任婧，萬(wàn)玲玲，2，魯峰，陳曦航

1.南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院整形美容外科，廣州 510515；2.宜春學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，江西 宜春 336000

如何重建因創(chuàng)傷、腫瘤切除、先天性缺陷等導(dǎo)致的軟組織缺損是整形外科領(lǐng)域所面臨的巨大挑戰(zhàn)[1]。傳統(tǒng)的組織工程技術(shù)以外源性種子細(xì)胞、支架材料和微環(huán)境為基礎(chǔ)所構(gòu)建出的脂肪組織，由于存在外源性感染風(fēng)險(xiǎn)、體積小及長(zhǎng)期轉(zhuǎn)歸不理想等因素，仍然達(dá)不到臨床所需大體積脂肪組織的構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)，這極大限制了其應(yīng)用范圍。

“組織工程室技術(shù)”利用在體脂肪組織本身豐富的脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞（adipose-derived stromal cells，ASCs）、細(xì)胞外基質(zhì)支架及微環(huán)境所構(gòu)建的工程室化脂肪組織，為大體軟組織缺損修復(fù)提供了新的解決方案[2,3]。課題組前期通過(guò)微創(chuàng)手術(shù)游離小體積帶蒂脂肪瓣，結(jié)合外負(fù)壓吸引裝置（external volume expansion,EVE），成功地構(gòu)建了預(yù)擴(kuò)張工程化脂肪瓣（expanded prefabricated adipose tissue，EPAT），實(shí)現(xiàn)了全內(nèi)源性大體積脂肪再生[4]。這在大體積工程化脂肪組織的構(gòu)建中展現(xiàn)出了良好的應(yīng)用前景。然而應(yīng)力參與構(gòu)建工程化脂肪組織的分子機(jī)制尚不明確。

ASCs作為參與脂肪再生的關(guān)鍵種子細(xì)胞，可以直接分化為脂肪細(xì)胞，并在宏觀上體現(xiàn)為脂肪組織體積的增大[5]，探索其增殖機(jī)制是明確應(yīng)力誘導(dǎo)脂肪再生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。我們前期發(fā)現(xiàn)力學(xué)刺激作用于細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix,ECM），而ASCs可通過(guò)其細(xì)胞膜表面特異性力學(xué)感受器Integrinβ1感應(yīng)并轉(zhuǎn)導(dǎo)力學(xué)信號(hào)并傳導(dǎo)至細(xì)胞質(zhì)骨架（fibrous actin,Factin），繼而產(chǎn)生增殖效應(yīng)[4]。然而這僅是我們對(duì)ASCs內(nèi)力學(xué)轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)的初步探索，其下游機(jī)制值得進(jìn)一步深入研究。

近年來(lái)，細(xì)胞核不僅作為細(xì)胞內(nèi)硬度最高和基因轉(zhuǎn)錄發(fā)生的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，而且作為新型力學(xué)感受器，成為細(xì)胞生物力學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一[6]。其中，位于細(xì)胞核內(nèi)膜與染色質(zhì)之間的核纖層蛋白（Lamins），是胞核骨架的重要組成部分[6]。Lamins通過(guò)LINC復(fù)合體（linker of nucleoskeleton and cytoskeleton complex）與細(xì)胞質(zhì)骨架直接結(jié)合，同時(shí)可直接與染色質(zhì)上DNA片段結(jié)合，這為細(xì)胞內(nèi)力學(xué)信號(hào)的傳導(dǎo)提供了良好路徑[7]。Lamins分為A型和B型，A型主要包括異構(gòu)體Lamin A和Lamin C，B型主要包括Lamin B1和Lamin B2[8]。研究表明，Lamins在細(xì)胞力學(xué)信號(hào)傳導(dǎo)中發(fā)揮著重要作用，其異常表達(dá)或突變可減弱細(xì)胞對(duì)機(jī)械刺激的敏感性及反應(yīng)性[9]。因此，本課題將探索核纖層蛋白Lamins對(duì)ASCs機(jī)械敏感性及增殖的調(diào)控作用，探討外負(fù)壓吸引促進(jìn)脂肪瓣再生的分子機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 8～10周清潔級(jí)SD雄性大鼠42只，平均體重為（370±20）g，購(gòu)買(mǎi)后飼養(yǎng)于南方醫(yī)科學(xué)大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心。每日常規(guī)飲食。

1.1.2 主要試劑及儀器 多聚甲醛、I型膠原酶等購(gòu)自Sigma公司；Lamin A/C、Lamin B1、Lamin B2抗體購(gòu)自美國(guó)abcam 公司；Western blot試劑盒購(gòu)自德國(guó)Rebstock公司；Integrinβ1敲低慢病毒的制備、Lamin A/C過(guò)表達(dá)慢病毒的制備這部分實(shí)驗(yàn)委托中國(guó)上海吉?jiǎng)P基因化學(xué)技術(shù)有限公司完成；大鼠ASCs專用培養(yǎng)基購(gòu)買(mǎi)自中國(guó)賽業(yè)生物科技有限公司；Flexcell細(xì)胞培養(yǎng)板購(gòu)買(mǎi)自美國(guó)Flexcellint國(guó)際公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 EPAT構(gòu)建 將3%戊巴比妥按30 mg/kg注射入大鼠腹腔，靜待其深入麻醉后，將大鼠腹部剃毛并固定于小動(dòng)物固定臺(tái)。術(shù)前于大鼠下腹部用醫(yī)用碘伏及酒精消毒3遍，隨后鋪單并暴露手術(shù)區(qū)域。

行腹股溝轉(zhuǎn)瓣手術(shù)：用11號(hào)尖刀于一側(cè)腹股溝區(qū)域做長(zhǎng)約1.5 cm，平行于髂前上棘的斜行切口。沿腹股溝脂肪瓣分離脂肪組織，暴露軸型血管并給予仔細(xì)保護(hù)，隨后于腹股溝背處結(jié)扎血管遠(yuǎn)端并離斷脂肪瓣，修剪脂肪瓣使其大小約2.5 cm×1 cm。于大鼠下腹部分離皮下隧道，隨后將帶蒂脂肪瓣轉(zhuǎn)移至下腹部中線處,并用5-0可吸收線將脂肪瓣遠(yuǎn)端固定于腹部筋膜上。生理鹽水沖洗檢查有無(wú)出血點(diǎn)，用6-0尼龍線間斷縫合皮膚，術(shù)畢。此步驟是為了將大鼠的腹股溝脂肪瓣轉(zhuǎn)移至腹部中線處，方便隨后的負(fù)壓外擴(kuò)張器的使用。

放置組織外擴(kuò)張負(fù)壓裝置（EVE）：術(shù)后1星期可見(jiàn)大鼠腹股溝傷口愈合良好，便開(kāi)始給予負(fù)壓吸引。將大鼠固定于體外定制的小動(dòng)物固定器內(nèi)，標(biāo)記脂肪瓣在皮膚表面的投影，隨后將負(fù)壓吸引裝置固定于大鼠腹部，調(diào)節(jié)參數(shù)，負(fù)壓罩直徑為2 cm，負(fù)壓值為-2 kPa，每次持續(xù)負(fù)壓吸引6～8 h。對(duì)照組同樣固定于體外定制的小動(dòng)物固定器內(nèi)6～8 h，不給于負(fù)壓吸引處理(圖1)。

圖1 預(yù)擴(kuò)張脂肪組織（EPAT）大鼠動(dòng)物模型示意圖Fig.1 The animal model of expanded prefabricated adipose tissue（EPAT）

1.2.2 SD大鼠ASCs培養(yǎng)與分組 在超凈臺(tái)內(nèi)用將SD大鼠腹股溝脂肪瓣剪碎，用0.2%的I型膠原酶恒溫?fù)u床中37℃消化60 min，終止消化，1000 r/min離心5 min取細(xì)胞沉淀，用生長(zhǎng)培養(yǎng)基重懸后接種于培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，48 h后第1次換液，以后隔2d換1次液體，細(xì)胞生長(zhǎng)融合達(dá)90%時(shí)按1：2比例傳代。

通過(guò)慢病毒構(gòu)建Integrinβ1 ASCs表達(dá)抑制模型；運(yùn)用3D打印技術(shù)構(gòu)建體外靜態(tài)細(xì)胞拉伸裝置，同時(shí)給予對(duì)照組組和Lamin A/C過(guò)表達(dá)組12%、6%、0%的靜態(tài)形變作用，通過(guò)細(xì)胞免疫熒光、Western Blot檢測(cè)Lamin A/C表達(dá)情況。

通過(guò)慢病毒構(gòu)建Lamin A/CASCs過(guò)表達(dá)模型；運(yùn)用3D打印技術(shù)構(gòu)建體外靜態(tài)細(xì)胞拉伸裝置，同時(shí)給予對(duì)照組組和Lamin A/C過(guò)表達(dá)組12%、6%、0%的靜態(tài)形變作用，通過(guò)細(xì)胞免疫熒光、Western Blot檢測(cè)ASCs增殖情況。

1.2.3 細(xì)胞加力裝置及細(xì)胞加力 我們使用3D打印定制的靜態(tài)細(xì)胞拉伸裝置（Flexcell Device）[4]對(duì)細(xì)胞進(jìn)行拉伸作用。Flexcell Device由聚四氟乙烯材料構(gòu)建的底座，和帶有彈性膜的Flexcell Bioflex平板（標(biāo)準(zhǔn)6孔板）構(gòu)成的上板組成。通過(guò)設(shè)置底座上聚四氟乙烯圓柱的高度即可調(diào)節(jié)施加在彈性膜上的形變水平。我們采用了12%、6%和0%的形變參數(shù)，分別由高14.36 mm、12.07 mm和6.8 mm的圓柱產(chǎn)生。當(dāng)?shù)装迮cBioflex彈性六孔板疊加合并時(shí)，圓柱將作用于Bioflex彈性六孔板的彈性膜，并將彈性膜向上部頂起，制造出膜中心與膜外周的高度差，繼而使彈性膜產(chǎn)生穩(wěn)定的形變，與此同時(shí)種植于彈性膜表面的細(xì)胞也將通過(guò)粘附作用產(chǎn)生相應(yīng)的形變（圖2）。

圖2 靜態(tài)拉伸系統(tǒng)裝置示意圖Fig.2 Illustration of Flexcell devicein vitro

1.2.4 免疫印跡檢測(cè) 提取組織/細(xì)胞裂解物。Bradford法測(cè)定蛋白濃度。將蛋白樣品與Loading buffer混合，100℃水浴中加熱5 min，離心后取上清，配制12%分離膠、5%濃縮膠，SDS-PAGE電泳,隨后將蛋白轉(zhuǎn)至PVDF膜，用含5%脫脂奶粉封閉液室溫封閉1 h，加一抗：Lamin A/C、Lamin B1、Lamin B2和內(nèi)參GAPDH，4℃孵育過(guò)夜，TBS洗膜后分別加二抗，37℃孵育1 h，洗膜后進(jìn)行ECL化學(xué)發(fā)光、曝光、顯影，以Lamin A/C、Lamin B1、Lamin B2與GAPDH灰度值之比作為蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.5 組織染色切片 4%多聚甲醛固定脂肪瓣；行脫水、石蠟包 埋等處理；行組織石蠟切片Lamin A/C免疫化學(xué)染色，并在光學(xué)顯微鏡下拍照，最后通過(guò)圖像分析評(píng)估Lamin A/C表達(dá)情況。

1.2.6 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè) 4%多聚甲醛固定細(xì)胞15 min；洗滌后0.3%TritonX-100通透10 min，洗滌后山羊血清封閉液封閉60 min；加入一抗4孵育過(guò)夜。次日洗滌后加入熒光染料標(biāo)記的二抗避光孵育90 min；洗滌后DAPI核染色劑避光孵育10 min，洗滌后加入防熒光淬滅劑。熒光顯微鏡下觀察拍照。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)呈現(xiàn)平均值與正負(fù)誤差值，使用Graph Pad Prism Software version 6.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。每次測(cè)試3次獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。統(tǒng)計(jì)分析方法使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，單因素方差分析或雙因素方差分析進(jìn)行檢測(cè)，P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 EVE作用早期EPAT內(nèi)ASCs增殖顯著增多

EVE作用下，可見(jiàn)Ki67陽(yáng)性的細(xì)胞（圖3）散在分布于脂肪組織的間質(zhì)中，并且脂肪瓣中細(xì)胞Ki67陽(yáng)性的細(xì)胞的數(shù)目于第1周明顯增多，后隨時(shí)間逐漸減少,但在對(duì)照組中，于脂肪間質(zhì)中只發(fā)現(xiàn)了零星散在的Ki67陽(yáng)性的細(xì)胞，并于各時(shí)間點(diǎn)未見(jiàn)明顯數(shù)量級(jí)變化。統(tǒng)計(jì)結(jié)果（圖3）提示,在不同時(shí)間點(diǎn),實(shí)驗(yàn)組Ki67陽(yáng)性的細(xì)胞的數(shù)目明顯高于對(duì)照組（P<0.05）。并且在實(shí)驗(yàn)組中Ki67陽(yáng)性的細(xì)胞的數(shù)目在第1周達(dá)到峰值，但從第4周第8周逐漸下降（P<0.01）。反之對(duì)照組中細(xì)胞Ki67陽(yáng)性的細(xì)胞的數(shù)目隨時(shí)間沒(méi)有顯著變化，未有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

圖3 脂肪瓣中細(xì)胞增殖情況檢測(cè)Ki67的免疫組化染色圖及Ki67陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的統(tǒng)計(jì)分析圖（#和##代表不同時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，P<0.05，P<0.01；**表示不同時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組組間比較，P<0.01）；標(biāo)尺=100 mm）Fig.3 The changes of cell proliferation during adipose tissue regeneration at different time pointsImmunohistochemical staining of Ki67 and quantification analysis of Ki67-positive cells in both groups at indicated times(#,##indicated P<0.05 and P<0.01 experimental group compared with control group at different times,respectively;**indicated P<0.01,comparison of experimental group at different times;Scalebars=100 mm)

2.2 EVE作用早期EPAT內(nèi)Lamin A/C的表達(dá)量顯著下降

我們首先檢測(cè)了Lamin B1、Lamin B2、Lamin A/C的表達(dá)情況，結(jié)果顯示（圖4 A），與未施力組相比，EVE作用早期EPAT內(nèi)Lamin A/C的表達(dá)量顯著下降（P<0.05），Lamin B1、Lamin B2的表達(dá)則無(wú)明顯差異。進(jìn)一步通過(guò)免疫化學(xué)檢測(cè)脂肪瓣切片中Lamin A/C的表達(dá)，結(jié)果可見(jiàn)（圖4 B），未施力組脂肪瓣內(nèi)可見(jiàn)散在分布于脂肪組織的間質(zhì)中的Lamin A/C陽(yáng)性細(xì)胞，但EVE作用下脂肪瓣內(nèi)Lamin A/C陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量下顯著下降（P<0.01）。

圖4 脂肪瓣內(nèi)差異表達(dá)的Lamins的篩選A：EVE組與對(duì)照組脂肪瓣內(nèi)差異性Lamins的篩選 B：EVE組脂肪瓣內(nèi)Lamin A/C的免疫組化染色圖及Lamin A/C陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的統(tǒng)計(jì)分析圖（#和##代表不同時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，P<0.05，P<0.01；**表示不同時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組組間比較，P<0.01；標(biāo)尺=100 mm）Fig.4 The changes of Lamins expression during adipose tissue regeneration at different time pointsA:The changes of Lamins expression in both groups at indicated times;B:Immunohistochemical staining of Lamin A/C and quantification analysis of Lamin A/C-positive cells in both groups at indicated times(#,##indicated P<0.05 and P<0.01 experimental group compared with control group at different times,respectively;**indicated P<0.01,comparison of experimental group at different times;Scalebars=100 mm)

2.3 靜態(tài)應(yīng)力通過(guò)激活I(lǐng)ntegrinβ1-Lamin A/C信號(hào)通路

通過(guò)“靜態(tài)拉伸系統(tǒng)裝置”將12%、6%、0%的形變分別作用于對(duì)照組和Integrinβ1敲低組ASCs，8 h后，通過(guò)免疫印跡檢測(cè)Lamin A/C在對(duì)照組和Integrinβ 1敲低組中ASCs內(nèi)的表達(dá)程度。結(jié)果顯示（圖5），在不同細(xì)胞形變程度的刺激下,Integrinβ1敲低組ASCs細(xì)胞內(nèi)Lamin A/C的表達(dá)量均高于對(duì)照組（P<0.05）。

圖5 Lamin A/C作為整聯(lián)蛋白β1下游蛋白負(fù)響應(yīng)應(yīng)力刺激對(duì)照組和整聯(lián)蛋白β1慢病毒敲低組，Lamin A/C的免疫印跡圖及免疫印跡灰度值統(tǒng)計(jì)分析圖（#和##表示不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組與整聯(lián)蛋白β1慢病毒敲低組比較，P<0.05，P<0.01；*和**分別表示不同時(shí)間點(diǎn)的組間比較P<0.05，P<0.01）Fig.5 Inhibition of the Integrin β1 expression o in ASCs reversed the down-regulation of Lamin A/C expression by mechanical stressWestern blot analysis and quantification of Lamin A/C expression in ASCs in wild group and Sh-RNA integrinβ1 group(#,##indicated P<0.05 and P<0.01 control group compared with ShRNA-integrin β1 group,respectively;*,**indicated P<0.05 and P<0.01,comparison of control group at different times,respectively)

2.4 過(guò)表達(dá)Lamin A/C可逆轉(zhuǎn)靜態(tài)應(yīng)力對(duì)ASCs的促增殖作用

通過(guò)“靜態(tài)拉伸系統(tǒng)裝置”將12%、6%、0%的形變分別作用于對(duì)照組和Lamin A/C過(guò)表達(dá)組ASCs，8 h后，通過(guò)細(xì)胞免疫檢熒光檢測(cè)Ki67在對(duì)照組和Lamin A/C過(guò)表達(dá)組中ASCs內(nèi)的表達(dá)程度。結(jié)果顯示，在不同細(xì)胞形變程度的刺激下,Lamin A/C過(guò)表達(dá)組Ki67陽(yáng)性ASCs細(xì)胞數(shù)低于對(duì)照組（P<0.05，圖6）。

圖6 Lamin A/C負(fù)性響應(yīng)應(yīng)力刺激調(diào)控ASCs增殖對(duì)照組和Lamin A/C慢病毒過(guò)表達(dá)組Ki67的免疫熒光染色圖及Ki67陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的統(tǒng)計(jì)分析圖（#和##表示不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組與Lamin A/C慢病毒過(guò)表達(dá)組比較，P<0.05，P<0.01；*和**分別表示不同時(shí)間點(diǎn)的組間比較P<0.05，P<0.01；標(biāo)尺=100 mm）Fig.6 Over-expression of the Lamin A/Creversed the proliferation of ASCs by mechanical stress.Immunofluorescence staining of Ki67 and quantification analysis of the number of Ki67 positive cells in control group and Lamin A/C lentivirus over expression group(#,##indicated P<0.05 and P<0.01,control group compared with Lamin A/Cover-expression group,respectively;*,**indicated P<0.05 and P<0.01,comparison of the control group at different times,respectively;Scalebars=100 mm)

3 討論

脂肪組織工程室技術(shù)是修復(fù)大體軟組織缺損的新方案，其中力學(xué)誘導(dǎo)ASCs增殖是關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)，新型力學(xué)感受器核纖層蛋白Lamin A/C作為Integrinβ1下游分子，可響應(yīng)力學(xué)刺激，并通過(guò)減低表達(dá)量負(fù)性調(diào)控ASCs增殖，繼而參與力學(xué)誘導(dǎo)的工程室化組織再生。

近年來(lái)，細(xì)胞核不僅作為細(xì)胞內(nèi)硬度最高和基因轉(zhuǎn)錄發(fā)生的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，而且作為新型力學(xué)感受器/反應(yīng)器，成為細(xì)胞生物力學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。Lamin A/C不僅可以起到維持核內(nèi)穩(wěn)態(tài)和保護(hù)染色質(zhì)的作用，同時(shí)也可以作為機(jī)械刺激細(xì)胞核內(nèi)的反應(yīng)器，將力學(xué)信號(hào)傳導(dǎo)至核內(nèi)，可直接或間接參與基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控[10]。我們首次發(fā)現(xiàn)，脂肪組織內(nèi)ASCs內(nèi)Lamin A/C可負(fù)性響應(yīng)力學(xué)刺激，并介導(dǎo)細(xì)胞增殖反應(yīng)。與此類似的是，Qi等[11]探討了細(xì)胞核骨架蛋白Lamin A/C在高血壓高張應(yīng)變誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞增殖中的作用及其機(jī)制，發(fā)現(xiàn)了Lamin A/C作為重要的保護(hù)性因子，其表達(dá)降低參與了高血壓高張應(yīng)變誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞異常，并提示有Lamin A/C可能作為高血壓血管重建的潛在靶標(biāo)分子，具有重要的臨床轉(zhuǎn)化價(jià)值。

Lamin A/C作為Integrinβ1下游關(guān)鍵分子，負(fù)性調(diào)控ASCs增殖功能。至此我們證實(shí)細(xì)胞內(nèi)力學(xué)傳導(dǎo)信號(hào)已基于細(xì)胞骨架系統(tǒng)從胞外傳導(dǎo)至胞核。Lamins通LINC復(fù)合體（linker of nucleoskeleton and cytoskeleton complex）與細(xì)胞質(zhì)骨架直接結(jié)合，同時(shí)可直接與染色質(zhì)上DNA片段結(jié)合，這為細(xì)胞內(nèi)力學(xué)信號(hào)的傳導(dǎo)提供了良好路徑[8]。與此同時(shí)，染色質(zhì)作為化學(xué)信號(hào)中基因轉(zhuǎn)錄發(fā)生的核心部位，力學(xué)刺激能激活轉(zhuǎn)錄因子（transcription factor,TF）促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄[9]。重要的是,Lamin A/C可與基因啟動(dòng)子區(qū)域內(nèi)的DNA序列或片段結(jié)合，可通過(guò)與DNA片段可逆性結(jié)合，調(diào)控TF轉(zhuǎn)錄[12]。因此Lanin A/C作為細(xì)胞核內(nèi)力學(xué)感受器，起到了將力學(xué)信號(hào)化學(xué)化的關(guān)鍵作用。

本實(shí)驗(yàn)首次證實(shí)了Lamin A/C作為Integrin軸下游關(guān)鍵分子，通過(guò)負(fù)性調(diào)控ASCs增殖參與力學(xué)誘導(dǎo)的工程室化組織再生過(guò)程。本實(shí)驗(yàn)深入探討了工程室化組織再生過(guò)程中種子細(xì)胞ASCs擴(kuò)增的分子機(jī)制，為脂肪組織工程室的臨床應(yīng)用提供了參考依據(jù)。