梁瑞峰，葛文靜，李兵杰，宋獻(xiàn)美，張艷燕，王慧森，李更生*

1河南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所，鄭州 450004；2河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，鄭州 450046；3河南醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校檢驗(yàn)系，鄭州 451191

腹瀉是一組由多病原、多因素而導(dǎo)致大便次數(shù)增多、性狀稀薄或呈水樣，常伴有腹痛、嘔吐、發(fā)熱等臨床癥狀及不同程度水液、電解質(zhì)紊亂的消化系統(tǒng)疾病，流行病學(xué)研究顯示每年全球人群腹瀉發(fā)生率約為5%[1]，也是導(dǎo)致5歲以下兒童死亡的第2大原因[2]。腸道是水液轉(zhuǎn)運(yùn)代謝的主要部位，每天大約有9 L的水在腸道分泌和吸收，對維持體內(nèi)水液平衡和消化吸收功能具有重要意義，腸道對水的重吸收下降是產(chǎn)生腹瀉的重要原因。結(jié)腸對水的重吸收是逆梯度的主動吸收過程，主要依靠水通道蛋白(aquaporin，AQP)的轉(zhuǎn)運(yùn)功能來完成。AQP是負(fù)責(zé)水分子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的主要蛋白，可高效、有選擇性地轉(zhuǎn)運(yùn)水分子以維持細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境的水液平衡。腸道中表達(dá)至少11種不同亞型的AQP，其不僅是腸道水分子吸收代謝的重要載體，還參與了腸內(nèi)黏液、營養(yǎng)液的分泌和腸道細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境的穩(wěn)態(tài)維持，在一些腸神經(jīng)功能調(diào)控中具有重要作用。AQP在腸道表達(dá)異?？稍斐赡c道環(huán)境紊亂，導(dǎo)致水分子吸收減少，使水分子大量聚集在腸腔中，引起腹瀉的發(fā)生[3]。隨著對AQP的研究不斷深入，AQP有望成為許多與水液代謝轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)的腸道疾病的防治靶點(diǎn)[4]。

腹瀉屬中醫(yī)學(xué)“泄瀉”范疇，中醫(yī)認(rèn)為“濕勝則濡瀉”“無濕不成瀉”，濕邪為本病病機(jī)的關(guān)鍵。風(fēng)藥是具有祛風(fēng)勝濕、升發(fā)清陽等作用的一類藥物，以其辛香溫燥之性治療泄瀉作用顯著[5]。防風(fēng)是風(fēng)藥的典型代表，為傘形科植物防風(fēng)Saposhnikoviadivaricata(Trucz.) Schischk.的干燥根，具有祛風(fēng)解表、勝濕止痛的功效，并且以其升清燥濕之性用于脾虛濕勝、清陽不升所致的泄瀉。防風(fēng)治療腹瀉的臨床療效確切，但其對腹瀉大鼠腸道AQP的影響未見報(bào)道。本研究采用番瀉葉灌胃建立大鼠腹瀉模型，通過觀察防風(fēng)及其不同極性提取部位對腹瀉大鼠體質(zhì)量、腹瀉指數(shù)、電解質(zhì)、二胺氧化酶(diamine oxidase，DAO)、Na+-K+-ATPase、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和結(jié)腸組織中AQP-3、AQP-4、AQP-8和AQP-9蛋白表達(dá)的影響，探討防風(fēng)止瀉的可能作用機(jī)制，有助于拓展風(fēng)藥的臨床應(yīng)用，也為開發(fā)相關(guān)藥物提供參考。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

SPF級SD大鼠80只，雌雄各半，體重180～200 g，由河南省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號SCXK(豫)2015-0004，飼養(yǎng)于河南省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動物中心，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由飲食飲水。本研究經(jīng)河南省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動物倫理委員會批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號HNZYYYJ2019-0034)，符合實(shí)驗(yàn)動物倫理學(xué)要求。

1.2 藥品與試劑

防風(fēng)、番瀉葉購自亳州市張仲景中藥飲片有限責(zé)任公司，經(jīng)河南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所王慧森副研究員鑒定，分別為傘形科植物防風(fēng)Saposhnikoviadivaricata(Trucz.) Schischk.的干燥根和豆科植物狹葉番瀉CassiaangustifoliaVahl的干燥小葉；復(fù)方地芬諾酯片(安陽市華安藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號：20190402)；鈉、鉀、氯、Na+-K+-ATPase測定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號分別為20191107、20191213、20191204、20191219)；腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、二胺氧化酶(DAO)試劑盒購自北京索萊寶科技有限公司，批號分別為20191023、20191101；水通道蛋白-3(AQP-3)、AQP-4、AQP-8、AQP-9、β-actin抗體和羊抗兔IgG二抗(北京博奧森生物技術(shù)有限公司，批號分別為AH06123353、AI10268996、AH09112517、AE11369128、AD10061684、AC20012695)；其他試劑均為分析純。

1.3 儀器

Synergy NEO全功能酶標(biāo)儀(美國Bio-Tek公司)；T18型勻漿機(jī)(德國IKA公司)；2K15高速冷凍離心機(jī)(德國Sigma公司)；CX31顯微鏡(日本Olympus公司)；DYCZ-24DN垂直電泳儀、DYCZ-40D轉(zhuǎn)印電泳儀(北京六一生物科技有限公司)；FluorChem R凝膠成像分析儀(美國ProteinSimple公司)。

2 方法

2.1 藥物制備

防風(fēng)總提取物：防風(fēng)粉碎過40目篩，稱取500 g藥材粉末，加入8倍量95%乙醇加熱回流提取2次，每次1.5 h，合并濾液，回收溶劑至無乙醇?xì)馕?，得乙醇提取?7.64 g。剩余殘?jiān)?倍量蒸餾水煎煮2次，每次1.0 h，過濾合并，濃縮干燥后得水提取物35.89 g。將乙醇提取物與水提取物混合，作為防風(fēng)總提取物，取一部分用于制備防風(fēng)不同極性部位，其余實(shí)驗(yàn)時(shí)用2%吐溫-80配制成含生藥量2.5 g/mL的溶液。

防風(fēng)不同極性部位的制備：稱取防風(fēng)總提取物用適量蒸餾水制成混懸液，然后依次用等體積的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次，分別合并各部分萃取液，減壓回收溶劑得石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及水部位。實(shí)驗(yàn)時(shí)用2%吐溫-80配制成含生藥量2.5 g/mL的溶液。

番瀉葉溶液的制備：番瀉葉加蒸餾水浸泡30 min，煎煮10 min，減壓濃縮至生藥含量0.5 g/mL，4 ℃保存。

2.2 分組造模及給藥

80只SD大鼠，雌雄各半，適應(yīng)性飼養(yǎng)5天后按體質(zhì)量隨機(jī)分為正常組(normal，Nor)、模型組(model，Mod)、地芬諾酯組(diphenoxylate，Dip，3 mg/kg)、防風(fēng)石油醚萃取部位組(petroleum ether fraction，PEF)、乙酸乙酯萃取部位組(ethyl acetate fraction，EAF)、正丁醇萃取部位組(n-butanol fraction，NBF)、水溶性部位組(aqueous fraction，AF)和總提取物組(total extract，TE，按人與大鼠等效劑量的5倍確定防風(fēng)不同部位給藥劑量，均按生藥量為5.0 g/kg)，每組10只。除正常組外其余各組每天灌胃番瀉葉水煎液20 mL/kg[6]，連續(xù)7天，于造模第8天開始，各組大鼠上午灌胃番瀉葉水煎液，下午灌胃相應(yīng)藥物，正常組與模型組給予等體積的2%吐溫-80溶液，連續(xù)給藥7天。

2.3 檢測指標(biāo)

2.3.1 一般情況

造模前、給藥前、末次給藥后分別觀察大鼠精神狀態(tài)和活動情況、毛色，稱量體質(zhì)量并記錄。

2.3.2 腹瀉指數(shù)

給藥前、末次給藥后大鼠單只單籠飼養(yǎng)，籠底鋪好濾紙，4 h后取出濾紙觀察糞便并計(jì)算腹瀉指數(shù)。腹瀉指數(shù)=稀便率(每只大鼠所排稀便數(shù)與總便數(shù)之比)×平均稀便級(每只大鼠所有稀便級數(shù)總和與稀便數(shù)之比)。稀便級根據(jù)濾紙上污跡范圍的大小分為4級：1級，污跡直徑<1 cm；2級，污跡直徑1～1.9 cm；3級，污跡直徑2～3 cm；4級，污跡直徑>3 cm。

2.3.3 大鼠血清中電解質(zhì)含量

末次給藥后24 h，10%水合氯醛麻醉大鼠，腹主動脈取血，在3 000 rpm離心分離血清，比濁法檢測大鼠血清中鈉離子(Na+)含量，微板法檢測大鼠血清中鉀離子(K+)、氯離子(Cl-)含量。

2.3.4 大鼠DAO、TNF-α、Na+-K+-ATPase的變化

取血離心分離血清，微量法檢測大鼠血清中DAO活性，酶聯(lián)免疫吸附法測定TNF-α的含量。取血后快速分離大鼠結(jié)腸組織，分為兩部分，取一部分精確稱重后加生理鹽水冰浴條件下制成10%勻漿，在4 ℃、12 000 rpm離心10 min，取上清，按照試劑盒說明書微量法檢測大鼠結(jié)腸中Na+-K+-ATPase活性。

2.3.5 結(jié)腸組織病理學(xué)變化

取一部分結(jié)腸用4%多聚甲醛溶液固定，常規(guī)脫水、包埋、切片、HE染色，顯微鏡下觀察。

2.3.6 Western blot檢測結(jié)腸中不同亞型AQP的表達(dá)

稱取大鼠結(jié)腸組織，RIPA裂解液提取組織蛋白，BCA法測定蛋白濃度，煮沸變性后取等量蛋白經(jīng)10% SDS-PAGE電泳分離，然后轉(zhuǎn)移至PVDF膜，5%的脫脂奶粉室溫封閉1 h，棄封閉液，漂洗3次后分別加AQP-3(1∶800)、AQP-4(1∶600)、AQP-8(1∶600)、AQP-9(1∶600)及內(nèi)參β-actin一抗(1∶1 000)，4 ℃過夜，漂洗后滴加二抗室溫孵育1 h，ECL顯色液曝光，拍照，Image J軟件對蛋白條帶進(jìn)行分析，以目的條帶/β-actin灰度值分析結(jié)腸中各亞型AQP的蛋白表達(dá)。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 大鼠一般情況

正常組大鼠活動自如，毛發(fā)光澤正常，飲食飲水及大小便如常，體質(zhì)量增長規(guī)律。除正常組外其他組大鼠造模后精神萎靡，毛發(fā)干枯光澤明顯變差，活動減少，體質(zhì)量明顯降低，造模后第5天各組大鼠腹瀉率已達(dá)100%，大便稀軟不成形，次數(shù)增加，肛周污濁。給藥后地芬諾酯組、防風(fēng)石油醚組、正丁醇組和總提取物組大鼠精神狀態(tài)、體質(zhì)量和腹瀉程度有不同程度改善，而防風(fēng)乙酸乙酯組和水部位組大鼠體質(zhì)量和精神狀態(tài)恢復(fù)不明顯(見表1)。

表1 不同時(shí)間各組大鼠體質(zhì)量變化Table 1 Body weight of rats in each group at different = 10)

3.2 腹瀉指數(shù)

與正常組大鼠相比，給藥前各組大鼠腹瀉指數(shù)顯著增高(P< 0.01)，與模型組比較，給藥7天后地芬諾酯組、防風(fēng)石油醚部位組、正丁醇部位組和總提取物組大鼠腹瀉指數(shù)明顯降低(P< 0.05或P< 0.01)，防風(fēng)乙酸乙酯部位組和水部位組大鼠的腹瀉指數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見表2)。

表2 不同時(shí)間各組大鼠的腹瀉指數(shù)Table 2 Diarrhea index of rats in each group at different = 10)

3.3 防風(fēng)不同極性部位對腹瀉大鼠血清電解質(zhì)的影響

與正常組大鼠比較，模型組大鼠血清中Na+、K+和Cl-濃度顯著降低(P< 0.05或P< 0.01)。與模型組比較，地芬諾酯組大鼠血清中Na+、K+和Cl-濃度明顯升高(P< 0.05或P< 0.01)，防風(fēng)正丁醇部位組和總提取物組大鼠血清中Na+和K+濃度明顯增加(P< 0.05或P< 0.01)，防風(fēng)石油醚部位組大鼠血清中Na+濃度升高(P< 0.05)(見表3)。

表3 防風(fēng)不同極性部位對腹瀉大鼠血清電解質(zhì)的影響Table 3 Effects of different polarity extracts of S.divaricata on serum electrolytes in diarrhea = 10)

3.4 防風(fēng)不同極性部位對腹瀉大鼠DAO、TNF-α和Na+-K+-ATPase的影響

與正常組大鼠比較，模型組大鼠血清中DAO和TNF-α水平顯著升高，結(jié)腸組織中Na+-K+-ATPase活性降低(P< 0.01)。與模型組比較，地芬諾酯組、防風(fēng)正丁醇部位組和總提取物組大鼠血清中DAO和TNF-α水平明顯降低，結(jié)腸組織中Na+-K+-ATPase活性增加(P< 0.05或P< 0.01)，防風(fēng)石油醚部位組大鼠血清中TNF-α含量明顯減少，結(jié)腸組織中Na+-K+-ATPase活性升高(P< 0.05)(見表4)。

表4 防風(fēng)不同極性部位對大鼠DAO、TNF-α和Na+-K+-ATPase的影響Table 4 Effects of different polarity extracts of S.divaricata on the levels of DAO,TNF-α and Na+-K+-ATPase in diarrhea rats ± s,n = 10)

3.5 各組大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)變化

正常組大鼠結(jié)腸黏膜上皮結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞排列整齊，未見腸黏膜表皮細(xì)胞壞死脫落，固有層腺體無萎縮，黏膜下層未見明顯改變；模型組大鼠腸黏膜明顯萎縮，絨毛稀疏倒伏不規(guī)整，短縮融合，結(jié)腸隱窩、腺管部分區(qū)域黏膜上皮壞死脫落，可見炎性細(xì)胞浸潤；地芬諾酯組、防風(fēng)石油醚部位組、正丁醇部位組和總提取物組大鼠結(jié)腸黏膜上皮及腺管排列相對整齊，少量炎性細(xì)胞浸潤，絨毛損傷有不同程度改善。防風(fēng)乙酸乙酯部位組和水部位組較模型組病理變化沒有明顯改善(見圖1)。

圖1 各組大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)形態(tài)(HE，×200)Fig.1 Pathomorphology of colonic tissue in rats of each group (HE,×200)注：A：正常組；B：模型組；C：地芬諾酯組；D：石油醚部位組；E：乙酸乙酯部位組；F：正丁醇部位組；G：水部位組；H：總提取物組；下同。Note: A:Nor;B:Mod;C:Dip;D:PEF;E:EAF;F:NBF;G:AF;F:TE;The same below.

3.6 防風(fēng)不同極性部位對腹瀉大鼠結(jié)腸中不同亞型AQP表達(dá)的影響

與正常組比較，模型組大鼠結(jié)腸組織中AQP-3、AQP-4和AQP-8的蛋白表達(dá)明顯減少(P< 0.01)，AQP-9表達(dá)無明顯變化。與模型組比較，地芬諾酯組、防風(fēng)石油醚部位組、正丁醇部位組和總提取物組大鼠結(jié)腸組織AQP-3、AQP-4和AQP-8蛋白表達(dá)增加(P< 0.05或P< 0.01)，地芬諾酯組和防風(fēng)石油醚部位組大鼠結(jié)腸中AQP-9表達(dá)明顯減少(P< 0.05或P< 0.01)(見圖2、表5)。

表5 防風(fēng)不同極性部位對大鼠AQP-3、AQP-4、AQP-8和AQP-9表達(dá)的影響Table 5 Effects of different polarity extracts of S.divaricata on the expressions of AQP-3, AQP-4,AQP-8 and AQP-9 in = 10)

圖2 大鼠結(jié)腸中AQP-3、AQP-4、AQP-8和 AQP-9的表達(dá)情況Fig.2 The expressions of AQP-3,AQP-4, AQP-8 and AQP-9 in colon of rats

4 討論

腹瀉是由于各種因素造成腸道對水分的吸收功能下降或者分泌功能增強(qiáng)而導(dǎo)致大便含水量增加所致的腸道疾病，屬于中醫(yī)學(xué)“泄瀉”范疇，其病機(jī)為脾虛濕盛，運(yùn)化功能失常，致使清濁不分、水濕下注而泄瀉。中醫(yī)認(rèn)為濕勝則濡泄，而風(fēng)能勝濕。風(fēng)藥屬于法象藥理的稱謂，是具有祛風(fēng)勝濕、升發(fā)清陽等作用，用于風(fēng)邪致病的一類藥物。風(fēng)藥氣輕味薄，性味多辛香走竄，因其溫燥之性而可祛濕。AQP是特異性跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)水的蛋白家族，參與水的吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)，與機(jī)體津液的生成、輸布、排泄關(guān)系密切。中醫(yī)認(rèn)為，濕邪致病從其性狀上可分為有形可見的濕病如水腫、泄瀉和潛在不可見的濕病如風(fēng)濕痹痛，但均與津液失衡有關(guān)，AQP可能是津液病證發(fā)生的生物學(xué)基礎(chǔ)[7]?；凇帮L(fēng)能勝濕”的中醫(yī)理論，AQP可能是風(fēng)藥治病的靶點(diǎn)。防風(fēng)為風(fēng)藥的代表藥物，以其升清燥濕之性用于治療泄瀉。因此，明確防風(fēng)不同極性部位的止瀉作用及對結(jié)腸AQP的影響，有助于拓展風(fēng)藥的臨床應(yīng)用，也為開發(fā)相關(guān)藥物提供參考。

番瀉葉是常用的瀉下藥，其主要成分為番瀉苷、大黃酚、蘆薈大黃素及大黃酸等，能使腸蠕動增加，腸道對水等物質(zhì)的消化吸收受抑制，并刺激腸道引起炎癥介質(zhì)合成和釋放，使腸黏膜受損和促進(jìn)大腸排空，瀉下作用顯著，因此被常用于藥理研究中腹瀉動物模型造模藥物[8]。本研究顯示，當(dāng)大鼠灌胃番瀉葉至第5天時(shí)，大鼠腹瀉率已達(dá)100%；第7天時(shí)模型大鼠的體質(zhì)量較正常大鼠明顯下降，腹瀉指數(shù)明顯升高。番瀉葉致瀉大鼠停止灌胃番瀉葉后有可能恢復(fù)正常，因此本實(shí)驗(yàn)在第8天給藥時(shí)的同時(shí)繼續(xù)灌胃番瀉葉，以消除動物腹瀉癥狀自動恢復(fù)的影響。給藥結(jié)束后，地芬諾酯組、防風(fēng)石油醚部位組、正丁醇部位組和總提取物組大鼠體質(zhì)量較模型組大鼠增加，腹瀉指數(shù)降低，表明防風(fēng)具有良好的止瀉作用，石油醚部位、正丁醇部位可能是其止瀉的有效部位。

腹瀉的發(fā)病機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)致病因素激活腺苷酸環(huán)化酶，細(xì)胞內(nèi)ATP轉(zhuǎn)化為cAMP，結(jié)腸Na+-K+-ATPase活性降低，促使腸黏膜細(xì)胞中K+流出，Na+、Cl-等進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，使細(xì)胞腫脹壞死，腸腔中水分明顯增加而引起腹瀉，導(dǎo)致電解質(zhì)紊亂[9]。DAO是存在于腸道黏膜上皮細(xì)胞中的具有高度活性的細(xì)胞內(nèi)酶，當(dāng)腸黏膜細(xì)胞受損時(shí)DAO釋放入血，導(dǎo)致血清DAO活性升高，因此DAO的活性可反映腸道黏膜損傷程度，評價(jià)腸黏膜屏障功能的狀態(tài)[10]。腹瀉發(fā)生時(shí)腸黏膜受到損傷，巨噬細(xì)胞及T細(xì)胞被活化，促進(jìn)TNF-α的合成和釋放，TNF-α進(jìn)一步促進(jìn)炎癥因子(如IL-1、IL-6等)分泌，加重腸黏膜損傷，致其水腫、充血并形成惡性循環(huán)[11]。本研究顯示番瀉葉誘導(dǎo)的腹瀉大鼠血清中Na+、K+和Cl-濃度明顯降低，DAO和TNF-α水平升高，結(jié)腸組織中Na+-K+-ATPase活性下降，病理形態(tài)學(xué)顯示結(jié)腸黏膜受損。地芬諾酯組、防風(fēng)正丁醇部位組、石油醚部位組和總提取物組大鼠血清中Na+、K+和Cl-濃度不同程度升高，DAO和TNF-α水平降低，結(jié)腸組織中Na+-K+-ATPase活性增加，受損的結(jié)腸黏膜有不同程度的修復(fù)改善，表明防風(fēng)石油醚部位、正丁醇部位和總提取物可修復(fù)受損的腸道黏膜，平衡電解質(zhì)紊亂。

腸道是機(jī)體重要的水液轉(zhuǎn)運(yùn)代謝器官，早期認(rèn)為水在腸道的轉(zhuǎn)運(yùn)取決于電解質(zhì)產(chǎn)生的腸腔內(nèi)外滲透壓差，現(xiàn)在研究發(fā)現(xiàn)結(jié)腸對水的重吸收是AQP介導(dǎo)的逆滲透梯度的主動吸收過程。AQP在腸道的異常表達(dá)是導(dǎo)致腸道對水分吸收減少繼而引發(fā)大量水分累積的關(guān)鍵因素，與腸道環(huán)境失衡密切相關(guān)[12]。目前已發(fā)現(xiàn)水通道蛋白的13個(gè)亞型(AQP0～AQP12)，表達(dá)于腸道的有11種，起主要作用的有AQP3、4、8和9。AQP3屬于具有相對選擇性的組成型水通道蛋白，除了水以外還可以轉(zhuǎn)運(yùn)甘油、尿素，研究發(fā)現(xiàn)AQP3通過介導(dǎo)腸腔與血管之間的水液轉(zhuǎn)動調(diào)節(jié)結(jié)腸中的糞便含水量[13]；AQP4主要位于結(jié)腸上皮細(xì)胞的基底外側(cè)膜，作為高度選擇性的水通道蛋白，具有高度快速轉(zhuǎn)運(yùn)水的能力，是其他水通道蛋白通透性的3～4倍[14]，將腸腔內(nèi)的水分子轉(zhuǎn)運(yùn)到腸道間質(zhì)，在消化系統(tǒng)中起到很重要的作用；AQP8在結(jié)腸表達(dá)于黏膜吸收上皮細(xì)胞，參與結(jié)腸對水分的重吸收，在腹瀉患者結(jié)腸表達(dá)明顯降低，且結(jié)腸AQP8的表達(dá)越低，糞便含水量越高[15]；AQP9不僅參與結(jié)腸水液代謝，而且還可合成和分泌黏液，保護(hù)腸黏膜和潤滑大便，與便秘的發(fā)生相關(guān)[16]。本實(shí)驗(yàn)顯示，腹瀉模型大鼠結(jié)腸AQP3、4、8表達(dá)下調(diào)，AQP9無明顯變化，說明AQP對腸道內(nèi)水的重吸收具有重要意義，其表達(dá)異常是腹瀉形成的分子學(xué)基礎(chǔ)；地芬諾酯、防風(fēng)石油醚部位、正丁醇部位和總提取物可提高腹瀉大鼠結(jié)腸組織AQP-3、AQP-4和AQP-8的蛋白表達(dá)；值得注意的是，地芬諾酯和防風(fēng)石油醚部位可減少大鼠結(jié)腸中AQP-9水平，而防風(fēng)總提取物對AQP9無明顯影響，推測防風(fēng)的其他部位可能調(diào)控了AQP9的異常表達(dá)。上述結(jié)果表明防風(fēng)及其石油醚部位、正丁醇部位可能通過調(diào)控結(jié)腸AQP的表達(dá)發(fā)揮止瀉作用，且石油醚部位與正丁醇部位對不同亞型的AQP調(diào)控具有差異。

綜上所述，防風(fēng)具有較好的止瀉作用，其止瀉作用可能與提高Na+-K+-ATPase活性、修復(fù)黏膜損傷、調(diào)控腸道AQP表達(dá)有關(guān)，石油醚部位和正丁醇部位是防風(fēng)止瀉的活性部位，且二者對腸道不同亞型的AQP表達(dá)具有差異。不同亞型的AQP調(diào)控機(jī)制不同，防風(fēng)及其不同極性部位對AQP差異調(diào)控的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。