趙媛媛 張楠 孫維義 郅強(qiáng) 楊世發(fā)

1)河南中醫(yī)藥大學(xué) 鄭州 450003 2)河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院微創(chuàng)腔鏡外科 鄭州 450046

近年來，我國結(jié)直腸癌的發(fā)病率和病死率均呈上升趨勢[1]。手術(shù)、化療、中醫(yī)藥等多學(xué)科綜合治療可提高臨床效果。黃芪多糖是豆科植物黃芪的主要活性成分，可通過多種機(jī)制誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、增加免疫功能調(diào)節(jié)，具有廣譜抗腫瘤及增加患者免疫功能等作用[2-3]。外泌體在結(jié)直腸癌患者循環(huán)血清和HCT-116、SW480等腫瘤細(xì)胞株中表達(dá)水平均顯著增高[4-7]。外泌體標(biāo)志性蛋白(CD63、TGF-β1)在外泌體蛋白表達(dá)譜中高表達(dá)[8]，聯(lián)合CEA等腫瘤標(biāo)記物檢測能為結(jié)直腸癌的診斷、預(yù)后評估提供有價(jià)值的參考?；诖?，我們開展了本項(xiàng)小樣本前瞻性研究，以初步探討黃芪多糖聯(lián)合新輔助化療與新輔助化療對結(jié)直腸癌患者血清腫瘤標(biāo)記物水平和外泌體表達(dá)水平的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料本研究為小樣本前瞻性預(yù)實(shí)驗(yàn)研究。經(jīng)我院倫理委員會(huì)審批，納入2019-01—2020-01于我院微創(chuàng)腔鏡外科收治的結(jié)直腸癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)均經(jīng)結(jié)腸鏡病理學(xué)檢查確診為結(jié)直腸癌。(2)符合腹腔鏡結(jié)直腸癌根治術(shù)及新輔助化療的指征[9]。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)臨床資料不全和存在嚴(yán)重心、腦、肺系統(tǒng)疾病者。(2)黃芪多糖過敏、有其他腫瘤手術(shù)史，以及嚴(yán)重精神疾病患者。(3)患者均簽署知情同意書。根據(jù)新輔助化療方法分為黃芪多糖聯(lián)合新輔助化療組(觀察組)和單純新輔助化療組(對照組)。

1.2治療方法新輔助化療(FOLFOX6方案)：第1天靜脈滴注奧沙利鉑85 mg/m2，持續(xù)2 h。第1～5天靜脈滴注亞葉酸鈣200 mg/m2，至少持續(xù)2 h；靜脈滴注5-氟尿嘧啶400 mg/m2，至少持續(xù)6 h。黃芪多糖(批號：Z20040086，天津賽諾制藥有限公司)：黃芪多糖250 mg加入0.9%氯化鈉注射液500 mL中混勻，靜脈滴注，至少持續(xù)2.5 h。1次/d，連續(xù)用藥7 d。停藥后實(shí)施腹腔鏡結(jié)直腸癌根治術(shù)。

1.3觀察指標(biāo)化療前1 d及術(shù)后第7天分別采集患者的空腹靜脈血。由我院臨床檢驗(yàn)科檢驗(yàn)血清腫瘤標(biāo)記物CEA、CA19-9、CA125水平和WBC計(jì)數(shù)，以及血清CD63、TGF-β1表達(dá)水平。

2 結(jié)果

2.1基線資料研究周期內(nèi)共納入符合標(biāo)準(zhǔn)的患者40例，每組20例。2組患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤分期差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 2組患者的基線資料比較

2.2血清腫瘤標(biāo)記物水平及WBC計(jì)數(shù)化療前1 d 2組患者的血清CEA、CA19-9、CA125水平，以及WBC計(jì)數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。術(shù)后第7天，2組患者的血清CEA、CA19-9、CA125水平均顯著下降，其中觀察組的水平低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。觀察組WBC計(jì)數(shù)較化療前無明顯下降，而對照組顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組患者腫瘤標(biāo)記物及WBC水平比較

2.3外泌體蛋白表達(dá)比較化療前1 d，2組患者血清CD63和TGF-β1表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。術(shù)后第7天，2組患者血清CD63和TGF-β1水平均顯著下降，且觀察組水平顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 2組患者血清CD63和TGF-β1表達(dá)水平

3 討論

黃芪多糖是豆科植物黃芪的主要活性成分，在抗氧化、抗應(yīng)激、抗衰老、抗病毒、抗腫瘤方面均具有重要作用[10]，尤其是多重抗腫瘤作用效果備受關(guān)注。黃芪多糖能通過促進(jìn)固有免疫、適應(yīng)性免疫殺傷腫瘤改變腫瘤微環(huán)境。外泌體作為細(xì)胞間通訊介質(zhì)在腫瘤微環(huán)境中發(fā)揮重要作用，是促進(jìn)腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移的重要信使。外泌體標(biāo)志性蛋白CD63和TGF-β1作為液體活檢在腫瘤診斷和治療方面具有重要價(jià)值[11-12]。本研究結(jié)果顯示，黃芪多糖聯(lián)合新輔助化療可以降低結(jié)直腸癌患者血清CEA、CA19-9、CA125水平，以及外泌體標(biāo)志性蛋白CD63和TGF-β1表達(dá)水平，而且WBC計(jì)數(shù)下降不明顯。表明黃芪多糖可以有效抑制外泌體分泌、改善患者機(jī)體免疫功能和減少細(xì)胞毒性。

外泌體在腫瘤細(xì)胞與腫瘤微環(huán)境動(dòng)態(tài)平衡中發(fā)揮重要作用，通過促進(jìn)腫瘤免疫逃逸、腫瘤組織新生血管生成、腫瘤細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化等方式增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的惡性進(jìn)展和轉(zhuǎn)移[13]。最近有研究顯示[14-15]，外泌體能夠促進(jìn)靜息成纖維細(xì)胞活化呈腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAFs)，CAFs是腫瘤微環(huán)境中最主要的間質(zhì)細(xì)胞，在腫瘤發(fā)展的不同階段均發(fā)揮著重要作用。而TGF-β1也能促進(jìn)正常成纖維細(xì)胞向腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化。同時(shí)CAFs也能分泌外泌體作用于惡性腫瘤細(xì)胞，影響惡性腫瘤轉(zhuǎn)移[16]。腫瘤細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞等可以分泌外泌體，而這些外泌體可以調(diào)節(jié)腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移；同時(shí)外泌體分泌的雙鏈脫氧核糖核酸激活機(jī)體炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致患者出現(xiàn)化療耐藥和一系列相關(guān)的副反應(yīng)[17]。故外泌體分泌抑制可以改善化療副反應(yīng)。本研究結(jié)果顯示，黃芪多糖聯(lián)合新輔助化療可以使血清CD63和TGF-β1表達(dá)水平顯著下降，表明黃芪多糖可以有效抑制外泌體分泌，其抗腫瘤作用與抑制外泌體分泌密切相關(guān)。

骨髓抑制和胃腸道反應(yīng)是新輔助化療常見的毒副反應(yīng)，可嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量及預(yù)后。張明明等[18]給予胃癌術(shù)后患者應(yīng)用黃芪多糖治療，可改善患者的WBC計(jì)數(shù)及血清CRP、PCT、IL-10炎性因子表達(dá)水平。本研究將黃芪多糖聯(lián)合新輔助化療用于結(jié)直腸癌患者，其效果與之相符，亦提示黃芪多糖在抗腫瘤的同時(shí)，可減輕化療所致的骨髓抑制反應(yīng)，優(yōu)化患者后期康復(fù)。

綜上所述，黃芪多糖聯(lián)合新輔助化療可有效降低結(jié)直腸癌患者血清外泌體分泌水平，增強(qiáng)免疫功能，減輕化療的毒性反應(yīng)。但該結(jié)論尚需大樣本量的前瞻性隨機(jī)對照研究予以證實(shí)。