Database and Analysis Platform

2 結(jié)果

2.1 樺褐孔菌三萜類活性成分分析

通過查閱文獻(xiàn)收集得到樺褐孔菌總?cè)祁惓煞止?1個(gè)[8,9]，經(jīng)篩選其中活性成分共24個(gè)(見圖1)。檢索TCMSP得到3個(gè)活性成分：栓菌酸(trametenolic acid)、白樺脂酸(betulinic acid)、羊毛甾醇(lanosterol)；通過SwissADME平臺(tái)篩選，得到符合條件的活性成分有20個(gè)：樺褐孔菌萜A(inoterpene A)、樺褐孔菌萜B(inoterpene B)等；此外通過查閱文獻(xiàn)補(bǔ)充得到與治療胃癌高度相關(guān)的化合物1個(gè)：樺褐孔菌醇(inotodiol)[10]，樺褐孔菌三萜類活性成分基本信息見表2。

表2 樺褐孔菌三萜類活性化合物信息Table 2 Information of triterpenoid active compounds of IO

續(xù)表2(Continued Tab.2)

圖1 樺褐孔菌三萜類成分Fig.1 Components of IOT注：藍(lán)色：樺褐孔菌三萜類活性成分，紫色：樺褐孔菌三萜類非活性成分。A1：文獻(xiàn)補(bǔ)充的活性成分；A2：SwissADME平臺(tái)預(yù)測(cè)的活性成 分；A3：TCMSP數(shù)據(jù)庫篩選的活性成分。Note:Blue:Triterpenoid active components of IO;Purple:Triterpenoid inactive components of IO.A1: Active ingredients supplemented by literature;A2:Active ingredients predicted by SwissADME platform;A3:Active ingredients screened by TCMSP database.

2.2 潛在靶標(biāo)預(yù)測(cè)

在TCMSP、ETCM數(shù)據(jù)庫中檢索樺褐孔菌三萜類活性成分的潛在靶標(biāo)，再通過SwissTargetPrediction數(shù)據(jù)庫(P>0.9)、PharmMapper數(shù)據(jù)庫(P>0.9)、STITCH數(shù)據(jù)庫，依次對(duì)活性化合物進(jìn)行目標(biāo)靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)，獲取靶點(diǎn)共128個(gè)。GeneCards、OMIM、DisGeNET數(shù)據(jù)庫中獲得與胃癌相關(guān)靶標(biāo)共3 020個(gè)。將活性成分對(duì)應(yīng)的潛在靶標(biāo)與胃癌相關(guān)靶標(biāo)進(jìn)行比較，篩選出樺褐孔菌三萜類活性成分抗胃癌的57個(gè)潛在作用靶標(biāo)。淡黃色為活性成分作用靶標(biāo)，綠色為疾病作用靶標(biāo)，重疊部分為活性成分作用于疾病的相關(guān)靶標(biāo)(見圖2)。

圖2 藥物-疾病靶標(biāo)Venn分析圖Fig.2 Venn analysis diagram of drug-disease targets

2.3 “活性成分-靶標(biāo)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將樺褐孔菌三萜類活性成分和靶標(biāo)等信息輸入Cytoscape 3.7.1軟件中，構(gòu)建樺褐孔菌“三萜類活性成分-靶標(biāo)”網(wǎng)絡(luò)圖，由圖3可看出，黃色代表樺褐孔菌三萜類成分潛在靶標(biāo)，綠色代表樺褐孔菌三萜類活性成分。活性成分節(jié)點(diǎn)24個(gè)，靶點(diǎn)蛋白靶標(biāo)節(jié)點(diǎn)128個(gè)，節(jié)點(diǎn)間相互作用關(guān)系的邊689條。

圖3 活性成分-靶標(biāo)網(wǎng)絡(luò)圖Fig.3 Active ingredient-target network diagram

2.4 靶標(biāo)間相互作用網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

由圖4可知，圓形節(jié)點(diǎn)代表靶標(biāo)，節(jié)點(diǎn)大小表示靶標(biāo)間相互作用程度。藍(lán)色、黃色、橙色節(jié)點(diǎn)分別表示靶標(biāo)間相互作用程度高、中、低。有1個(gè)與其他蛋白無相互作用關(guān)系，經(jīng)過篩選得到靶標(biāo)間相互作用網(wǎng)絡(luò)共有節(jié)點(diǎn)56個(gè)，邊266條。樺褐孔菌三萜類活性成分抗胃癌可能與ALB、CASP3、MAPK1、ESR1、MAPK8等靶標(biāo)密切相關(guān)。

圖4 樺褐孔菌三萜抗胃癌作用潛在靶標(biāo)間相互作用網(wǎng)絡(luò)圖Fig.4 Network diagram of interaction between potential targets of triterpenes of IO against gastric cancer

2.5 樺褐孔菌抗胃癌靶標(biāo)的GO功能分析及KEGG通路富集分析

將藥物-疾病交集靶標(biāo)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫后，得到GO功能分析表明：56個(gè)藥物-疾病交集靶標(biāo)影響了41個(gè)生物學(xué)過程、39個(gè)分子功能、11個(gè)細(xì)胞組成(P<0.05)。分別選取三者中最為顯著的10個(gè)過程繪制GO功能分析圖(見圖5)。樺褐孔菌三萜類活性成分通過改變DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄激活因子活性、RNA聚合酶II特異性、氧化還原過程、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方式發(fā)揮藥效；KEGG分析富集得到41條通路(P<0.05)，選取前30條通路進(jìn)行可視化，如圖6所示。根據(jù)富集分析研究得出：TNF信號(hào)通路、癌癥信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、Toll樣信號(hào)通路與樺褐孔菌三萜類活性成分抗胃癌的作用機(jī)制密切相關(guān)。前30條信號(hào)通路的活性成分-靶點(diǎn)-通路圖見圖7。

圖5 GO功能分析Fig.5 GO function analysis

圖6 KEGG富集分析圖(前30條)Fig.6 KEGG enrichment analysis chart (Top 30)

圖7 活性成分-靶點(diǎn)-通路相互作用網(wǎng)絡(luò)圖Fig.7 Network diagram of active ingredient-target-pathway interaction注：黃色：通路；粉色：活性成分；紫色：潛在靶點(diǎn)。Note:Yellow:Pathway;Pink:Active ingredients;Purple:Potential targets.

2.6 活性成分與核心靶點(diǎn)的分子對(duì)接

24個(gè)活性成分與5個(gè)核心靶點(diǎn)蛋白依次分子對(duì)接，小分子與蛋白質(zhì)結(jié)合作用的強(qiáng)弱用結(jié)合能評(píng)價(jià)。若值小于0，說明二者能自發(fā)結(jié)合，結(jié)合能越低，代表越易結(jié)合。經(jīng)PyRx對(duì)接，得到的數(shù)據(jù)經(jīng)過熱圖分析(見圖8)。據(jù)圖8對(duì)接結(jié)果顯示，MAPK1、MAPK8、NFKB1、CASP3與化合物白樺脂酸的結(jié)合能均小于-7.0 kJ/mol，ALB與化合物栓菌酸的結(jié)合能為-6.1 kJ/mol，具有強(qiáng)烈的結(jié)合活性。核心靶點(diǎn)蛋白質(zhì)選擇結(jié)合能最優(yōu)的化合物分析結(jié)合模式，具體對(duì)接過程見圖9。以上對(duì)接結(jié)果充分說明樺褐孔菌三萜類活性成分與胃癌中關(guān)鍵核心靶點(diǎn)有著良好的結(jié)合作用。

圖8 分子對(duì)接分?jǐn)?shù)的熱圖分析Fig.8 Thermogram analysis of molecular docking fraction

3 討論

胃癌是發(fā)病率居第二位的惡性腫瘤，已成為需要迫切解決的公共衛(wèi)生問題。目前更多的人開始關(guān)注天然食品和保健藥物，樺褐孔菌被贊譽(yù)為“西伯利亞靈芝”，因它能抑制癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、降低癌癥復(fù)發(fā)的可能性、提升癌癥患者的耐受性、減少放療化療帶來的不適感[11]，倍受研究者青睞。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接的理論基礎(chǔ)，借助有關(guān)數(shù)據(jù)庫及繪圖軟件等工具對(duì)樺褐孔菌三萜類成分抗胃癌的作用機(jī)制進(jìn)行研究。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果表明，樺褐孔菌三萜類活性成分包括：樺褐孔菌醇、白樺脂酸、栓菌酸、羊毛甾醇等24種成分。研究表明白樺脂酸對(duì)多種腫瘤細(xì)胞有明顯的抗腫瘤活性，可通過激活NF-κB起到抗腫瘤作用，且無毒副作用，還有研究表明白樺脂酸可能是通過上調(diào)Caspase-3、Cyto-3蛋白的表達(dá)來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[12]。羊毛甾醇、栓菌酸均可通過阻斷G0/G1細(xì)胞周期，降低癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，進(jìn)而發(fā)揮抗腫瘤活性的作用[13]。栓菌酸抗腫瘤的作用與調(diào)控P糖蛋白有關(guān)[14]；Nomura等[15]發(fā)現(xiàn)樺褐孔菌醇(inotodiol)可激活凋亡過程中的關(guān)鍵水解酶，促進(jìn)PARP和Caspase-3蛋白的裂解，啟動(dòng)凋亡信號(hào)，促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡。樺褐孔菌醇可上調(diào)Bax蛋白表達(dá)、下調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

“活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)和PPI蛋白互作網(wǎng)絡(luò)中共篩選出5個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)，包括MAPK1、ALB、NFKB1、MAPK8、CASP3。研究表明，血清白蛋白(ALB)作為目前應(yīng)用反映營養(yǎng)狀況指標(biāo)之一，是血清蛋白質(zhì)中存在最多、功能最重要的成分，是人體內(nèi)重要的營養(yǎng)物質(zhì)，對(duì)胃壁具有保護(hù)作用。其血漿水平降低，表明胃腸道腫瘤術(shù)后患者營養(yǎng)狀況較差。Chen等[16]在研究營養(yǎng)干預(yù)在胃腸惡性腫瘤臨床結(jié)果的比較中得出，患者在應(yīng)用營養(yǎng)干預(yù)，接收營養(yǎng)支持治療的病人比沒有營養(yǎng)支持治療的病人血清ALB明顯升高，白蛋白水平可看作為胃癌術(shù)后獨(dú)立的預(yù)后因素。NFKB1基因在許多基因的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子中，都存在功能性的結(jié)合位點(diǎn)。它可以和TNF-α、IL-6和IL-8等特定位點(diǎn)進(jìn)行特異性結(jié)合，參與炎癥以及免疫反應(yīng)，并介導(dǎo)細(xì)胞黏附、分化、增殖、凋亡等生理過程，并在各種免疫炎癥性疾病和腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。Jiang等[17]發(fā)現(xiàn)，位于NFKB1基因內(nèi)含子區(qū)的多態(tài)位點(diǎn)rs4648127的突變基因型CT與胃癌易感性具有顯著相關(guān)性，且能明顯降低胃癌易感的風(fēng)險(xiǎn)。更有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)[18]，65歲以上的老年人得胃癌幾率增大也與NFKB1啟動(dòng)子基因多態(tài)性(-94插入/缺失ATTG)有著密切的關(guān)系。經(jīng)研究MAPK1可能是胃癌細(xì)胞中miR-217的下游靶基因，miR-217可以靶向結(jié)合MAPK1，降低MAPK1的表達(dá)水平，控制胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲[19]。本研究中發(fā)現(xiàn)樺褐孔菌三萜類成分中的藥效物質(zhì)可以作用于MAPK1、MAPK8、MAPK10、MAPK14，并且參與了MAPK信號(hào)通路，發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)；樺褐孔菌三萜活性化合物的許多抗胃癌靶點(diǎn)中涉及一些凋亡蛋白，如CASP3、CASP7。有研究表明，胃癌的發(fā)病原因與人胃癌組織中CASP3的低表達(dá)、抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)[20]。KEGG通路分析也表明樺褐孔菌三萜類活性成分抗胃癌的作用機(jī)制與癌癥信號(hào)通路有關(guān)。凋亡通路受CASP3、CASP7、CASP9等蛋白的調(diào)控，可直接引起腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制其增殖[21]。TNF信號(hào)通路是最常見的炎癥通路，胞膜上受體蛋白TNFR1可與胞外游離的配體TNF-α結(jié)合，使信號(hào)通路激活，級(jí)聯(lián)反應(yīng)隨之發(fā)生，激活凋亡蛋白Caspase-3，引發(fā)一系列炎癥反應(yīng)，最終使細(xì)胞凋亡[22]。研究發(fā)現(xiàn)樺褐孔菌的水提物可以使TNF-α和IL-4水平降低，并可顯著降低信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子STAT1與轉(zhuǎn)錄激活因子STAT6的表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞凋亡。Toll樣受體信號(hào)通路在胃癌組織TLR4和TLR9在基因和蛋白質(zhì)水平都有強(qiáng)陽性表達(dá)，通過與配體結(jié)合，激活NF-κB通路，并且調(diào)節(jié)IL-8、IL-1和IL-6等多種促炎癥反應(yīng)基因，故Toll樣受體信號(hào)通路可以通過身體免疫系統(tǒng)的防御機(jī)制，對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移進(jìn)行監(jiān)測(cè)[23]。由此推測(cè)，樺褐孔菌三萜類活性成分可作用于多靶點(diǎn)、多通路，從而發(fā)揮抗胃癌的作用。

分子對(duì)接作為計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)的一種主要方法，目前已被廣泛應(yīng)用于新藥研發(fā)的多個(gè)環(huán)節(jié)。一般Vina將對(duì)接分子和靶點(diǎn)的結(jié)合能劃分為三類：-4.0 kJ/mol<結(jié)合能<0 kJ/mol時(shí)，說明二者有結(jié)合活性；-7.0 kJ/mol<結(jié)合能<-4.0 kJ/mol，意味著有較好的結(jié)合活性；結(jié)合能<-7.0 kJ/mol說明有強(qiáng)烈的結(jié)合活性。根據(jù)對(duì)接結(jié)果可知，白樺脂酸與CASP3、MAPK1、MAPK8、NFKB1各蛋白靶點(diǎn)結(jié)合能小于-7.0 kJ/mol，具有強(qiáng)烈的結(jié)合能力。白樺脂酸與CASP3活性位點(diǎn)殘基TYR204(C)、LEU168(C)、PHE256(C)形成疏水作用，與MAPK8活性位點(diǎn)殘基LEU110(A)形成一個(gè)氫鍵，和MET111(A)、ASN114(A)、VAL158(A)等形成疏水作用，此外還與NFKB1活性位點(diǎn)殘基PHE310(A)、LYS275(P)形成疏水作用。栓菌酸與ALB蛋白靶點(diǎn)結(jié)合能小于-4.0 kJ/mol，具有較好的結(jié)合能力，且與活性位點(diǎn)殘基ILE523(A)、GLU529(A)、LYS519(A)等形成疏水作用。21，24-環(huán)戊二烯羊毛甾-3β，21，25-三羥基-8-烯與MAPK1活性位點(diǎn)殘基MET108(A)形成兩個(gè)氫鍵，與ALA52(A)、VAL39(A)、TYR36(A)等形成疏水作用。對(duì)關(guān)鍵成分與各個(gè)蛋白質(zhì)的結(jié)合模型進(jìn)行分析可知，各關(guān)鍵活性成分均進(jìn)入各個(gè)蛋白晶體的活性位點(diǎn)，并與活性位點(diǎn)形成氫鍵或疏水作用。因此推測(cè)樺褐孔菌三萜類成分可能通過以上關(guān)鍵蛋白，調(diào)節(jié)胃癌疾病相關(guān)通路，起到改善和治療胃癌疾病的作用。

綜上，本文通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測(cè)了樺褐孔菌三萜類活性成分抗胃癌的復(fù)雜分子網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，結(jié)果表明樺褐孔菌三萜類成分抗胃癌的活性成分可能是：樺褐孔菌醇、白樺脂酸、羊毛甾醇、栓菌酸等，涉及的關(guān)鍵靶點(diǎn)：ALB、MAPK1、NFKB1、MAPK8、CASP3等，參與的主要信號(hào)通路：TNF信號(hào)通路、癌癥信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、Toll樣受體信號(hào)通路等。最后通過分子對(duì)接驗(yàn)證得出5個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白與24個(gè)活性成分具有良好的結(jié)合作用。本文為相關(guān)作用機(jī)制的研究提供了思路和方法，為后續(xù)深入探討樺褐孔菌三萜類成分抗胃癌的作用機(jī)制提供了依據(jù)。