謝友新，鐘麗萍，鐘雨融

（廣東省佛山市三水區(qū)疾病防治所，廣東 佛山 528100）

0 引言

目前，肺泡灌洗找抗酸桿菌、支氣管鏡活檢病理、支氣管鏡刷檢找抗酸桿菌、痰涂片找結(jié)核桿菌、痰結(jié)核菌培養(yǎng)均為臨床對(duì)肺結(jié)核的主要診斷手段，但由于我國(guó)痰培養(yǎng)陰性肺結(jié)核患者占比居多，導(dǎo)致上述診斷敏感度較差，現(xiàn)為探究更有效的診斷方式[1-2]，特選取2019 年1 月至2020 年8 月期間在我院接受治療的100 例肺結(jié)核患者以及100 例同期在我院接受治療的非肺結(jié)核性肺部疾病患者作為研究對(duì)象，對(duì)其分析后現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019 年1 月至2020 年8 月期間在我院接受治療的100 例肺結(jié)核患者作為臨床研究對(duì)象為觀察組，并選取100 例同期在我院接受治療的非肺結(jié)核性肺部疾病患者做對(duì)比對(duì)象為對(duì)照組。觀察組中男51例，女49例。年齡16～62歲，平均（44.39±2.21）歲。對(duì)照組中男50 例，女50 例。年齡16～61 歲，平均（44.41±2.23）歲。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，所有參與研究的患者的一般資料（年齡以及性別）等均無顯著差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。醫(yī)院倫理委員會(huì)已對(duì)本研究的實(shí)施予以批準(zhǔn)，且患者及家屬也已對(duì)研究基礎(chǔ)了解，并簽署同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn)[3]：（1）符合肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)：胸部CT 掃描或胸片攝片所獲病灶特點(diǎn)與該疾病影像學(xué)特征相符，有活動(dòng)性肺結(jié)核臨床表現(xiàn)，痰結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陰性，臨床抗結(jié)核治療有效；（2）非肺結(jié)核組：實(shí)驗(yàn)室檢查不支持肺結(jié)核診斷，影像學(xué)檢查與肺結(jié)核影像學(xué)特征不相符，無肺結(jié)核臨床表現(xiàn)。

排除標(biāo)準(zhǔn)[4]：（1）合并HIV 等免疫缺陷病者；（2）接受放化療治療者。

1.2 方法

所有患者均接受PPD 皮試以及結(jié)核感染T 淋巴細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)，其中PPD 試驗(yàn)是將5U PPD 注入患者的前臂皮內(nèi)，在兩至三天后，測(cè)量硬結(jié)直徑，對(duì)測(cè)量結(jié)果進(jìn)行記錄，根據(jù)測(cè)量到的縱向直徑以及橫向直徑計(jì)算硬結(jié)平均直徑，即（縱向直徑+橫向直徑）/2=硬結(jié)平均直徑（mm）。所得值在10mm 以上則屬于試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

SP0T-TB 測(cè)定是在患者入院后的三天內(nèi)對(duì)患者的靜脈血進(jìn)行采集，血液采集量為8mL，將其置入含肝素抗凝劑的血樣管中，將白細(xì)胞進(jìn)行分離。再在其中加入細(xì)胞培養(yǎng)液，待細(xì)胞重懸后，再對(duì)其進(jìn)行洗滌。在已包被抗IFN-y 抗體微量板的四個(gè)孔中加入細(xì)胞培養(yǎng)液，以此為陰性對(duì)照。再將植物血凝素（PHA）加至孔中作為陽(yáng)性對(duì)照。將MTB 特異混合多肽CFP-10 與ESAT-6(上海復(fù)星)加至孔中為實(shí)驗(yàn)孔。再于每個(gè)孔中加入培養(yǎng)好的懸液，每孔懸液內(nèi)含細(xì)胞25 萬。在37℃環(huán)境中，對(duì)微量板進(jìn)行培養(yǎng)，約16～20h。再通過PBS 進(jìn)行洗滌，共洗滌四次。再加入抗人IFN-y 單克隆抗體，更換至2℃～8℃環(huán)境中進(jìn)行培育，培育一個(gè)小時(shí)，再通過PBS 進(jìn)行洗滌，共洗滌四次。再在每個(gè)孔內(nèi)加入顯色底物液，放置于室溫環(huán)境中，七分鐘后開始觀察結(jié)果。并通過計(jì)算機(jī)輔助成像分析系統(tǒng)對(duì)斑點(diǎn)進(jìn)行閱讀、統(tǒng)計(jì)。陽(yáng)性評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)為：空白對(duì)照孔有6～10 個(gè)斑點(diǎn)數(shù)，與此同時(shí)，抗原A 孔/B 孔內(nèi)的斑點(diǎn)數(shù)高于或等于空白對(duì)照孔版點(diǎn)數(shù)的兩倍或空白對(duì)照孔有0～5 個(gè)斑點(diǎn)數(shù)，抗原A 孔/B 孔內(nèi)的斑點(diǎn)數(shù)比空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)多六個(gè)以上（包括六個(gè)）。陰性評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：不滿足陽(yáng)性評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，但陽(yáng)性對(duì)照孔具備良好的結(jié)果。通過T-SPOT-TB 的T 細(xì)胞斑點(diǎn)數(shù)計(jì)算空白對(duì)照孔與抗原A孔/B 孔內(nèi)的斑點(diǎn)數(shù)之間的差值，以最大值為最終結(jié)果。抗原A 孔斑點(diǎn)數(shù)與空白對(duì)照孔的斑點(diǎn)數(shù)差值即抗原B 孔T 細(xì)胞斑點(diǎn)數(shù)，抗原B 孔斑點(diǎn)數(shù)與空白對(duì)照孔的斑點(diǎn)數(shù)差值即抗原B 孔T 細(xì)胞斑點(diǎn)數(shù)。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比兩組患者的PPD 皮試以及結(jié)核感染T 淋巴細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果。

對(duì)比觀察組患者PPD 皮試、結(jié)核感染T 淋巴細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)以及聯(lián)合檢測(cè)的準(zhǔn)確率情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

通過SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件計(jì)算研究?jī)?nèi)需對(duì)比的數(shù)據(jù)，樣本率的比較通過χ2檢驗(yàn)計(jì)算，正態(tài)計(jì)量數(shù)據(jù)用“”表示，并通過t檢驗(yàn)計(jì)算；以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組PPD 皮試以及結(jié)核感染T 淋巴細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果比較

檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，觀察組患者的PPD 皮試陽(yáng)性率以及結(jié)核感染T 淋巴細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組患者的，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳細(xì)情況見表1。

表1 兩組PPD 皮試以及結(jié)核感染T 淋巴細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果比較 [n（%）]

2.2 觀察組PPD 皮試、結(jié)核感染T 淋巴細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)以及聯(lián)合檢測(cè)的準(zhǔn)確率情況

檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，觀察組患者中，聯(lián)合檢測(cè)準(zhǔn)確率顯著高于單獨(dú)診斷準(zhǔn)確率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳細(xì)情況見表2。

表2 觀察組PPD 皮試、結(jié)核感染T 淋巴細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)以及聯(lián)合檢測(cè)的準(zhǔn)確率情況[n（%）]

3 討論

經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)核病屬于單一致病菌中致死率最高的病種，隨著免疫缺陷疾病種類增多、耐藥結(jié)核桿菌株增多以及人口流動(dòng)性增大，該疾病在全球患病率均呈逐年遞增趨勢(shì)[5-6]。且該疾病患病初期無典型臨床特征，起病隱匿，故造成誤診率高等情況，導(dǎo)致患者的最佳治療時(shí)機(jī)被錯(cuò)過。故探求該疾病的特異性診斷指標(biāo)尤為重要[7-8]。

本研究經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，觀察組患者的PPD 皮試陽(yáng)性率以及結(jié)核感染T 淋巴細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組患者的，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；觀察組患者中，聯(lián)合檢測(cè)準(zhǔn)確率顯著高于單獨(dú)診斷準(zhǔn)確率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這提示了，PPD 皮試以及結(jié)核感染T淋巴細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在結(jié)核病以及非結(jié)核性肺病的鑒別中具有較高價(jià)值，且聯(lián)合診斷能夠顯著提高診斷準(zhǔn)確率[9-10]。究其原因，PPD 屬于皮膚試驗(yàn)，屬于純蛋白衍化物，也屬于混合物，包含了諸多種類的抗原，卡介苗菌株、環(huán)境分枝桿菌、致病性分枝桿菌都有其所擁有的抗原，故單獨(dú)應(yīng)用該試驗(yàn)檢測(cè)并不能有效進(jìn)行疾病鑒別[11]。而T 淋巴細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)是以結(jié)核分枝桿菌特異性抗原分泌物，對(duì)活化T 細(xì)胞進(jìn)行刺激，使其生成IFN-γ 原理建立的,具有較高的特異性，抗原并不會(huì)與其他致病菌發(fā)生較叉，故敏感性較高[12]。故兩者聯(lián)合應(yīng)用可顯著提高診斷準(zhǔn)確率。

綜上所述，在肺結(jié)核的診斷中PPD 皮試聯(lián)合結(jié)核感染T 淋巴細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)效果顯著。