李翠蘭，袁越，劉文玲，胡大一

長(zhǎng) QT 綜合征（LQTS）是一種心臟離子通道病，表現(xiàn)為心電圖上QT 間期（QTc）延長(zhǎng)，T 波異常，易產(chǎn)生尖端扭轉(zhuǎn)型室性心動(dòng)過(guò)速、心室顫動(dòng)等惡性心律失常，進(jìn)而可引起暈厥甚至心臟性猝死。目前已經(jīng)報(bào)道的基因亞型至少有15 個(gè)[1]。兒茶酚胺敏感性多形性室性心動(dòng)過(guò)速（CPVT）是另一種離子通道病，常表現(xiàn)為無(wú)器質(zhì)性心臟病個(gè)體在交感神經(jīng)興奮狀態(tài)下發(fā)生雙向（bVT）或多形性室性心動(dòng)過(guò)速（pVT），可發(fā)展為心室顫動(dòng)，引起患者暈厥，甚至猝死。目前發(fā)現(xiàn)的致病基因主要有2 個(gè)：RyR2和CASQ2[2]。這兩種疾病都是少見(jiàn)但嚴(yán)重的遺傳性心律失常，是青少年發(fā)生暈厥、猝死的重要原因。LQTS 有不完全外顯現(xiàn)象，有些患者QTc 并不延長(zhǎng)或只是臨界值，有時(shí)QTc 在正常范圍或臨界值但又伴有顯著U波，暫且稱之為長(zhǎng)QTU（LQTU）綜合征。已有報(bào)道LQTS7 型（亦稱1 型Andersen-Tawil 綜合征）[3-4]和某些CPVT 患者[5]心電圖都可表現(xiàn)有顯著U 波。當(dāng)心電圖特征不典型時(shí)臨床上很難區(qū)分到底是LQTS還是CPVT。目前主要通過(guò)心電圖特征、臨床特點(diǎn)，并結(jié)合基因檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行診斷及鑒別分型。本研究對(duì)2 個(gè)心電圖上有顯著U 波，首診懷疑LQTU 綜合征的家系進(jìn)行了全外顯子篩查以期找到致病基因突變并確診分型及發(fā)病機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象及臨床資料的收集

篩查對(duì)象是2004～2005年來(lái)我院就診的兩個(gè)初診為L(zhǎng)QTU 綜合征的家系L79 和L104。初步診斷的依據(jù)主要來(lái)自于臨床特征，如交感神經(jīng)興奮相關(guān)的暈厥，心電圖記錄到QTc[或QU 間期（QUc）]延長(zhǎng)及室性心動(dòng)過(guò)速，無(wú)器質(zhì)性心臟病。記錄先證者及其父母和一級(jí)親屬的病史、心電圖和家族史，包括12 導(dǎo)聯(lián)靜息心電圖、24 h 動(dòng)態(tài)心電圖和運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)等結(jié)果?；蚝Y查研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者簽署知情同意書。

1.2 標(biāo)本處置方法

DNA 提?。涸谡鞯没颊咧橥夂螅槿』颊呒捌涓改富蛞患?jí)親屬的外周靜脈血樣2 ml，置于EDTA 抗凝管中。用全血基因組DNA 提取試劑盒提取DNA，并檢測(cè)DNA 的濃度及純度。

患者基因組DNA 全外顯子測(cè)序：兩個(gè)家系基因篩查分別在上海藥明康德醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所和北京康旭醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所完成。取患者2 μg 基因組DNA，打斷至200～300 bp，構(gòu)建基因組DNA 文庫(kù)。對(duì)基因組DNA文庫(kù)進(jìn)行人類全外顯子捕獲。對(duì)捕獲序列進(jìn)行二代測(cè)序、生物信息學(xué)分析及數(shù)據(jù)庫(kù)注釋，并按照美國(guó)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)與基因組學(xué)會(huì)（ACMG）指南對(duì)變異位點(diǎn)進(jìn)行致病性分析。

1.3 Sanger 測(cè)序

對(duì)于檢測(cè)到的疑似致病變異，采用軟件對(duì)目標(biāo)位點(diǎn)及所在外顯子（Exon）上下游區(qū)域設(shè)計(jì)引物，對(duì)先證者及其家系成員進(jìn)行突變檢測(cè)和驗(yàn)證，應(yīng)用軟件進(jìn)行突變致病性分析，并分析變異對(duì)蛋白結(jié)構(gòu)和功能的影響，并根據(jù)家系患病情況對(duì)疑似致病性變異位點(diǎn)進(jìn)行家系共分離分析。

1.4 微小基因（minigene）功能驗(yàn)證

這部分實(shí)驗(yàn)分兩部分。設(shè)計(jì)分別涉及CASQ2Exon 2/3/4 編碼區(qū)域和Exon 8/3/10 編碼區(qū)域。

分別構(gòu)建CASQ2（NM_001232.4:c.381C＞T）野生型minigene 質(zhì)粒和CASQ2（NM_001232.4:c.381C＞T）突變型minigene 質(zhì)粒，克隆載體：pEGFP-C1；克隆位點(diǎn)：XhoI/BamHI；插入序列信息：Exon 2+內(nèi)含子（Intron）2（前后各保留1 K）+Exon 3+Intron 3+Exon 4或者（Exon 8 加右側(cè)翼200 bp）+（Exon3 加左右側(cè)翼200 bp）+（Exon10 加左側(cè)翼200 bp）。

質(zhì)粒構(gòu)建方法：采用無(wú)縫克隆方式設(shè)計(jì)引物分別擴(kuò)增對(duì)應(yīng)Exon 2/3/4 和Exon 8/3/10 及部分相鄰Intron 序列的正常人基因組DNA 和攜 帶CASQ2（NM_001232.4:c.381C＞T）突 變位點(diǎn)的人基因組DNA，分別獲得3 個(gè)野生型目的片段和3 個(gè)突變型目的片段插入基因。有關(guān)Exon2/3/4 的引物信息如下：CASQ2-mini-AF/CAAGTCCGGACTCAGATCTCGAGCTTGTGGCC CAGGTCCTTGAACATAAAGC，CASQ2-mini-AR/GTCCAATTGCTGTCAGTGTTTGAAAATCAGAGG AGCGG；CASQ2-mini-BF/AACACTGACAGCAAT TGGACTAAATGCCAGCTTTGTTT，CASQ2-mini-BR/TAGCTTCCAACTCACTTCTGACCTTCCCTC;CASQ2-mini-CF/CAGAAGTGAGTTGGAAGCTA CATTTACCAA,CASQ2-mini-CR/AGTTATCTAG ATCCGGTGGATCCATTCTGAGTCCTCACTCTTG AAAAAGCCA。有關(guān)Exon 8/3/10 的引物信息如下：CASQ2-E8N-F/CAAGTCCGGACTCAGATCT CGAGGAAGATGATTTGAATGGGATC，CASQ2-E8N-R/ATTGGAAATAGTCCAGAATTTGTTCACAC CTTTTCTTCTCTTAGCCGTGTGC；CASQ2-E3N-F/TCTGGACTATTTCCAATTAAATG，CASQ2-E3N-R/CA TAGCATAATTCTAGGGTGGCTTAAAGATCAC；CASQ2-E10N-F/CCCTAGAATTATGCTATGTCATCTTTTATTTAA TGCTTATTTG，CASQ2-E10N-R/AGTTATCTAGATCCGGT GGATCCATCTGTGACATTCACCACCCCAATC。

將上述PCR 產(chǎn)物無(wú)縫克隆到pEGFP-C1 載體，分別命名為pEGFP-C1-CASQ2-W 和pEGFP-C1-CASQ2-M-c.381C＞T。用上述兩種表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)染293T 細(xì)胞，并于48 h 后提取293T 細(xì)胞總RNA，通過(guò)反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）聯(lián)合瓊脂糖凝膠電泳和DNA 測(cè)序技術(shù)，鑒定微小基因表達(dá)產(chǎn)物，闡明該CASQ2突變的致病機(jī)制。

2 結(jié)果

2.1 L79 家系研究結(jié)果

臨床發(fā)現(xiàn)：先證者女性，31歲，5歲時(shí)首次發(fā)生暈厥，QTc 0.44～0.49 s,QUc 0.64 s。母親QTc 0.51 s。曾被診斷為癲癇，9歲時(shí)診斷為L(zhǎng)QTS。9～15歲期間發(fā)作暈厥3～4 次，15～28歲暈厥兩次。近3年服用普萘洛爾（2.11 mg/kg）無(wú)暈厥。童年期心電圖上有顯著U 波，隨著年齡增加U 波不再明顯（圖1A～1C）。父母、姐姐均無(wú)暈厥史。

圖1 兒茶酚胺敏感性多形性室性心動(dòng)過(guò)速患者的心電圖U 波表現(xiàn)

基因檢測(cè)結(jié)果（圖2A）：該患者根據(jù)心電圖特點(diǎn)可初步診斷為L(zhǎng)QTS 1 型（LQT1）或者CPVT。曾用直接測(cè)序法發(fā)現(xiàn)先證者攜帶KCNQ1/c.921+1G＞T雜合突變，其母親和姐姐亦為雜合攜帶[6]。全外顯子基因篩查在先證者CASQ2基因上檢測(cè)到c.381C＞T（p.Gly127=）純合變異。在千人基因組數(shù)據(jù)庫(kù)（1 000 Genome）、人類Exon組整合數(shù)據(jù)庫(kù)等多個(gè)正常人數(shù)據(jù)庫(kù)中均未見(jiàn)該變異。經(jīng)家系Sanger 驗(yàn)證，其父母、姐姐均雜合攜帶，提示該變異分別來(lái)源于父母親。CASQ2基因c.381C＞T 變異位點(diǎn)在人類基因突變數(shù)據(jù)庫(kù)（HGMD）曾被報(bào)道與常染色體隱性遺傳CPVT 2 型相關(guān)，根據(jù)ACMG指南，該突變位點(diǎn)評(píng)級(jí)為疑似致病性變異?；颊吲R床表現(xiàn)與CPVT 2 型符合。結(jié)合臨床信息，可以診斷此例先證者為CPVT 伴L(zhǎng)QT1，其母親、姐姐為L(zhǎng)QT1 無(wú)癥狀者。

圖2 家系圖及CASQ2 基因測(cè)序圖

2.2 L104 家系研究結(jié)果

臨床情況：先證者（L104-01）女性，20歲，5歲首次暈厥。心電圖上QTc 0.43～0.44 s，QUc 0.71 s（V1～3）,V2導(dǎo)聯(lián)U 波顯著，幅度達(dá)到0.2 V，U 波幅度隨年齡增加而降低，形態(tài)也有所變化（圖1D～1F）。首次暈厥期間心電圖記錄到短陣bVT 和pVT。24 h動(dòng)態(tài)心電圖記錄到心率快時(shí)（124 次/min）QTc 可達(dá)0.52 s。現(xiàn)服用美西律（9.78 mg/kg）和普萘洛爾（1.96 mg/kg），隨訪至今15年無(wú)暈厥，但最近隨訪發(fā)現(xiàn)有頻發(fā)室性早搏二聯(lián)律出現(xiàn)。對(duì)患者24 h 動(dòng)態(tài)心電圖記錄中的室性早搏和U 波偶聯(lián)間期隨機(jī)測(cè)量發(fā)現(xiàn)，室性早搏聯(lián)律間期與U 波到達(dá)峰頂時(shí)間QUpeak 基本一致，提示室早可能起源于U 波。先證者的妹妹（L104-02）5歲首次暈厥發(fā)作，心電圖上亦有顯著U 波，且隨年齡增加而降低（圖1G～1I）。QTc 0.40 s，QUc 0.70 s。服用美西律（7.81 mg/kg）和普萘洛爾（1.25 mg/kg），至今7年無(wú)癥狀。父母心電圖均正常。

全外顯子基因檢測(cè)結(jié)果：患者被初步診斷為L(zhǎng)QTU 綜合征，根據(jù)Zhang 等[4]關(guān)于ATS 基因型表型關(guān)系研究預(yù)測(cè)可能為L(zhǎng)QTS7 型，但對(duì)KCNJ2基因篩查結(jié)果陰性（數(shù)據(jù)未提供）。全外顯子基因篩查發(fā)現(xiàn)，先證者攜帶有CASQ2/c.381C＞T（p.Gly127=）純合突變，妹妹亦攜帶此純合突變，其父母均雜合攜帶（圖2B）。結(jié)合患者臨床表現(xiàn)，CASQ2/c.381C＞T（p.Gly127=）純合突變可能是導(dǎo)致該家系這兩例患者發(fā)病的原因。

2.3 CASQ2/c.381C＞T 的minigene 功能驗(yàn)證結(jié)果

c.381C＞T 變異位于3 號(hào)Exon 上，首先進(jìn)行了包含Exon2/3/4 的minigene 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。PCR 擴(kuò)增正常組預(yù)期序列為421 bp（T 后序列為載體轉(zhuǎn)錄序列，第一個(gè)C和T之間的序列為目的基因Exon轉(zhuǎn)錄序列，第二個(gè)C 為突變位點(diǎn)處）：catggtcctgctggagttcgtgaccgc cgccgggatcactctcggcatggacgagctgtacaagtccggactcagatctcg agCttgtggcccaggtccttgaacataaagctataggctttgtgatggtggatgcc aagaaagaagccaagcttgccaagaaactgggttttgatgaagaaggaagcctg tatattcttaagggtgatcgcacaatagagtttgatggCgagtttgcagctgatgtct tggtggagttcctcttggatctaattgaagacccagtggagatcatcagcagcaaa ctggaagtccaagccttcgaacgcattgaagactacatcaaactcattggctttttca agagtgaggactcagaaTggatccaccggatctagataactgatcataatcagcc ata。

但是結(jié)果在野生型和突變型的樣本均檢測(cè)到了2 個(gè)條帶（圖3）。將野生型和突變型的2 個(gè)條帶分別進(jìn)行Sanger 測(cè)序，通過(guò)比對(duì)發(fā)現(xiàn)：（1）大條帶結(jié)果示3 號(hào)Intron 上存在一個(gè)選擇性剪接位點(diǎn)，使用該位點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄版本，可使3 號(hào)Exon 序列增加54 bp，增加序列為：tgaagaaggaaatctcttgtttgaacatgtgtgtatgtgcgtg tggcatttcag。對(duì)野生型來(lái)講，此時(shí)編碼Exon 3 的序列結(jié)束在第420 位置，之后直接遇到TGA 終止密碼子（圖3A），而對(duì)于c.381C＞T 突變型來(lái)講，突變導(dǎo)致編碼序列380_420 段缺失，第379 位核苷酸直接連接這54 bp 核苷酸（圖3B），在第438 位核苷酸之后遇到TGA 終止密碼子。（2）小條帶結(jié)果示c.381C＞T突變位點(diǎn)造成了3號(hào)Exon上380_420段41bp堿基缺失，缺失序列為：gTgagtttgcagctgatgtc ttggtggagttcctcttggat；由于這41 bp 的堿基缺失，第379 位核苷酸后直接連接4 號(hào)Exon（圖3C、3D），導(dǎo)致編碼序列在第384 個(gè)核苷酸之后提前產(chǎn)生終止密碼子TGA，預(yù)測(cè)翻譯產(chǎn)物為只包含128 個(gè)AA的截短蛋白。而野生型的3 號(hào)Exon 則以正常剪接順序和4 號(hào)Exon 進(jìn)行了連接，預(yù)測(cè)可產(chǎn)生399 個(gè)AA 的完整全長(zhǎng)蛋白。匯總上述序列比對(duì)結(jié)果畫出了剪接示意圖見(jiàn)圖3E。

圖3 利用CASQ2 Exon 2/3/4 序列進(jìn)行的微小基因技術(shù)驗(yàn)證結(jié)果

其次，假如3 號(hào)Exon 后面的Intron 上無(wú)選擇性剪接位點(diǎn)，剪接情況是否如預(yù)期一樣可以順利形成Exon 之間的連接？為此，本研究又設(shè)計(jì)了Exon 3 前后分別為8 號(hào)和10 號(hào)Exon 序列的實(shí)驗(yàn)。PCR 擴(kuò)增正常組預(yù)期序列為354 bp（G、T 之間的序列為目的基因Exon 轉(zhuǎn)錄序列，前后為載體轉(zhuǎn)錄序列，C 為突變位點(diǎn)處）：catggtcctgctggagttcgtgaccg ccgccgggatcactctcggcatggacgagctgtacaagtccggactcagat ctcgagGaagatgatttgaatgggatccacattgtggcctttgcagagaaga gtgatccaggttttgatgaagaaggaagcctgtatattcttaagggtgatcgca caatagagtttgatggCgagtttgcagctgatgtcttggtggagttcctcttgga tctcgttgcctactgggagaagactttcaagattgacctattcaggccacaga ttggggtggtgaatgtcacagaTggatccaccggatctagataactgatcata atcagccata。結(jié)果在野生型和突變型的樣本均檢測(cè)到了單個(gè)條帶（圖4A～4B）。Sanger 測(cè)序比對(duì)發(fā)現(xiàn)，c.381C＞T 突變位點(diǎn)與預(yù)期一致，造成了3 號(hào)Exon 上380_420 段41 bp 堿基缺失（圖4C），缺失序列為：gTgagtttgcagctgatgtcttggtggagttcctcttggat。

圖4 利用CASQ2 Exon 8/3/10 序列進(jìn)行的微小基因技術(shù)驗(yàn)證結(jié)果

3 討論

本研究首次在2 個(gè)家系中的3例中國(guó)LQTU 患者中發(fā)現(xiàn)CASQ2/c.381C＞T（p.Gly127=）純合突變可引起CPVT，并通過(guò)minigene 驗(yàn)證法證實(shí)這個(gè)位于Exon 編碼序列內(nèi)的同義突變c.381C＞T（p.Gly127=）發(fā)揮作用的機(jī)制，是通過(guò)形成新的剪接位點(diǎn)而引起碼內(nèi)跳讀，最終提前產(chǎn)生終止密碼子而產(chǎn)生截短蛋白。另外發(fā)現(xiàn)這些CPVT 患者表現(xiàn)為在心電圖上QTc 偶有臨界值延長(zhǎng)，但以顯著U 波為主，并有U波隨年齡增加而幅度降低的現(xiàn)象。這些結(jié)果豐富了中國(guó)CPVT 患者的基因突變譜。

CPVT 是常發(fā)生在青少年中的一種原發(fā)性惡性心律失常，目前發(fā)現(xiàn)主要和編碼雷諾丁受體（RyR2）和集鈣蛋白（CASQ2）的基因突變有關(guān)。CASQ2 蛋白是肌漿網(wǎng)內(nèi)主要的Ca2+儲(chǔ)存蛋白，通過(guò)接頭蛋白/三合蛋白鉚定在RyR2 上，作為肌漿網(wǎng)內(nèi)Ca2+緩沖劑和RyR2 對(duì)腔內(nèi)Ca2+敏感性的調(diào)節(jié)器來(lái)調(diào)節(jié)鈣瞬變恢復(fù)（Ca2+transient restitution）。CASQ2不同突變可通過(guò)上述幾個(gè)環(huán)節(jié)形成舒張期鈣滲漏[2,7]。已知與CPVT 有關(guān)的CASQ2突變有28 個(gè)，其中在中國(guó)CPVT 患者中發(fā)現(xiàn)7 個(gè)突變[8-10]。

Roux-Buisson等[11]報(bào)道，CASQ2/c.381C＞T+c.546delT 復(fù)合雜合突變可引起一家系內(nèi)患者CPVT 癥狀。于是Roux-Buisson 等在CASQ2/c.381C＞T 所處的3 號(hào)Exon 前后各使用8 號(hào)和10 號(hào)Exon序列進(jìn)行minigene功能驗(yàn)證，結(jié)果證實(shí)c.381C＞T（p.Gly127=）突變雖未引起編碼氨基酸變化但其改變了3 號(hào)Exon 后面的生理性剪切位點(diǎn)并引入了一個(gè)新的剪切位點(diǎn)，致使其后40 個(gè)核苷酸缺失，并在第128 位置產(chǎn)生提前終止密碼子（PTC）。該患者的CPVT 可 能 是CASQ2/c.381C＞T 和c.546delT 兩 個(gè) 突變共同作用的結(jié)果。

為何Roux-Buisson 等在minigene 驗(yàn)證CASQ2/c.381C＞T 功能時(shí)選用Exon 8/10，而非前后順序銜接的Exon 2/4？就此，本研究設(shè)計(jì)了使用Exon 2/3/4序列的minigene 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在對(duì)照個(gè)體及CPVT 患者，除了Exon 3 后的正常剪接位點(diǎn)外，在Exon 3 后面的3 號(hào)Intron 上均存在另一個(gè)選擇性剪接位點(diǎn)（圖3），導(dǎo)致出現(xiàn)2 個(gè)條帶。測(cè)序結(jié)果分析表明，正常人使用選擇性剪切位點(diǎn)時(shí)生成140 個(gè)AA 的截短蛋白，而使用正常剪切位點(diǎn)時(shí)可生成399個(gè)AA 的完整全長(zhǎng)蛋白。但攜帶CASQ2/c.381C＞T 純合突變的患者不管使用正常剪切位點(diǎn)還是使用選擇性剪切位點(diǎn)都生成截短蛋白（128 個(gè)AA 和146 個(gè)AA）。所以，CASQ2/c.381C＞T 突變攜帶者與正常人的差別可能不是通過(guò)這個(gè)選擇性剪切位點(diǎn)造成的（反正都生成了截短蛋白，隨后可能降解掉），而是在使用正常剪切位點(diǎn)時(shí)突變攜帶者產(chǎn)生截短蛋白，但正常人不會(huì)。接著本研究又設(shè)計(jì)了與文獻(xiàn)一樣使用Exon 8/3/10 序列的minigene 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，均得到和文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致的結(jié)論，只是發(fā)現(xiàn)文獻(xiàn)中作者由于計(jì)算錯(cuò)誤，把缺失41 個(gè)核苷酸誤報(bào)成了40 個(gè)。

Rizzi 等[12]在CASQ2-R33Q 純合突變基因敲入小鼠模型的研究發(fā)現(xiàn)，該突變通過(guò)增加CASQ2-R33Q 的降解而降低CASQ2 蛋白含量，致肌漿網(wǎng)內(nèi)鈣含量降低，連接腫脹，CASQ2 突變蛋白之間的聚集受損。CASQ2 蛋白是肌漿網(wǎng)內(nèi)主要的Ca2+儲(chǔ)存蛋白，作為僅有1 個(gè)AA 改變的錯(cuò)義突變R33Q 尚且如此，而 c.381C＞T 的純合突變可導(dǎo)致蛋白截短至不足原來(lái)長(zhǎng)度的三分之一，故有理由推測(cè)這種變化可能會(huì)通過(guò)無(wú)義介導(dǎo)的mRNA 衰變（nonsense-mediated mRNA decay）或蛋白降解[11]而影響其作為肌漿網(wǎng)內(nèi)Ca2+緩沖劑的功能，容易形成舒張期鈣滲漏而觸發(fā)心律失常。

既往有研究提示了CPVT 和U 波的關(guān)系。Aizawa 等[13]2006年在CPVT 患者身上觀察到U 波電交替現(xiàn)象，以及長(zhǎng)間歇后負(fù)向U 波可以短暫變成正向U 波。趙東生等[14]也發(fā)現(xiàn)，CPVT 患者靜息狀態(tài)下心電圖常表現(xiàn)為右胸導(dǎo)聯(lián)（V1～3）T 波切跡、雙峰及U 波高大。2008年Viitasalo 等[15]發(fā)現(xiàn)，CPVT患者的最大U 波/T 波幅度比值為0.8±0.6，顯著大于正常對(duì)照組的0.4±0.3，β 受體阻滯劑可以降低快速心率下的U 波幅度。這些研究支持CPVT 患者的U 波與延遲后除極（DAD）觸發(fā)活動(dòng)相關(guān)的假說(shuō)。同時(shí)研究者還發(fā)現(xiàn)室性早搏的偶聯(lián)間期與U 波的偶聯(lián)間期幾乎一致。與這些研究類似，本研究在3例CPVT 患者中發(fā)現(xiàn)在V2導(dǎo)聯(lián)存在顯著U 波，且U 波幅度有隨年齡增加而逐漸降低甚至消失的現(xiàn)象。其中在1例患者觀察到室性早搏聯(lián)律間期與U 波到達(dá)峰頂時(shí)間QUpeak 高度一致，提示此例患者室性早搏可能起源于U 波。

本研究中的3例患者中，L79 單純?chǔ)?受體阻滯劑治療，隨訪近3年無(wú)暈厥。另外2例姐妹倆均為β 受體阻滯劑和美西律聯(lián)用，跟蹤隨訪7～15年無(wú)暈厥。提示β 受體阻滯劑單獨(dú)或聯(lián)用美西律對(duì)控制這類CPVT 有效。長(zhǎng)期效果還有待于跟蹤隨訪研究證實(shí)。

基因篩查及minigene 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)合家系臨床表現(xiàn)最后可確診這3例患者為CASQ2/c.381C＞T（p.Gly127=）純合突變引起的2 型CPVT，L79 先證者同時(shí)伴有LQT1。CASQ2引起的CPVT 比較罕見(jiàn)，本研究提示c.381C＞T 可能是國(guó)人CASQ2基因的突變熱點(diǎn)，對(duì)復(fù)雜表型的遺傳性心律失?；颊哌M(jìn)行全外顯子篩查可以快速定位基因突變，幫助確診。

心原性猝死在中國(guó)人群的發(fā)生率為14.48/10萬(wàn)[16]，而諸如致死率較高的CPVT 在我國(guó)幾個(gè)主要的兒童與成人心律失常中心的診斷病例均極少，說(shuō)明絕大多數(shù)一線醫(yī)生對(duì)其缺乏認(rèn)識(shí)而可能導(dǎo)致誤診[17]。本研究結(jié)果為及早識(shí)別CPVT 的疾病特征、了解其發(fā)病機(jī)理、提高對(duì)CPVT 的早期診斷和干預(yù)并改善預(yù)后提供了證據(jù)。

本研究的局限性：CPVT 患者癥狀發(fā)作時(shí)在心電圖上的典型表現(xiàn)是雙向性或多形性室性心動(dòng)過(guò)速，但其發(fā)病的突發(fā)性使得這個(gè)特征不容易被記錄到，所以本研究中只獲得了L104-01 患者的一段短陣雙向及多形室速記錄，另外2例患者沒(méi)有室性心動(dòng)過(guò)速記錄，造成開(kāi)始時(shí)的診斷困惑。另外，功能研究部分只進(jìn)行了minigene 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，下一步計(jì)劃進(jìn)行誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS）和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等全細(xì)胞水平研究，包括免疫印跡，以及細(xì)胞電生理學(xué)參數(shù)等方面的探索。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突