于孟嬌 班智慧?付文波

摘 要：世界上有毒植物有2000種左右。我國(guó)地跨寒、溫、熱3帶，有毒植物有900多種，其中烏頭類(lèi)植物、馬錢(qián)子、毒蘑菇、秋水仙等有毒植物分布廣泛，因誤食或加工方式不當(dāng)導(dǎo)致中毒的情況頗多，尤其是利用植物毒素惡意投毒致人死亡的案件屢有發(fā)生。植物毒素成分復(fù)雜，分子量較大，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)存在一定難度。該文概述了烏頭生物堿、馬錢(qián)子堿與士的寧、毒蕈堿、秋水仙堿等幾種常見(jiàn)植物毒素的理化性質(zhì)和毒理作用，歸納了其新型檢驗(yàn)方法，以期提高植物毒素鑒定檢驗(yàn)的速度及準(zhǔn)確度。

關(guān)鍵詞：植物毒素;理化特性;毒理作用;檢驗(yàn)方法

中圖分類(lèi)號(hào) D919.4文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編號(hào) 1007-7731（2021）13-0040-03

植物在傳統(tǒng)的中醫(yī)學(xué)和藥學(xué)中具有止血化瘀、治病救人等重要作用，然而“是藥三分毒”，某些藥用植物雖是良好的藥材，但用之不當(dāng)則可發(fā)生毒副作用，甚至中毒死亡。2006年發(fā)生在揚(yáng)州大學(xué)的秋水仙堿投毒事件、蓖麻素投毒案件等引發(fā)公眾關(guān)注，出于羨慕、嫉妒、報(bào)復(fù)等扭曲心理，通過(guò)植物毒素投毒的案件逐漸增多。但是有毒植物成分復(fù)雜，毒性因生長(zhǎng)的地域環(huán)境各不相同，因此植物毒素的檢驗(yàn)相對(duì)困難。為此，筆者搜集了烏頭生物堿、馬錢(qián)子堿、毒蕈堿等幾種常見(jiàn)植物毒素，歸納其理化特征及檢驗(yàn)方法，以期為相關(guān)技術(shù)鑒定提供參考。

1 常見(jiàn)植物毒素

1.1 烏頭生物堿

1.1.1 理化特征 烏頭生物堿是烏頭屬植物中含有劇毒的雙酯類(lèi)生物堿之一。我國(guó)已知的烏頭屬植物超過(guò)170種，根據(jù)地域分布不同，主要包括川烏、草烏等。純品烏頭生物堿具有一定的晶形、熔點(diǎn)及旋光度，易溶于氯仿（1∶2）、苯（1∶7）和乙醚（1∶50）等有機(jī)溶劑，難溶于水，其水溶液呈堿性[1]。烏頭堿的性質(zhì)較不穩(wěn)定，易于水解，多與酸結(jié)合形成鹽，其鹽類(lèi)易溶于水，因此在體內(nèi)吸收較快，排泄也快。烏頭堿分子式為C34H47O11N，分子量為645.37，化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。

1.1.2 毒理作用 烏頭屬植物含有多種生物堿，以塊根含量較大，主要為烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿等，該類(lèi)生物堿本身具有鎮(zhèn)痛、祛寒、麻醉的藥用效果，因此烏頭塊根作為中醫(yī)藥用由來(lái)已久。人們經(jīng)常會(huì)采集烏頭泡酒，服用后可緩解關(guān)節(jié)疼痛、風(fēng)濕性腰腿痛等疾病。然而，若過(guò)量服用烏頭浸泡過(guò)的藥酒或煎煮的藥湯或服用未經(jīng)炮制的烏頭屬植物，會(huì)引起中毒。中毒量較小時(shí)，中毒者多出現(xiàn)口舌四肢持續(xù)發(fā)麻、流涎、心慌、胃燒灼、脈弱、心律失常等癥狀;嚴(yán)重時(shí)，烏頭堿直接作用于心肌，會(huì)出現(xiàn)室性心動(dòng)過(guò)速及心室纖顫，引發(fā)異位節(jié)律和房室傳導(dǎo)阻滯;重度中毒者會(huì)產(chǎn)生呼吸抑制，血壓下降，最終導(dǎo)致呼吸衰竭死亡。據(jù)文獻(xiàn)記載，口服烏頭堿0.2mg即可引起中毒，其致死劑量為2～5mg[2]。

1.2 馬錢(qián)子堿與士的寧

1.2.1 理化特性 馬錢(qián)子堿與士的寧（又稱(chēng)番木鱉堿）屬于馬錢(qián)科植物。馬錢(qián)子藥用歷史悠久，始載于《本草綱目》，常用于治療中風(fēng)引起的神經(jīng)麻痹癥和用作健胃藥。士的寧是一種中樞興奮劑，常用于治療巴比妥類(lèi)藥物中毒引發(fā)的骨骼肌松弛、弱視癥等。兩者均為無(wú)色晶形，馬錢(qián)子堿易溶于乙醚和氯仿，分子式為C23H36O4N2，化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖2;士的寧性質(zhì)穩(wěn)定，不易分解，不溶于乙醚和氯仿，常與硝酸、硫酸及鹽酸制成鹽。

1.2.2 毒理作用 馬錢(qián)子中毒多見(jiàn)于濫用或誤用，多引起反射性、強(qiáng)直性和泛發(fā)性痙攣。一般口服后15～30min出現(xiàn)中毒癥狀，主要表現(xiàn)為呼吸困難、下咽障礙、全身僵硬，引發(fā)全身強(qiáng)制性痙攣、雙目凝視、瞳孔散大、牙關(guān)緊閉，角弓反張。通常是陣發(fā)性痙攣，每次持續(xù)1～3min，發(fā)作后有5～15min的間隔，此時(shí)全身肌肉松弛，機(jī)體狀態(tài)恢復(fù)正常，但若再受到外界刺激（光、聲等）會(huì)再次發(fā)作，痙攣時(shí)間持續(xù)延長(zhǎng)，間隔時(shí)間縮短，呼吸、脈搏加快，血壓上升，直到中毒者蜷縮成弓形，全身骨骼肌收縮，全身出現(xiàn)劇烈痙攣，最后窒息而亡。

1.3 毒蕈堿

1.3.1 理化特性 毒蕈泛指有毒的大型菌類(lèi)，菌體外形似傘，由菌絲組成，靠孢子傳播繁殖，又稱(chēng)為毒菌，俗稱(chēng)“毒蘑菇”。全世界已知的毒蕈有百余種，我國(guó)已發(fā)現(xiàn)的有80余種。毒蕈堿為氯化物，分子式為C9H20ClNO2，粗棱柱狀結(jié)晶，易受潮，極易溶于水和乙醇，略溶于氯仿、乙醚和丙酮。

1.3.2 毒理作用 野生蕈菌營(yíng)養(yǎng)豐富、味道鮮美，能夠提高人體免疫力，是大自然賜予人類(lèi)的美味佳肴和食用佳品。但有些野生蕈菌自身含有毒素，誤食后會(huì)引發(fā)中毒，嚴(yán)重者導(dǎo)致死亡。其中毒癥狀通常有7種，包括急性腎衰竭型、急性肝損傷型、胃腸炎型、神經(jīng)精神性、溶血型、橫紋肌溶解型和光過(guò)敏性皮炎型[4]。神經(jīng)精神型是主要由毒蠅傘、豹斑毒傘等引起意識(shí)模糊、精神錯(cuò)亂等中毒性精神癥狀;肝損害型主要由毒傘、鱗柄白毒傘等引起肝臟疼痛腫大、黃疸、出血，最后死于肝性腦病;腸胃炎型主要癥狀有腹痛、腹瀉、大便水樣化;溶血型主要是由鹿花菌引起的急性溶血性貧血、血紅蛋白尿、肝脾腫大等癥狀。

1.4 秋水仙堿

1.4.1 理化特性 秋水仙屬于百合科植物，其球莖和種子中含有秋水仙堿，主要生長(zhǎng)于歐洲中南部和非洲北部，但我國(guó)云南地區(qū)的麗江山慈菇鱗莖中也含有0.12%的秋水仙堿。秋水仙堿的分子結(jié)構(gòu)為C22H25O6N，化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖3，相對(duì)分子質(zhì)量為399.2，純品為無(wú)色晶體，味苦，一般含有1～5個(gè)結(jié)晶水而顯黃色，遇光顏色會(huì)加深。秋水仙堿易溶于乙醇、氯仿，可溶于水，難溶于石油醚。

1.4.2 毒理作用 秋水仙堿可有效治療痛風(fēng)，具有抗癌效果。其在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物是氧化二秋水仙堿，代謝物的毒性增強(qiáng)，刺激消化道及腎臟，產(chǎn)生腹瀉癥狀，刺激毛細(xì)血管，使得脊髓及延腦麻痹。秋水仙堿中毒后，潛伏期3～6h，最初癥狀為咽喉及上腹部燒灼感，惡心，嘔吐，嚴(yán)重腹瀉，大便呈水樣，也會(huì)排泄血便;嚴(yán)重時(shí)，血管受損引起休克，腎臟受損出現(xiàn)血尿或尿閉?？砂l(fā)生上行性麻痹，常在1～2d因呼吸麻痹而死亡，死者膽汁中的毒素濃度比血中高。

2 常見(jiàn)植物毒素的檢驗(yàn)方法

2.1 烏頭生物堿

2.1.1 化學(xué)分析法 顯微結(jié)晶反應(yīng)：烏頭生物堿與碳酸鈉試劑發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生瓣?duì)铙w結(jié)晶物質(zhì)，與高錳酸鉀試劑發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生密集瓣?duì)铙w棒狀結(jié)晶物質(zhì)，2種方法的檢測(cè)靈敏度均為0.25μg。顯色反應(yīng)：烏頭生物堿與硫酸試劑反應(yīng)可顯淡黃色，與5%鉬酸銨的硫酸溶液試劑（Frohde試劑）反應(yīng)顯黃色，與1%釩酸銨的硫酸溶液試劑（Mandelin試劑）反應(yīng)顯褐色。

2.1.2 薄層色譜法 在吸附劑為硅膠G60F254鋁制軟板，展開(kāi)劑為甲苯∶乙酸乙酯∶二乙胺（7∶2∶1），顯色劑為碘蒸汽的條件下，可以將烏頭屬藥材中的生川烏、生草烏、制川烏、制草烏、烏頭堿等成分分離開(kāi)，效果較為明顯。劉憲平等[5]利用薄層色譜法對(duì)生物檢材（肝臟）中的烏頭類(lèi)生物堿進(jìn)行檢驗(yàn)，吸附劑為硅膠G，顯色劑為碘化鉍鉀，選擇3種展開(kāi)劑，分別為環(huán)己烷-二乙胺（體積比9∶1）溶液、環(huán)己烷-乙酸乙酯（體積比1∶1）溶液，苯-二氧六環(huán)-二乙胺（體積比7∶2∶1）溶液。結(jié)果顯示，3種色譜條件均可以實(shí)現(xiàn)生物檢材中各成分的彼此分離，證明薄層色譜法是此類(lèi)藥物檢驗(yàn)篩選的首選方法，最小檢出量為0.3μg。

2.1.3 高效液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜法 張志清等[6]利用液-質(zhì)聯(lián)用色譜法對(duì)珠芽瓜葉烏頭中毒患者的血液、尿液進(jìn)行定性定量檢測(cè)，結(jié)果顯示尿液中的毒素含量比血液中的高，更適合作生物檢材;定量分析結(jié)果顯示在1.0～100ng/mL的濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好;檢出限低，為0.1～5.0ng/mL;回收率高達(dá)78.9%～116.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差處于0.5%～4.1%（n=6）。具體操作方法：分別采集血液樣本、尿液樣本、食物、草烏塊根勻漿，經(jīng)超聲、離心、稀釋等前處理后，均過(guò)0.22mm微孔濾膜。以上樣品溶液經(jīng)Aglient SB-C18色譜柱分離后，用高效液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜法進(jìn)行測(cè)定。高效液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜法能夠快速檢測(cè)檢材中烏頭類(lèi)生物堿及其代謝產(chǎn)物成分，試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確度高，回收率好。

2.2 馬錢(qián)子堿與士的寧

2.2.1 化學(xué)分析法 顯微結(jié)晶反應(yīng)。馬錢(qián)子堿與濃硝酸反應(yīng)顯血紅色。士的寧與釩硫酸試劑反應(yīng)顯現(xiàn)出藍(lán)色，數(shù)分鐘后變成橙色，靈敏度為1μg;與重鉻酸鉀-硫酸反應(yīng)，先顯現(xiàn)紫藍(lán)色，后變?yōu)辄S色，靈敏度為5μg;與亞鐵氰化鉀反應(yīng)，生成淺黃色透明鳥(niǎo)翅狀結(jié)晶。

2.2.2 高效液相色譜法 士的寧、馬錢(qián)子堿的分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜，分子量較大，不易汽化，不適用于氣相色譜的分析，通常采用液相色譜分析法。并且生物檢材中，毒物含量較少，不易富集，必須經(jīng)過(guò)前處理方法進(jìn)行提取。耿琴等[7]利用固相微萃取儀提取檢材中的毒素，直接進(jìn)樣到液相色譜儀中，成功測(cè)定出馬錢(qián)子中士的寧和馬錢(qián)子堿的含量。其使用的是Hypersil ODS色譜柱（150mm×4.6mm，5μm）;進(jìn)樣量20μL;以乙腈0.01mol/L庚烷磺酸鈉與0.02mol/L磷酸二氫鉀等量混合溶液作流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)260nm，柱溫25℃。試驗(yàn)結(jié)果證明士的寧與馬錢(qián)子堿在測(cè)量范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，平均回收率高。

2.2.3 液-質(zhì)聯(lián)用色譜法 閆靜等[8]利用液-質(zhì)聯(lián)用色譜法分析中藥馬錢(qián)子生物堿提取物中微量生物堿16-羥基-α-可魯勃林、異番木鱉堿質(zhì)譜碎裂規(guī)律及其與結(jié)構(gòu)間的關(guān)系，初步提出2種微量生物堿的質(zhì)譜碎裂機(jī)理，并在其質(zhì)譜碎裂規(guī)律基礎(chǔ)上建立了簡(jiǎn)便、快捷區(qū)分微量馬錢(qián)生物堿異構(gòu)體16-羥基-α-可魯勃林和4-羥基依卡精、番木鱉堿和異番木鱉堿的方法。韋立志等[9]建立了液-質(zhì)聯(lián)用色譜法快速測(cè)定風(fēng)濕馬錢(qián)片、風(fēng)濕安泰片、風(fēng)濕骨康片和舒筋丸中馬錢(qián)子堿與士的寧含量的方法。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法快速、靈敏度高、準(zhǔn)確可靠，適合多種抗風(fēng)濕類(lèi)中成藥中馬錢(qián)子堿與士的寧的定量分析。此外，翟佳莉等[10]采用電化學(xué)分析方法對(duì)馬錢(qián)子堿的含量進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果與經(jīng)典的液-質(zhì)聯(lián)用色譜法沒(méi)有顯著性差異。

2.3 毒蕈堿

2.3.1 法醫(yī)毒理學(xué)方法 毒蕈的種類(lèi)繁多，分布呈現(xiàn)地區(qū)性，毒蕈中毒具有明顯的季節(jié)性。在檢測(cè)是否為食入的毒蕈中毒所致時(shí)，應(yīng)先確定是否有食物殘?jiān)约爸卸景Y狀是否符合，以此判斷是否為毒蕈中毒。

2.3.2 超高效液相色譜三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法 毒蕈的有毒成分較復(fù)雜，主要有毒肽類(lèi)和毒傘肽類(lèi)，這2類(lèi)都是環(huán)肽毒素，可用超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行檢測(cè)。賀巍巍等[11]采用固相萃取-液質(zhì)聯(lián)用色譜建立了快速分析尿液中毒蕈堿殘留的檢測(cè)方法。具體操作為：先用固相萃取柱將樣品進(jìn)行富集和凈化，再使用超高效液相色譜三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行定性定量分析。結(jié)果顯示：毒蕈堿在0.05～5μg/L呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，回歸系數(shù)（r）大于0.999，該方法的檢出限和定量限分別為0.02μg/L和0.05μg/L。由此可見(jiàn)，該方法靈敏、準(zhǔn)確、檢出限低，適用于尿液中毒蕈堿殘留的快速篩查和分析測(cè)定，可滿(mǎn)足臨床中毒分析和法醫(yī)鑒定的檢測(cè)需求。

2.4 秋水仙堿

2.4.1 化學(xué)顯色法 秋水仙堿與三氯化鐵溶液反應(yīng)，呈橄欖綠色，加氯仿萃取后，氯仿層呈黃褐色或石榴紅色。

2.4.2 高效液相色譜法 唐湘?zhèn)サ萚12]利用高效液相色譜法測(cè)定邵陽(yáng)龍牙百合中秋水仙堿含量在不同采收期的差別。將樣品浸泡后，先用超聲法提取，再用氯仿萃取，經(jīng)水浴蒸干、流動(dòng)相溶解稀釋后，進(jìn)入色譜柱分析。結(jié)果顯示：液相色譜法的定量效果較好，線(xiàn)性關(guān)系良好，回收率高。

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（責(zé)編：徐世紅）