邱浩慶

結(jié)核病是由于結(jié)核分枝桿菌(Tuberculosis,TB)感染引發(fā)各系統(tǒng)出現(xiàn)的病理改變,具有傳染性,損傷人類(lèi)生命健康,盡管當(dāng)前已有抗結(jié)核藥物用于臨床治療,但是由于耐藥性的發(fā)生,近年來(lái)結(jié)核病的發(fā)病率有所增加,成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題［1,2］。我國(guó)結(jié)核病患者數(shù)目位居世界前列,給社會(huì)和家庭帶來(lái)經(jīng)濟(jì)和生活負(fù)擔(dān),對(duì)結(jié)核分枝桿菌感染及早發(fā)現(xiàn)和診斷,做好防范措施,降低傳播風(fēng)險(xiǎn),是控制結(jié)核病的重要環(huán)節(jié)［3］。當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的病原學(xué)方法包括病原學(xué)學(xué)檢查、分子生物學(xué)檢查和免疫學(xué)檢查,痰培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌陽(yáng)性為細(xì)菌病原學(xué)檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn),2017 版的肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)新增分子生物學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性為肺結(jié)核確診情況之一［4,5］。本研究選擇60 例結(jié)核病疑似患者為研究對(duì)象,比較實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法、抗酸染色實(shí)驗(yàn)法和TB-IGRA法在結(jié)核病診斷中的敏感性和特異性等指標(biāo),評(píng)估其應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2019 年1 月～2020 年1 月在本院就診的60 例疑似肺結(jié)核病患者,根據(jù)臨床表現(xiàn)、病原學(xué)檢測(cè)、病理學(xué)診斷、影像學(xué)檢查和抗結(jié)核藥物治療確診為肺結(jié)核病的患者21 例,年齡15～67 歲,平均年齡(34.88±13.94)歲；確診為肺部其他疾病的患者39 例,年齡16～72 歲,平均年齡(35.71±12.89)歲,包括慢性阻塞性肺疾病、肺炎、支氣管擴(kuò)張、肺癌等。納入及排除標(biāo)準(zhǔn)：確診為肺結(jié)核的患者符合《肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)》(WS 288-2017)［6］；確診為其他肺部疾病的患者未經(jīng)過(guò)抗結(jié)核分枝桿菌治療；排除不配合研究的患者。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法 取痰樣本,用胰酶消化后離心,提取沉淀物中的TB-DNA,使用熒光定量PCR試劑盒(深圳匹基生物工程有限公司)進(jìn)行TB 的核酸檢測(cè),操作和結(jié)果判斷嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,使用ABI 7500 PCR 儀進(jìn)行結(jié)果判定。

1.2.2 抗酸染色實(shí)驗(yàn)法 結(jié)核分枝桿菌有抗酸的特性,可保持石炭酸初染的紅色,本實(shí)驗(yàn)染色液購(gòu)自于珠海貝索生物科技有限公司。取痰液樣本,嚴(yán)格按照《痰涂片鏡檢查標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊(cè)》［7］進(jìn)行樣本處理、涂片、制片和鏡檢,結(jié)核分枝桿菌在100×油鏡下呈細(xì)長(zhǎng)的紅色桿狀。

1.2.3 TB-IGRA 法 以無(wú)菌抗凝管采集待測(cè)者的靜脈血5 ml,使用TB-IGRA 酶聯(lián)免疫分析試劑盒(北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司)檢測(cè)血液樣本中結(jié)核分枝桿菌γ-干擾素的水平,操作和結(jié)果判斷嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同檢測(cè)方法對(duì)于肺結(jié)核疑似患者的檢測(cè)結(jié)果TB-IGRA 法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法的陽(yáng)性檢出率高于抗酸染色法,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.400、4.658,P=0.011、0.031<0.05)。TB-IGRA 法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法的陽(yáng)性檢出率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.150,P=0.699>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同方法對(duì)疑似肺結(jié)核患者的檢出結(jié)果比較(n,%)

2.2 不同檢測(cè)方法對(duì)于結(jié)核病診斷的敏感性和特異性比較 病理結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)：60 例疑似患者中,21 例確診為肺結(jié)核,39 例確診為其他肺部疾病。TB-IGRA 法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR 敏感性分別為76.19%、85.71%,高于抗酸染色法的42.86%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.842、8.400,P=0.028、0.004<0.05)；TB-IGRA 法與實(shí)時(shí)熒光定量PCR 敏感性比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.618,P=0.432>0.05)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 的特異性為97.44%,與抗酸染色法、TB-IGRA法的100.00%、87.18% 比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.013、2.889,P=0.314、0.089>0.05)。TB-IGRA法的檢測(cè)特異性低于抗酸染色法,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.342,P=0.021<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同檢測(cè)方法對(duì)于結(jié)核病診斷的敏感性和特異性比較(n,%)

3 討論

世界衛(wèi)生組織發(fā)布的《2018 年全球結(jié)核病控制報(bào)告》顯示2017 年全球范圍內(nèi)估計(jì)新增1000 萬(wàn)結(jié)核病患者,約130 萬(wàn)人死于該病,是全球十大死亡原因之一,在單一傳染病中其致死率高于艾滋病等其他疾病。中國(guó)2017 年新增結(jié)核病患者88.9 萬(wàn)例,是結(jié)核病高危和高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一,提高結(jié)核病的診斷率,減少耐藥性并提升治療效果,對(duì)“終止結(jié)核病”的實(shí)現(xiàn)至關(guān)重要［8］。針對(duì)結(jié)核分枝桿菌的實(shí)施準(zhǔn)確便捷的檢測(cè)可減少漏診情況,是結(jié)核病防控重要且有效的手段,本研究對(duì)熒光定量PCR 法、抗酸染色法和IGRAs 法對(duì)結(jié)核病診斷的價(jià)值進(jìn)行分析。

抗酸染色法是結(jié)核分枝桿菌病原學(xué)檢測(cè)的傳統(tǒng)方法,此方法存在耗時(shí)較長(zhǎng),需2～3 d 才可看到檢測(cè)結(jié)果,對(duì)樣本中結(jié)核分枝桿菌的數(shù)量有一定要求,存在較大的漏診風(fēng)險(xiǎn),但是其成本低廉、操作簡(jiǎn)便、對(duì)儀器設(shè)備無(wú)特殊要求且操作易于掌握等優(yōu)點(diǎn)在結(jié)核病診斷中被廣泛應(yīng)用［9］。2017 年世界衛(wèi)生組織推薦使用美國(guó)Cephid 公司的Xpert MTB/RIF 試劑盒對(duì)結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行檢測(cè),該試劑盒能夠同時(shí)診斷結(jié)核病和檢測(cè)利福平耐藥情況,但價(jià)格較昂貴,并未廣泛應(yīng)用于基層［10］。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法以PCR 技術(shù)為基礎(chǔ),在核酸擴(kuò)增過(guò)程中加入熒光探針進(jìn)行標(biāo)記,通過(guò)檢測(cè)熒光強(qiáng)度評(píng)價(jià)目的基因的水平,速度快、準(zhǔn)確度較高、實(shí)用性強(qiáng),成為發(fā)展迅速的分子診斷技術(shù)［11］。TB-TGRAs 則通過(guò)T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的γ-干擾素免疫反應(yīng)對(duì)患者進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè),是當(dāng)前對(duì)結(jié)核桿菌感染進(jìn)行篩查的重要手段。通過(guò)不同的檢測(cè)方法對(duì)60 例肺結(jié)核疑似患者進(jìn)行檢測(cè),實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法和TB-IGRA 法的陽(yáng)性檢出率顯著高于抗酸染色法,提示實(shí)時(shí)熒光定量PCR 和TBIGRA 法在結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)中顯示出更好的效果。

敏感性和特異性是評(píng)價(jià)檢測(cè)方法重要的指標(biāo),實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法和TB-IGRA 法的敏感性顯著高于抗酸染色法,和相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致［12］；實(shí)時(shí)熒光定量PCR 的特異性與抗酸染色法、TB-IGRA 法比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。TB-IGRA 法的檢測(cè)特異性低于抗酸染色法,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。提示實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法在結(jié)核病診斷中顯示出更好的應(yīng)用前景。TB-IGRA 檢測(cè)陽(yáng)性表明患者體內(nèi)存在對(duì)結(jié)合桿菌感染的免疫反應(yīng),并不能確定患者體內(nèi)結(jié)核分枝桿菌的存在情況,對(duì)于潛伏期或非活動(dòng)期的結(jié)核病檢測(cè)更有優(yōu)勢(shì)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)中出現(xiàn)1 例假陽(yáng)性病例,可能與操作過(guò)程中出現(xiàn)的非特異性擴(kuò)增或者樣本污染等因素有關(guān)。

綜上所述,實(shí)時(shí)熒光定量PCR 用于結(jié)核病診斷的敏感性和特異性均較高,在結(jié)核病的臨床診斷中顯示出較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。