張金添，余雪瑩，謝群

(1. 莆田學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部，福建 莆田 351100；2. 福建醫(yī)科大學(xué)，福建 福州 350122)

食管癌是源于食管黏膜上皮或腺體的惡性腫瘤，其組織學(xué)類型分為鱗癌、腺癌、腺鱗癌、小細胞癌等多種類型，中國以鱗癌最多見，占90%以上[1-2]。食管癌具有發(fā)病率高、轉(zhuǎn)移性強、早期診斷率低、死亡率高等特點[3]。腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后的主要原因，所以探討腫瘤浸潤及轉(zhuǎn)移相關(guān)機制是當(dāng)今醫(yī)學(xué)研究的熱點。T淋巴瘤侵襲轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)因子2(T-cell lymphoma invasion and metastasis factor2，TIAM2)基因是TIAM1的同源物，TIAM1在正常腦組織和惡性腫瘤中的作用已明確，但是TIAM2的功能還不清楚。TIAM2在食管癌中的表達的研究國內(nèi)外少見報道，本研究通過免疫組化SP法檢測TIAM2在食管鱗癌中的表達，探討TIAM2在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用，報告如下。

1 資料和方法

1.1 病例資料 研究組：食管鱗癌108例，對照組：正常食管組織42例，來自手術(shù)標(biāo)本切緣，離癌腫5 cm以上。研究組標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理診斷為食管鱗癌，患者術(shù)前未經(jīng)治療，且無其他惡性腫瘤病史。研究組中男性73例，女性35例；年齡41～81歲，平均年齡為(62.00±5.26)歲。

1.2 試劑 兔抗人TIAM2抗體購自美國Abcam公司，免疫組化SP法試劑盒和DAB顯色試劑盒購自福州邁新公司。

1.3 標(biāo)本檢測 TIAM2免疫組化染色采用SP法，主要步驟：石蠟標(biāo)本切片厚度4 μm，脫蠟至水、3%H2O2孵育滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性，置于枸櫞酸鈉緩沖溶液進行高壓抗原修復(fù)，血清封閉，滴加TIAM2抗體于4℃冰箱孵育過夜，滴加二抗室溫孵育1 h，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片。用已知陽性切片作為陽性對照，用PBS緩沖液替代一抗作為陰性對照。

1.4 結(jié)果判定 TIAM2陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：①著色部位判斷標(biāo)準(zhǔn)：TIAM2染色位于細胞質(zhì)，呈淺黃色、棕黃色或棕褐色為陽性；②著色強度：無著色記0分、淺黃記1分、棕黃記2分、棕褐色記3分；③陽性細胞比例：在400倍顯微鏡下計數(shù)200個腫瘤細胞，<10%記0分，10%～25%記1分，25%～50%記2分，>50%記3分。兩項評分結(jié)果相乘作為最終得分：0～3分記為低表達記陰性(-)，≥4分記為高表達記陽性(+)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

TIAM2陽性染色主要在細胞質(zhì)，呈淺黃色、棕黃色或棕褐色，見圖1。陽性對照圖片見圖2，陰性對照圖片見圖3。

圖1 TIAM2在食管鱗癌中的陽性表達(免疫組化，SP法，×400) 圖2 陽性對照圖片(免疫組化，SP法，×400) 圖3 陰性對照圖片(免疫組化，SP法，×400)

2.1 TIAM2在食管鱗癌及正常食管組織中的表達 TIAM2在食管鱗癌中表達的陽性率明顯高于正常食管組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)，見表1。

表1 TIAM2在食管鱗癌及癌旁正常食管組織中的表達

2.2 TIAM2蛋白表達與食管鱗癌臨床病理特征的關(guān)系 TIAM2蛋白表達陽性率與食管鱗癌的病理分級、TNM分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，而與患者的性別和年齡無關(guān)，見表2。

表2 TIAM2蛋白表達與食管鱗癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

人類基因TIAM2位于染色體6q25.2上，其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生兩個mRNA亞型，短轉(zhuǎn)錄本編碼有626個殘基的蛋白質(zhì)TIAM2S，長轉(zhuǎn)錄本編碼有1701個氨基酸殘基的蛋白質(zhì)TIAM2L[4]，這些蛋白是鳥苷酸交換因子TIAM的亞家族成員。TIAM1是人類TIAM2的同源物，TIAM1在人類惡性腫瘤和神經(jīng)元發(fā)育中起重要作用，可特異性激活Rac-1，通過TIAM1-Rac信號途徑改變腫瘤細胞的形態(tài)，誘導(dǎo)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移，作為一種癌蛋白，TIAM1過表達有助于多種不同類型的惡性腫瘤的發(fā)生，并與腫瘤細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移、惡性程度及預(yù)后關(guān)系密切[5-6]，包括腸癌[7]、胰腺癌[8]、宮頸癌[9]、肺癌等[10]。而TIAM1和 TIAM2在正常腦組織中富集，是神經(jīng)元生長、發(fā)育所必需的，參與調(diào)節(jié)大腦神經(jīng)的運動性和可塑性[4，11-12]。

TIAM2在腫瘤中的研究較少，主要在肺癌和肝癌中有研究。Zhao ZY等[13]研究發(fā)現(xiàn)TIAM2在非小細胞肺癌中高表達；沉默TIAM2在肺癌細胞的表達，可抑制細胞侵襲和運動能力，也抑制Rac1的激活；下調(diào)TIAM2可上調(diào)E-cadherin的表達，下調(diào)MMP-3、Twist和Snail的表達；Rac1的激活和一些侵襲相關(guān)基因的調(diào)控可能參與了這一過程。Li SK等[14]研究發(fā)現(xiàn)TIAM2在原發(fā)性肺癌相關(guān)成纖維細胞中的表達水平明顯高于正常肺成纖維細胞，TIAM2沉默成纖維細胞的遷移和侵襲能力下降；在直接共培養(yǎng)體系中，與TIAM2沉默成纖維細胞共培養(yǎng)時，癌細胞的遷移和侵襲受到阻滯，認為成纖維細胞TIAM2促進肺癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。Chen JS等[15]研究發(fā)現(xiàn)TIAM2S在肝癌中高表達，而在正常肝細胞中不表達，同時TIAM2S表達與TIAM1呈正相關(guān)，TIAM2S表達增加促進肝癌細胞的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致肝癌細胞的增殖和侵襲。

本研究發(fā)現(xiàn)TIAM2在食管鱗癌中呈高表達，且與食管鱗癌的病理分級、TNM分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，因此筆者推測，TIAM2作為增殖調(diào)控基因，可能參與了人類腫瘤的發(fā)生，同時有促進腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移作用。已有學(xué)者研究認為TIAM2可能通過以下機制發(fā)揮其促癌作用：TIAM2可能直接與激活的Rho家族GTPases結(jié)合，觸發(fā)下游信號；或者，TIAM2可以直接與下游的支架蛋白結(jié)合，激活信號傳導(dǎo)并發(fā)揮其致瘤效應(yīng)[15]。隨著研究的深入，TIAM2對腫瘤發(fā)生發(fā)展的相關(guān)機制將逐步被闡明。

總之，TIAM2 蛋白可能在食管癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重要的作用，其有望成為食管癌重要標(biāo)志物和分子治療靶點。