呂曉帆，周新紅，王瑩，吳亞妮

秋石斛花青素提取液成分分析及其體外抗氧化活性和刺激性研究

呂曉帆，周新紅，王瑩，吳亞妮*

(上海交通大學(xué)設(shè)計學(xué)院，上海 200240)

為了解熱帶蘭秋石斛花青素的功能, 用超聲波輔助提取法提取秋石斛‘三亞陽光’(‘Sanya Sunny’)的花青素，用UPLC-QTOF-MS技術(shù)對其花青素提取液進(jìn)行成分分析, 并對其抗氧化活性進(jìn)行了評價，采用家兔皮膚刺激和眼刺激實驗對提取物的安全性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，從花青素提取物中共檢測出15個花青素成分，如苷元有飛燕草素、矢車菊素、錦葵素、矮牽牛素和芍藥素等；提取物體外抗氧化活性較強(qiáng)，相同濃度下花青素提取物的DPPH·清除能力和總抗氧化能力均強(qiáng)于抗壞血酸；0.25～1.0 g/L的花青素提取物對家兔眼和皮膚均無刺激性。這說明‘三亞陽光’秋石斛除觀賞價值外，在醫(yī)藥、食品和化妝品等領(lǐng)域也有廣闊的應(yīng)用空間。

秋石斛；花青素；抗氧化性；安全性實驗

秋石斛()又稱蝴蝶石斛，為蘭科(Orchidaceae)石斛屬常綠附生草本植物，是熱帶洋蘭重要的切花和盆花之一。蝴蝶石斛原生種多分布于大洋洲的澳大利亞、新西蘭和巴布亞新幾內(nèi)亞等國，雜交種多是由原產(chǎn)于新幾內(nèi)亞的熱帶原生種蝴蝶石斛為親本育成[1]。21世紀(jì)初，中國開始從泰國、新加坡等國引進(jìn)并大規(guī)模栽培，多見于三亞、昆明一帶[2]。目前國內(nèi)外關(guān)于蝴蝶石斛的研究較少，并且大多集中于栽培技術(shù)以及花色表現(xiàn)與基因表達(dá)方面，關(guān)于其提取物功效以及安全性的研究則極其少見。

花青素是構(gòu)成植物花瓣和果實的主要色素之一，常見于花瓣、果實組織的表皮細(xì)胞與下表皮層，屬于酚類物質(zhì)中的類黃酮。大量研究表明，花青素具有較好的抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗衰老等功效，對于慢性疾病的治療和預(yù)防、降低心血管疾病的發(fā)病率、糖尿病和肥胖癥的預(yù)防等方面都有積極的作用，在醫(yī)藥行業(yè)、食品行業(yè)以及化妝品行業(yè)等都有較為廣闊的應(yīng)用空間[3–5]。

本研究主要對秋石斛‘三亞陽光’(‘Sanya Sunny’)花瓣花青素提取物進(jìn)行分析和評價。通過UPLC-QTOF-MS分析其主要花青素成分，通過DPPH自由基和FRAP自由基試驗評價其體外抗氧化活性，通過家兔皮膚刺激和眼刺激試驗評價其安全性，以期對秋石斛‘三亞陽光’的深度開發(fā)和應(yīng)用提供理論和數(shù)據(jù)支持。

1 材料和方法

1.1 材料和試劑

材料 健康秋石斛‘三亞陽光’(‘Sanya Sunny’)花瓣，由海南博大蘭華科技有限公司提供。

試劑 分析純矢車菊素-3--葡萄糖苷(麥克林生化科技有限公司)，分析純醋酸鈉、硫酸亞鐵(北京百靈威生物科技有限公司)，分析純鹽酸、乙酸、三氯化鐵、無水乙醇(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司),三吡啶三吖嗪(tripyridyl-triazine, TPTZ；上海華英化工有限公司)，1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl- 2-picrylhydrazyl, DPPH, 源葉生物科技有限公司), 抗壞血酸[維生素C, 阿法埃沙(中國)化學(xué)有限公司]。

儀器 UV-5500紫外可見分光光度計(上海元析儀器)，AR224CN分析天平(奧賽德儀器), JY92- ⅡN超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)，H1850離心機(jī)(湘儀離心機(jī)儀器有限公司);Acquity I-class超高效液相色譜，VION離子淌度四極桿飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用儀(上海沃特世科技有限公司)。

1.2 花青素提取液的成分分析

樣品制備 取0.5 g秋石斛新鮮花瓣用液氮研磨，裝入10 mL離心管中，加5 mL含有70%甲醇的0.1%鹽酸水溶液，渦旋30 s，放入4℃冰箱冷藏24 h后，采用超聲波提取30 min (超聲頻率75 Hz), 所得溶液在13 200×離心10 min，取上清液1 mL進(jìn)樣，利用UPLC-QTOF-MS技術(shù)進(jìn)行分析。

色譜條件 色譜柱: BEH C18(100 mm×2.1 mm, 1.7m)，(配備預(yù)柱)；柱溫：45℃；流速：0.4 mL/min；流動相A：0.1%甲酸水；流動相B：0.1%甲酸乙腈(1/1)；洗針液：H2O/ACN (10/90)；進(jìn)樣體積：1L。依次用0～3 min, 95% A; 3～10 min, 80% A; 10～ 12 min, 0% A; 12～15 min, 5% A梯度洗脫。

質(zhì)譜條件 采集模式：MSE (低能量/高能量切換掃描)；離子模式：電噴霧正離子/負(fù)離子分別掃描；毛細(xì)管電壓：2 kV (positive)、2 kV (negative);錐孔電壓：40 V；霧化氣溫度：450℃；霧化氣流量: 900 L/h；錐孔反吹氣(Cone gas)：50 L/h；離子源溫度(Source temp)：115℃；掃描范圍：/50～1 000; 掃描速度：0.2 s；碰撞能量：6 eV/20～45 eV；在線鎖定質(zhì)量(在線校正Lockmass)：250 pg/L亮氨酸腦啡肽持續(xù)進(jìn)樣，流速：10L/min；采集間隔(sample time)：0.5 s；采集時間：0.5 s；碰撞能量：6 eV。

1.3 總花青素提取

矢車菊素標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 參照Hui等[6]的方法，在弱光下稱取矢車菊素對照樣品至50 mL容量瓶中，用0.1%鹽酸水溶液和95%乙醇水溶液(1∶1)溶解、定容制成不同濃度的矢車菊素對照品溶液，在最大吸收波長518 nm下測吸光度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

總花青素的提取 采用超聲波輔助提取法。取新鮮秋石斛花瓣，60℃烘箱烘干至恒重，粉碎后過60目篩，稱取0.05 g干粉加入2.5 mL提取劑進(jìn)行超聲提取，超聲時間30 min，功率55 W。之后在9 000×下離心10 min，取上清液，稀釋10倍后在518 nm處測定吸光度值A(chǔ)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算總花青素的含量，重復(fù)3次。

1.4 總抗氧化能力的測定

參考Yang等[7]的FRAP方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和測定。量取0.1 mL樣品溶液置于10 mL離心管中, 加入3 mL FRAP工作液，再加入去離子水至4 mL, 混合均勻，精確反應(yīng)5 min，以去離子水為參比, 測量593 nm波長處的吸光度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算抗氧化活性，以抗壞血酸為陽性對照，重復(fù)3次。

1.5 DPPH?自由基的清除能力測定

參照Cheng等[8]的方法，取2 mL 0.5 mmol/L的DPPH溶液與1 mL各濃度樣品提取液、70%乙醇水溶液混合，精確反應(yīng)10 min，測量波長517 nm處的吸光度值1。以抗壞血酸作為陽性對照，2.0 mL DPPH溶液+2.0 mL 70%乙醇水溶液的吸光度值0, 1.0 mL樣品溶液+3.0 mL 70%乙醇水溶液的吸光度值2。DPPH?清除率K1=[1-(1-2)/0]×100%。

1.6 花青素提取液刺激性分析

皮膚刺激性評價 參考Qian等[9]的方法稍作修改。雄性家兔分為4組，每組3只。在給藥前24 h, 在家兔背部兩側(cè)對稱各剪出兩塊2.5 cm× 2.5 cm的皮膚，剃凈兔毛，左側(cè)兩塊用無菌刺血針作“井”字形劃痕。用鹽酸乙醇溶液稀釋后得1.0、0.5、0.25 g/L的秋石斛花青素提取液，取提取液0.2 mL, 涂抹完整皮膚和破損皮膚各1塊。涂藥后紗布覆蓋,用無刺激膠布固定。用藥24 h后用溫水清洗掉受試物，分別于1、24、48、72 h后在同一自然光線下觀察和記錄用藥部位出現(xiàn)紅斑和水腫的情況。出現(xiàn)紅斑情況劃分為5級，即無紅斑、勉強(qiáng)可見、明顯紅斑、嚴(yán)重紅斑和紫紅色紅斑并有焦痂形成，分別賦予0～4分；出現(xiàn)水腫情況也劃分為5級，即無水腫、勉強(qiáng)可見、皮膚隆起(邊緣高出周圍皮膚)、水腫隆起約1 mm和水腫隆起大于1 mm且范圍擴(kuò)大，分別賦予0～4分。根據(jù)皮膚刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分并計算積分，積分值=(Σ1紅斑+Σ2水腫)/動物總數(shù), 0～0.5分為無刺激性；0.6～2.0分為輕度刺激性; 2.1～ 6.0分為中度刺激性；6.1～8.0分為強(qiáng)刺激性。依據(jù)皮膚刺激強(qiáng)度評價提取物對皮膚的刺激強(qiáng)度。

眼刺激性評價 參照Zhang等[10]的方法稍作修改。家兔分為4組，每組3只，取各濃度花青素提取液各0.1 mL，滴入家兔一側(cè)眼睛的結(jié)膜囊中, 上下眼瞼被動閉合1 s；另一側(cè)眼睛不滴，24 h內(nèi)也不沖洗，作為對照。滴入受試物1、24、48、72 h以及4和7 d后檢查家兔眼睛，若72 h未出現(xiàn)刺激反應(yīng)可終止實驗。若有累積角膜或者眼的其他刺激作用, 并且7 d內(nèi)不恢復(fù)，則需要延長觀察時間以確定該損傷是否可逆。按照眼損傷的評分標(biāo)準(zhǔn)(表1)記錄眼刺激反應(yīng)的積分，積分值=(Σ1角膜+Σ2虹膜+Σ3結(jié)膜充血+ Σ4結(jié)膜水腫+Σ5結(jié)膜分泌物)/動物總數(shù)[9]。0～3分為無刺激性; 4～8分為輕度刺激性；9～12分為中度刺激性; 13～ 16分為重度刺激性。

表1 眼損害的評分標(biāo)準(zhǔn)

2 結(jié)果和分析

2.1 花青素提取液的成分分析

花青素是酸性化合物，采用乙腈-0.1%甲酸水溶液作為洗脫流動相，用TOF/MS全掃描檢測，正離子掃描模式，用UNIFI質(zhì)譜軟件分析確定每個離子峰的質(zhì)譜裂解規(guī)律，對比相關(guān)文獻(xiàn)和標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行化合物鑒定。結(jié)果從秋石斛蘭花青素提取液中共檢測出15個花青素成分，苷元有飛燕草素、矢車菊素、錦葵素、矮牽牛素和芍藥素(表2，圖1)。

2.2 體外抗氧化活性

2.2.1 總抗氧化能力

獲得的硫酸亞鐵標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方程為=0.0053+0.0948，相關(guān)系數(shù)2=0.999，表明線性關(guān)系良好，線性范圍為0～160mol/L。從圖2可見,以抗壞血酸(Vc)為陽性對照，在一定濃度范圍內(nèi), Vc與秋石斛花青素提取液的總抗氧化能力(FRAP)均隨濃度上升而增強(qiáng)，且呈現(xiàn)出一定的線性趨勢, 但花青素的FRAP明顯高于同濃度的Vc。

表2 秋石斛的花青素類成分

*: 與標(biāo)準(zhǔn)品比對鑒定得出。

*: Compared with the standard identification.

圖1 秋石斛的花青素提取液總離子流圖

圖2 秋石斛蘭花青素提取液的總抗氧化能力

2.2.2 DPPH·的清除能力

從圖3可見，在一定濃度范圍內(nèi)，抗壞血酸與秋石斛花青素對DPPH·清除率均隨濃度的升高而增大，在0.02～0.06 g/L時二者曲線呈現(xiàn)一定的線性趨勢，后期斜率下降，表明此時抗氧化劑濃度的增高對清除率的影響降低。當(dāng)濃度大于0.12 g/L時, 二者對DPPH·的清除率均達(dá)到96%。秋石斛花青素和抗壞血酸對DPPH·的半數(shù)最大清除濃度(IC50)分別是0.027和0.034 g/L，說明秋石斛花青素對DPPH·自由基有較強(qiáng)的清除能力。

2.3 花青素提取液的安全性分析

2.3.1 皮膚刺激性

從表3可見，小于1.0 g/L的花青素提取液對家兔的正常皮膚和破損皮膚均沒有刺激性?；ㄇ嗨靥崛∫和磕? h后，部分家兔皮膚出現(xiàn)勉強(qiáng)可見的紅斑，正常皮膚對照組在1 h后未見紅斑和水腫，但在24 h后出現(xiàn)紅斑，可能是家兔的個體差異導(dǎo)致刺激反應(yīng)的延遲。48 h后所有家兔皮膚均恢復(fù)正常。

圖3 秋石斛蘭花青素提取液對DPPH·的清除能力

2.3.2 眼刺激性

從表4可見，低于1.0 g/L的花青素提取液對家兔眼睛無刺激性，而1.0 g/L提取液的刺激性較大。72 h后，所有家兔的眼睛均能恢復(fù)。

3 結(jié)論和討論

本研究選取廣泛應(yīng)用于切花、盆栽的重要熱帶蘭秋石斛‘三亞陽光’品種，提取并分析了其花瓣花青素成分，并對其體外抗氧化性和刺激性進(jìn)行了研究。目前對秋石斛花青素組成的研究很少。20世紀(jì)80年代，Kanchit采用高效液相色譜方法研究了秋石斛屬28種植物及雜交后代的類黃酮苷元組成,花瓣中含有矢車菊素和芍藥花素、天竺葵素[11]；李崇暉等[12]用HPLC-MS技術(shù)分析了6個蝴蝶石斛蘭品種的花青素成分，以矢車菊素苷元為主。本試驗中檢測出4個以飛燕草素為苷元的花青素苷，此前尚未在蝴蝶石斛蘭中檢出, 這可能是品種和檢測技術(shù)不同造成的, UPLC的靈敏度和分離能力均高于HPLC。

表3 秋石斛蘭花青素提取液的皮膚刺激反應(yīng)

表4 眼刺激反應(yīng)實驗結(jié)果

本研究結(jié)果表明，在花青素提取物中共檢出15個花青素成分，苷元為飛燕草素、矢車菊素、芍藥素、矮牽牛素和錦葵素，此前在大馬士革玫瑰()、藍(lán)莓()、杜鵑花()等的花青素提取液中有檢出以飛燕草色素為苷元的花色素[13–15]，但并未在秋石斛中檢出，可能是品種間的差異以及檢測技術(shù)靈敏度的強(qiáng)弱不同導(dǎo)致的。飛燕草色素是一種天然的抗氧化劑，且具有治療炎性疼痛的臨床潛力[16–17]，也有研究表明飛燕草色素可減少阿爾茲海默癥模型大鼠海馬區(qū)淀粉樣蛋白斑塊的形成，有輔助治療阿爾茲海默癥等認(rèn)知障礙疾病的潛力[18]。

不同抗氧化劑發(fā)揮作用的機(jī)制不同，但通常包括自由基清除、減緩或抑制脂質(zhì)氧化等[19–20]，總抗氧化能力以及對DPPH·的清除能力常用于評價植物提取物的抗氧化性[21]。本研究表明秋石斛‘三亞陽光’花青素提取物具有良好的抗氧化效果，花青素提取物濃度為0.13 g/L時，F(xiàn)RAP值達(dá)到了285mol/L, 而同濃度的抗壞血酸則是136mol/L。花青素提取物和抗壞血酸清除DPPH·的IC50值分別是0.027和0.034 g/L，花青素提取物的DPPH?自由基的清除能力強(qiáng)于同濃度的抗壞血酸。

安全性是評價提取物能否進(jìn)行后續(xù)開發(fā)利用的重要評判標(biāo)準(zhǔn)，而刺激性是安全性的重要指標(biāo)之一。刺激性通常包括對皮膚和眼睛的刺激。本研究結(jié)果表明，低于1.0 g/L的花青素提取液對家兔皮膚和眼睛均沒有刺激性。按照美國CIR的植物提取物安全評價決策樹[22]，秋石斛一般是用于切花和盆花，也被廣泛應(yīng)用于餐桌花中，但是，對于其提取物的表征還不夠完善，以后對其進(jìn)行安全評價時應(yīng)進(jìn)一步完善。此外，本試驗中花青素提取物濃度最高為1.0 g/L，以后可探討對眼和皮膚無刺激反應(yīng)的最高使用劑量。

秋石斛‘三亞陽光’作為一種廣泛應(yīng)用于盆栽和切花的熱帶蘭品種，在醫(yī)藥、食品、化妝品等領(lǐng)域也都具有潛在的應(yīng)用價值。蘭科石斛屬的種類繁多，但石斛作為一種重要的中藥材，自然繁殖難, 生長周期長，遠(yuǎn)不能滿足目前的市場需求，所以從石斛屬的植物中篩選出更多的藥用品種是解決目前石斛資源短缺的方法之一[23–26]。本研究為秋石斛的深度開發(fā)提供了理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐，以期秋石斛‘三亞陽光’能夠在更廣泛的領(lǐng)域?qū)崿F(xiàn)更大的價值。

[1] WU R H, LI Z J, WANG Y.varieties and their greenhouse cultivation [J]. Agric Eng Technol, 2007(1): 34–35.

武榮花, 李振堅, 王雁. 秋石斛品種及其溫室栽培 [J]. 農(nóng)業(yè)工程技術(shù)(溫室園藝), 2007(1): 34–35.

[2] HUANG Z M, LIN Q L, YU H M. A study on the industrial breeding technology of[J]J Putian Univ, 2002, 9(3): 22–26. doi: 10.3969/j.issn.1672-4143.2002.03.007.

黃志明, 林慶良, 佘慧敏. 蝴蝶石斛蘭工廠化育苗技術(shù)的研究 [J]. 莆田學(xué)院學(xué)報, 2002, 9(3): 22–26. doi: 10.3969/j.issn.1672-4143.2002. 03.007.

[3] JIAO L, LI Y W. Progress of blueberry anthocyanin extraction methods [J]. Beijing Agric, 2011(3): 10–11. doi: 10.3969/j.issn.1000-6966.2011. 03.006.

焦龍, 李玉偉. 藍(lán)莓果實中花青素提取方法的研究進(jìn)展 [J]. 北京農(nóng)業(yè), 2011(3): 10–11. doi: 10.3969/j.issn.1000-6966.2011.03.006.

[4] MA Y, WANG D, ZHANG C, et al. Clinical observation of antho- cyanins soft drink on asthenopia relief [J]. J Chin Inst Food Sci Technol, 2015, 15(8): 42–46. doi: 10.16429/j.1009-7848.2015.08.007.

馬越, 王丹, 張超, 等. 花青素飲料緩解視疲勞作用的人體試驗觀察 [J]. 中國食品學(xué)報, 2015, 15(8): 42–46. doi: 10.16429/j.1009-7848. 2015.08.007.

[5] ZHUO Y G, LIU R H, GU F S, et al. The factors influencing antho- cyanins stability and progress on application research [J]. Guangdong Chem Ind, 2018, 45(24): 70–72. doi: 10.3969/j.issn.1007-1865.2018. 24.037.

卓毓光, 劉儒華, 古福生, 等. 花青素穩(wěn)定性影響因素與應(yīng)用研究進(jìn)展 [J]. 廣東化工, 2018, 45(24): 70–72. doi: 10.3969/j.issn.1007- 1865.2018.24.037.

[6] HUI J, CUI X M, FU Y, et al. Ultrasonic method for extracting anthocyanins from purple sweet potato [J]. J Liaoning Univ (Nat Sci), 2015, 42(1): 74–78. doi: 10.3969/j.issn.1000-5846.2015.01.013.

回晶, 崔學(xué)敏, 付楊, 等. 紫薯花青素超聲提取工藝研究 [J]. 遼寧大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版), 2015, 42(1): 74–78. doi: 10.3969/j.issn.1000- 5846.2015.01.013.

[7] YANG L W, YANG H P, QUE S, et al. Comparative analysis of the antioxidant activity of the different components from[J]. Food Res Dev, 2016, 37(15): 208–210. doi: 10.3969/j.issn. 1005-6521.2016.15.048.

楊麗維, 楊紅澎, 確生, 等. 桑黃不同組分抗氧化活性的比較分析 [J]. 食品研究與開發(fā), 2016, 37(15): 208–210. doi: 10.3969/j.issn. 1005-6521.2016.15.048.

[8] CHENG P, WU J, HE X Y, et al. Study on the antioxidant activity and the change of monthly periodicity of flavonoids in[J]. Nat Prod Res Dev, 2020, 32(4): 576–581,651. doi: 10.16333/j.1001- 6880.2020.4.005.

程鵬, 鄔潔, 何先元, 等. 木芙蓉葉黃酮成分抗氧化及月周期規(guī)律研究 [J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2020, 32(4): 576–581,651. doi: 10. 16333/j.1001-6880.2020.4.005.

[9] QIAN J, CHEN J S, WEN L, et al. Anti-demodecidosis activity and skin safety ofL. leaves extract[J]. Infect Dis Inform, 2017, 30(6): 355–357. doi: 10.3969/j.issn.1007-8134.2017.06. 010.

錢江, 陳錦珊, 文磊, 等. 麻風(fēng)樹葉提取物體外抗蠕形螨活性及皮膚安全性的實驗研究 [J]. 傳染病信息, 2017, 30(6): 355–357. doi: 10.3969/j.issn.1007-8134.2017.06.010.

[10] ZHANG Z, LI X P, YANG F, et al. Stimulation test of two kinds of polysaccharides on rabbit eyes [J]. J Trad Chin Vet Med, 2016, 35(1): 35–37.

張哲, 李新圃, 楊峰, 等. 兩種多糖對家兔眼刺激性試驗 [J]. 中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志, 2016, 35(1): 35–37.

[11] Thammasiri K. Flower pigments in yellowspecies and hybrids [D]. Honolulu, HI, USA: University of Hawaii, 1984: 63– 68.

[12] Li C H, Ren Y, Huang S R, et al. Floral colors of phalaenopsis typeand their flavonoid composition [J]. Acta Hort Sin, 2013, 40(1): 107–116.

李崇暉, 任羽, 黃素榮, 等. 蝴蝶石斛蘭花色表型及類黃酮成分分析 [J]. 園藝學(xué)報, 2013, 40(1): 107–116.

[13] LIU L, CHEN L, LI H, et al. Dertermination of anthocyanidin compo- sition and content fromat different flowering periods by HPLC [J]. J Sichuan For Sci Technol, 2020, 41(4): 58–63. doi: 10.12172/202004260003.

劉雷, 陳黎, 李華, 等. 高效液相色譜法測定不同開花時期大馬士革Ⅲ玫瑰()花青素種類及含量 [J]. 四川林業(yè)科技, 2020, 41(4): 58–63. doi: 10.12172/202004260003.

[14] JIAO X Y, TIAN J L, SI X, et al. Research development of blueberry anthocyanin [J]. China Fruit Veg, 2020, 40(5): 26–31. doi: 10.19590/j. cnki.1008-1038.2020.05.005.

矯馨瑤, 田金龍, 司旭, 等. 藍(lán)莓花青素的研究進(jìn)展 [J]. 中國果菜, 2020, 40(5): 26–31. doi: 10.19590/j.cnki.1008-1038.2020.05.005.

[15] WANG Y, ZHANG G H, HE J S, et al. Research progress offlower color [J]. World For Res, 2020, 33(5): 19–24. doi: 10. 13348/j.cnki.sjlyyj.2020.0028.y.

王禹, 張廣輝, 赫京生, 等. 杜鵑花色研究進(jìn)展 [J]. 世界林業(yè)研究, 2020, 33(5): 19–24. doi: 10.13348/j.cnki.sjlyyj.2020.0028.y.

[16] XU J J, ZHANG Y W, REN G F, et al. Inhibitory effect of delphinidin on oxidative stress induced by H2O2in HepG2 cells [J]. Oxid Med Cell Longev, 2020, 2020: 4694760.

[17] SAUER R S, KRUMMENACHER I, BANKOGLU E E, et al. Stabili- zation of delphinidin in complex with sulfobutylether--cyclodextrin allows for antinociception in inflammatory pain [M]// Antioxidants & Redox Signaling. Larchmont, NY: Mary Ann Liebert, Inc., 2020.

[18] HEYSIEATTALAB S, SADEGHI L. Effects of delphinidin on patho- physiological signs of nucleus basalis of meynert lesioned rats as animal model of alzheimer disease [J]. Neurochem Res, 2020, 45(7): 1636–1646. doi: 10.1007/s11064-020-03027-w.

[19] LIN B M, ZHENG K B, ZHANG S, et al. Studies on antioxidant and-glucosidase inhibitory activities of ethanol extracts from peels and seeds of jaboticaba at different maturities [J]. J Trop Subtrop Bot, 2018, 26(3): 233–240. doi: 10.11926/jtsb.3831.

林寶妹, 鄭開斌, 張帥, 等. 不同成熟度樹葡萄果實醇提取物抗氧化和抑制-葡萄糖苷酶活性研究[J]. 熱帶亞熱帶植物學(xué)報, 2018, 26(3): 233–240. doi: 10.11926/jtsb.3831.

[20] CHENG Z Y, RE J, YAN G T, et al. Quantitative elucidation of the molecular mechanisms of hydroxyl radical quenching reactivity of phenolic compounds [J]. Bioorg Chem, 2003, 31(2): 149–162. doi: 10. 1016/s0045-2068(03)00027-0.

[21] ZHANG M. Evaluation of several methods of antioxidant testing[D]. Xi’an: Shaanxi Normal University, 2010: 1–12.

張明. 幾種體外抗氧化檢測方法的評價研究 [D]. 西安: 陜西師范大學(xué), 2010: 1–12.

[22] Liu Y H, JU Y. Construction of safety risk assessment system for cosmetic plant extracts [J]. Beijing Daily Chem Ind, 2016(2): 21–25.

劉宇紅, 琚瑤. 化妝品植物提取物安全風(fēng)險評估體系建設(shè) [J]. 北京日化, 2016(2): 21–25.

[23] ZOU C Y, LIU Y. Research advances inresearch in China [J]. J Anhui Agric Sci, 2010, 38(12): 6164–6166,6223. doi: 10.3969/j. issn.0517-6611.2010.12.035.

鄒成勇, 劉燕. 我國石斛屬植物研究進(jìn)展 [J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2010, 38(12): 6164–6166,6223. doi: 10.3969/j.issn.0517-6611.2010.12.035.

[24] ZHU H, HUANG X C, YANG H G, et al. Research progress of polysaccharides from[J]. Her Med, 2007(12): 1476–1479. doi: 10.3870/j.issn.1004-0781.2007.12.040.

朱華, 黃學(xué)萃, 楊海廣, 等. 石斛屬多糖的研究進(jìn)展 [J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報, 2007(12): 1476–1479. doi: 10.3870/j.issn.1004-0781.2007.12.040.

[25] YANG Y L, LAI P F, JIANG S P. Research progress of[J]. J Shandong Univ Trad Chin Med, 2008, 32(1): 82–85. doi: 10.3969/j.issn.1007-659X.2008.01.029.

楊一令, 來平凡, 蔣士鵬. 鐵皮石斛的研究進(jìn)展 [J]. 山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2008, 32(1): 82–85. doi: 10.3969/j.issn.1007-659X.2008.01. 029.

[26] SONG X Q, LUO Y B, ZHONG Y F, et al. Advances in the biote- chnology oforchid[J]. Acta Hort Sin, 2005, 32(4): 741– 747. doi: 10.3321/j.issn:0513-353X.2005.04.048.

宋希強(qiáng), 羅毅波, 鐘云芳, 等. 石斛屬植物生物技術(shù)研究概況 [J]. 園藝學(xué)報, 2005, 32(4): 741–747. doi: 10.3321/j.issn:0513-353X.2005. 04.048.

Component Analysis ofAnthocyanin Extract and Its Antioxidant Activity and Irritation

Lü Xiao-fan, ZHOU Xin-hong, WANG Ying, WU Ya-ni*

(School of Design, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200240, China)

In order to understand the function of anthocyanin from tropicalorchid, the anthocyanin of‘Sanya Sunny’ was extracted by ultrasonic-assisted method, the constituents of anthocyanin extract was analyzed by UPLC-QTOF-MS. The total antioxidant capacity (FRAP) and the scavenging capacity of diphenyl picroacyl (DPPH·) of the extract were determined, and ascorbic acid was used as a positive control to evaluate its antioxidant capacity. Rabbit skin irritation and eye irritation experiments were used to evaluate the irritation of extract. The results showed that a total of 15 anthocyanins were detected in the extract, such as aglycones include delphinium pigment, cyanidin, mallow pigment, petunia pigment and peony pigment. The extract has strong antioxidant activityThe scavenging ability of DPPH· and total antioxidant ability are both stronger than ascorbic acid at the same concentration. There were not irritation on rabbit eyes and skin treated with 0.25-1.0 g/L extract. Therefore, it was suggested that besides ornamental value,‘Sanya Sunny’ also had broad application space in medicine, food and cosmetics fields.

; Anthocyanins; Antioxidant; Safety experiment

10.11926/jtsb.4327

2020–10–27

2020–12–31

呂曉帆(1998～ )，在讀碩士研究生，研究方向為芳香植物資源與應(yīng)用。E-mail: Fanya.L@sjtu.edu.cn

E-mail: ynwu@sjtu.edu.cn