劉杰文 陳紫桂 朱莎莎 齊鳳杰

作者單位：深圳市羅湖區(qū)人民醫(yī)院病理科，廣東，深圳518001

透明細(xì)胞癌作為臨床中發(fā)病率相對(duì)較低的惡性腫瘤類型，臨床中以腎透明細(xì)胞癌較為常見［1］。近年來，有報(bào)道發(fā)現(xiàn)其在口腔涎腺部位的發(fā)生率相對(duì)較高，并于2005年正式被WHO 頭頸部腫瘤進(jìn)行分類命名［2］。鼻咽部透明細(xì)胞癌是指發(fā)生于鼻咽部的惡性腫瘤，在臨床中的發(fā)生率相對(duì)較低，且在國(guó)內(nèi)鮮有報(bào)道，這增加了其在臨床中的診療難度［3］。免疫組化診斷和分子檢測(cè)作為近年來臨床中常見的診斷方式，在許多惡性腫瘤疾病的診斷和早期篩查中發(fā)揮出了較好的臨床應(yīng)用效果［4?5］?；诖?，本研究將分析鼻咽部透明細(xì)胞癌的臨床病理特征及免疫組化診斷或分子檢測(cè)診斷價(jià)值，以期為鼻咽部透明細(xì)胞癌的早期鑒別和診斷提供臨床依據(jù)，現(xiàn)將報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年7月至2020年7月于本院接受治療30 例鼻咽部透明細(xì)胞癌患者的臨床資料進(jìn)行分析，納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合2017年版《WHO 頭頸部腫瘤分類》［6］中鼻咽部透明細(xì)胞癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②入院時(shí)簽署相關(guān)知情同意書；③病例資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤疾病者；②合并嚴(yán)重腎臟功能疾病者；③合并精神障礙者。其中包括男性18例，女性12 例，平均年齡（52.30±12.11）歲，從腫瘤部位來看，有10 例位于右側(cè)口咽旁軟腭后方，11 例位于鼻咽頂后壁右側(cè)，12 例位于鼻咽頂后壁左側(cè)；從腫瘤分期來看，包括Ⅰ期12 例，Ⅱ期11 例，Ⅲ期7 例。本研究經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且患者均自愿參與本研究。

1.2 方法

1.2.1 組織病理學(xué)特征

所有患者均手術(shù)切除標(biāo)本，常規(guī)病理組織石蠟切片，使用蘇木精?伊紅（hematoxylin?eosin stain?ing，HE）染色處理，觀察患者的組織病理學(xué)表現(xiàn)。

1.2.2 免疫組化檢測(cè)

采用EnVision 兩步法使用試劑盒（天津邁基生物科技有限公司，ME9200）進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，DAB 染色后使用蘇木精復(fù)染，使用光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果。免疫組化切片陽(yáng)性信號(hào)均表現(xiàn)為棕黃色顆粒狀，p53、p63 和Ki?67 定位于細(xì)胞核，CK7 和CK5/6 定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，GFAP 定位于細(xì)胞質(zhì)。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行判定，其中：無著色為（-）；陽(yáng)性細(xì)胞率<25%為（+）；陽(yáng)性細(xì)胞率為25%～75%為（++）；陽(yáng)性細(xì)胞率>75%為（+++）［7］。

1.2.3 FISH 分子檢測(cè)

事先準(zhǔn)備好EWSR1 檢測(cè)探針試劑盒（德國(guó)ZytoVision 公司，型號(hào)Z?2096?50），參照說明書對(duì)探針混合物的配比進(jìn)行調(diào)整，將10 μL的探針混合物滴入玻片的雜交區(qū)域，加蓋玻璃片后使用橡皮膠進(jìn)行封邊處理。在暗室中使用熒光顯微鏡（OLYMPUS公司）觀察熒光雜交信號(hào)，判斷FISH 信號(hào)，同時(shí)使用FISH 分析軟件對(duì)圖像進(jìn)行分析，陰性：細(xì)胞核易位信號(hào)≤10%；陽(yáng)性：細(xì)胞核易位信號(hào)>10%。

1.3 觀察指標(biāo)

①HE 染色后針對(duì)患者的組織病理學(xué)特征進(jìn)行分析，包括腫瘤大小以及病理學(xué)表現(xiàn)等；②統(tǒng)計(jì)各免疫組化指標(biāo)的檢測(cè)陽(yáng)性率；③統(tǒng)計(jì)患者的FISH 分子檢測(cè)陽(yáng)性率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)；P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 組織病理學(xué)特征

腫瘤直徑為1.9 cm～4.6 cm，平均直徑為（3.40±0.83）cm，患者的病理組織主要以灰白色和灰黃色為主，鏡下組織學(xué)形態(tài)觀察可見細(xì)胞呈片狀和條索狀分布（見圖1），細(xì)胞核相對(duì)較小，多見于細(xì)胞周邊或中央，并無核分裂或壞死，同時(shí)可見侵犯周圍組織，間質(zhì)伴有玻璃樣變的纖維性間質(zhì)。

圖1 HE 染色組織病理學(xué)特征（HE，×200）Figure 1 Histopathological characteristics of HE staining（HE，×200）

2.2 免疫組化檢測(cè)結(jié)果

Ki?67 檢測(cè)的陽(yáng)性率最低為6.67%，其次為GFAP和CK7，檢測(cè)陽(yáng)性率分別為13.33%和20.00%，其他各指標(biāo)的陽(yáng)性率均達(dá)到了40%以上，其中以p63 和CK5/6 的陽(yáng)性率最高分別為46.67%和53.33%，不同免疫組化檢測(cè)的陽(yáng)性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

表1 免疫組化檢測(cè)結(jié)果［n（%）］Table 1 Immunohistochemical test results［n（%）］

2.3 分子診斷結(jié)果

30 例患者經(jīng)FISH 分子檢測(cè)EWSR1基因表達(dá)后，發(fā)現(xiàn)有4 例表現(xiàn)為陰性，26 例表現(xiàn)為陽(yáng)性（見圖2），陽(yáng)性率為86.67%。

圖2 FISH 分子檢測(cè)陰性病例（SP，×200）Figure 2 FISH molecular test negative cases（SP，×200）

2.4 診斷價(jià)值比較

FISH 分子檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)的檢出率分別為86.87%和100%，均明顯高于單獨(dú)免疫組化指標(biāo)檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但聯(lián)合檢測(cè)與FISH 分子檢測(cè)的檢出率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表2。

表2 診斷價(jià)值比較［n（%）］Table 2 Comparison of diagnostic value［n（%）］

3 討論

透明細(xì)胞癌在臨床中的發(fā)生率相對(duì)較低，既往臨床研究發(fā)現(xiàn)其可累及身體中的多個(gè)部位，常見部位包括口腔、舌等部位，對(duì)患者的日常生活質(zhì)量產(chǎn)生了巨大的影響［8］。然而，臨床中發(fā)生于鼻咽部的透明細(xì)胞癌卻相對(duì)較少，且臨床中針對(duì)該方向的研究也相對(duì)較少，不利于對(duì)鼻咽部透明細(xì)胞癌患者進(jìn)行早期診斷及治療。Makiko 等［9］在對(duì)鼻咽部透明細(xì)胞癌患者的臨床特點(diǎn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)時(shí)，發(fā)現(xiàn)該病多見于中年群體，男女的發(fā)病比率并無明顯差異。臨床研究發(fā)現(xiàn)，鼻咽部透明細(xì)胞癌患者主要表現(xiàn)為鼻腔內(nèi)流水性液體和耳鳴等，CT 檢查后可見明顯的膨脹性腫塊，并伴有邊界不清的特點(diǎn)［10?11］。有研究發(fā)現(xiàn)，由于鼻咽部透明細(xì)胞癌在臨床中的發(fā)生率相對(duì)較低，因此應(yīng)當(dāng)做好與其他類似疾病的鑒別診斷，如鼻腔腎細(xì)胞樣癌等［12］。Ceballo 等［13］指出，針對(duì)鼻咽部透明細(xì)胞癌患者的治療應(yīng)當(dāng)以局部切除治療為主。但William 等人［14］認(rèn)為鼻咽部透明細(xì)胞癌雖然屬于低度惡性腫瘤，但仍有部分患者出現(xiàn)了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，因此建議在患者術(shù)后進(jìn)行放化療治療，并做好定期復(fù)查，并密切監(jiān)測(cè)患者是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)。

本研究結(jié)果與本文的研究結(jié)果相似［15］。本研究發(fā)現(xiàn)不同的免疫組化檢測(cè)中，以p63 和CK5/6 的陽(yáng)性率較高，而FISH 分子檢測(cè)后有13 例表現(xiàn)為陽(yáng)性，說明免疫組化和FISH 分子檢測(cè)均可以有效篩查鼻咽部透明細(xì)胞癌。徐霞等［16］通過對(duì)兩例鼻咽部透明細(xì)胞癌患者病例與分子遺傳學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)兩例患者均表現(xiàn)為p63 和CK5/6 陽(yáng)性，而GFAP 結(jié)果為陰性，同時(shí)表現(xiàn)為EWSR1 基因重排，與本文的研究結(jié)果相似。但由于該研究?jī)H選取了兩例患者作為研究對(duì)象，因此未能對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比分析。為了進(jìn)一步分析免疫組化和分子檢測(cè)在鼻咽部透明細(xì)胞癌中的診斷價(jià)值，本次研究采用聯(lián)合檢測(cè)的方式分析了二者的聯(lián)合檢測(cè)效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)聯(lián)合檢測(cè)的檢出率為100%，說明相較于單獨(dú)免疫化學(xué)檢測(cè)，單獨(dú)分子檢測(cè)的檢出率相對(duì)較高，而通過免疫組化和分子檢測(cè)的聯(lián)合診斷，可以進(jìn)一步提高臨床診斷效果。

綜上所述，免疫組化和分子檢測(cè)均可以應(yīng)用于鼻咽部透明細(xì)胞癌的臨床診斷中，但分子檢測(cè)的檢出率明顯高于單獨(dú)免疫組化檢測(cè)，臨床中可以通過免疫組化聯(lián)合分子檢測(cè)的方式對(duì)鼻咽部透明細(xì)胞癌進(jìn)行診斷。