李玥琦，張國(guó)林，邢以文，顧曉風(fēng)

(蘇州市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究中心，蘇州 215104)

注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉由頭孢哌酮鈉和舒巴坦鈉原料藥直接混合制得，廣泛應(yīng)用于治療由敏感菌引起的多種感染性疾病?！吨袊?guó)藥典》2015年版二部[1]僅對(duì)頭孢哌酮鈉原料藥進(jìn)行了殘留溶劑控制，對(duì)舒巴坦鈉原料藥和兩者混合而得的制劑均無(wú)殘留溶劑要求，其他現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[2-5]也均未控制該制劑中的殘留溶劑。一方面，舒巴坦鈉的成鹽或溶析結(jié)晶過(guò)程中可能使用乙醇[6-7]、異丙醇[8-9]、乙酸乙酯[10-11]和正丁醇[10，12]等有機(jī)溶劑，由此引入的殘留溶劑種類和含量均未見(jiàn)明確報(bào)道[13-14]。另一方面，《中國(guó)藥典》2015年版規(guī)定頭孢哌酮鈉中丙酮?dú)埩袅坎坏贸^(guò)2.0%，據(jù)此限度推算，頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉制劑中可能存在接近1.0%的丙酮?dú)埩?，超過(guò)《中國(guó)藥典》2015年版四部項(xiàng)下通則[15]和國(guó)際人用藥品注冊(cè)技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)(ICH)中0.5%的限度，可能存在安全風(fēng)險(xiǎn)。

本研究以戴壽灃等[16]建立的頂空進(jìn)樣氣相色譜內(nèi)標(biāo)法為基礎(chǔ)，參考《中國(guó)藥典》2015年版四部殘留溶劑測(cè)定法[15]，使用N，N-二甲基甲酰胺(DMF)為溶劑改善待測(cè)物的溶解性，以2-丁酮為內(nèi)標(biāo)物建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于測(cè)定不同生產(chǎn)企業(yè)的注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉(1∶1)中的14種殘留溶劑，并與既往結(jié)果進(jìn)行比較。

1 儀器和試藥

1.1儀器 7890B型氣相色譜儀，7697A型頂空進(jìn)樣器和OpenLab CDS 2.2型色譜數(shù)據(jù)系統(tǒng)，均購(gòu)自安捷倫科技有限公司；氫氣發(fā)生器，空氣泵，均購(gòu)自蘇州市萊頓科學(xué)儀器有限公司；XPE205型電子天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.2試劑N，N-二甲基甲酰胺(DMF，氣相色譜級(jí)，體積分?jǐn)?shù)為99.99%)，德國(guó)默克集團(tuán)；2-丁酮、丙酮、乙醇、異丙醇、正丙醇、正丁醇、甲基異丁基酮、二氯甲烷和乙醚(分析純，體積分?jǐn)?shù)均大于99.0%)，均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；甲醇和乙腈(色譜純，體積分?jǐn)?shù)為99.99%)，購(gòu)自霍尼韋爾國(guó)際公司；乙酸乙酯、環(huán)己烷、四氫呋喃、正己烷(色譜純，體積分?jǐn)?shù)大于99.9%)，均購(gòu)自賽默飛世爾科技有限公司。

1.3樣品 注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉為2020年國(guó)家藥品抽檢品種，涉及6個(gè)規(guī)格，來(lái)自編號(hào)為M01～M43的43家生產(chǎn)企業(yè)。除去處方比例為2∶1的樣品，并剔除同一生產(chǎn)企業(yè)、相同生產(chǎn)批號(hào)的重復(fù)樣品后，累計(jì)處方比例為1∶1的數(shù)量共183批，樣品編號(hào)為YP0001～YP0344的非連續(xù)編號(hào)。回收率考察使用編號(hào)為YP0328的樣品，生產(chǎn)企業(yè)編號(hào)為M39，生產(chǎn)批號(hào)為02200301。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 使用Agilent DB-624(30 m×0.53 mm，3.0 μm)毛細(xì)管氣相色譜柱；載氣為氮?dú)?體積分?jǐn)?shù)為99.999%)；流速為3.0 mL·min-1。程序升溫：起始溫度為35 ℃，維持5 min后以1 ℃·min-1升至40 ℃，維持2 min，以10 ℃·min-1升至60 ℃，維持5 min，以60 ℃·min-1升至180 ℃，維持4 min。頂空平衡溫度為70 ℃，平衡時(shí)間為30 min，進(jìn)樣時(shí)間為1 min，進(jìn)樣口溫度為230 ℃，分流比為20∶1，火焰離子化檢測(cè)器溫度為250 ℃。

2.2溶液的配制

2.2.1系列混合對(duì)照品溶液 精密量取2-丁酮1 mL，置于500 mL量瓶中，用DMF溶解并稀釋至刻度，搖勻制成內(nèi)標(biāo)溶液。分別精密稱取丙酮、乙醇、異丙醇、正丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、甲基異丁基酮、甲醇、環(huán)己烷、四氫呋喃、二氯甲烷、乙腈、正己烷和乙醚251.33、126.98、64.53、64.08、66.55、56.30、62.75、38.43、54.89、41.60、44.98、33.50、39.55、66.33 mg，置于預(yù)裝有內(nèi)標(biāo)溶液的100 mL量瓶中，稀釋至刻度，作為混合對(duì)照品溶液1，再用內(nèi)標(biāo)溶液分別稀釋1.25、2.5、5、25、100倍，作為混合對(duì)照品溶液2～6。

2.2.2供試品溶液 精密稱取1.0 g頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉，置于20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，精密加入2.2.1項(xiàng)下制備的內(nèi)標(biāo)溶液5 mL，超聲使溶解，密封，即得。

2.3系統(tǒng)適用性和重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取2.2.1項(xiàng)下制備的內(nèi)標(biāo)溶液、混合對(duì)照品溶液2和1.2項(xiàng)下16種試劑分別進(jìn)樣。混合對(duì)照品溶液中各待測(cè)物的理論塔板數(shù)峰面積值均不低于5 000，內(nèi)標(biāo)物2-丁酮和溶劑DMF對(duì)14種待測(cè)物質(zhì)均無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。由圖1可知，相鄰色譜峰之間達(dá)到基線分離，分離度均大于1.5。取混合對(duì)照品溶液2，連續(xù)進(jìn)樣6次，各待測(cè)物峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比(f)的RSD值在0.47%～3.41%范圍內(nèi)。

圖1 GC圖

2.4線性范圍和定量限 取2.2.1項(xiàng)下制備的系列混合對(duì)照品溶液，按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。取混合對(duì)照品溶液6，用內(nèi)標(biāo)溶液分別稀釋2～50倍，計(jì)算信噪比。以待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比為縱坐標(biāo)(y)、待測(cè)物質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x)進(jìn)行線性回歸，見(jiàn)表1。

表1 線性回歸方程

2.5回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取12份樣品(使用編號(hào)YP0328)，每份1.0 g；其中3份加5 mL內(nèi)標(biāo)溶液作為本底；3份加入5 mL混合對(duì)照品溶液2作為高濃度回收率樣品；3份加入5 mL混合對(duì)照品溶液3作為中濃度回收率樣品；3份加入5 mL混合對(duì)照品溶液4作為低濃度回收率樣品。計(jì)算得平均回收率在82.58%～105.46%范圍內(nèi)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 (n=9)

2.6樣品測(cè)定結(jié)果 183批次樣品均檢出有丙酮?dú)埩?，?0.2%的樣品丙酮?dú)埩袅吭?.5%以上，平均殘留量為0.67%±0.01%(95%置信區(qū)間：0.65%～0.69%)。上述殘留量與戴壽灃等[16]發(fā)表結(jié)果一致，但生產(chǎn)企業(yè)之間的差異明顯縮小，本次實(shí)驗(yàn)未見(jiàn)丙酮含量在0.9%以上或0.2%以下的樣品。除生產(chǎn)企業(yè)M16以外，所有樣品均檢出了乙醇，殘留量在0.03%～0.25%之間，均在0.5%的限度內(nèi)；近半數(shù)樣品中檢出有異丙醇，平均殘留量接近0.1%；多數(shù)樣品中檢出有正己烷，但平均殘留量<0.001%；少數(shù)樣品中檢出了二氯甲烷、乙酸乙酯、環(huán)己烷和正丁醇，殘留量接近檢出限；所有樣品中均未檢出甲醇、乙醚、乙腈、正丙醇、四氫呋喃和甲基異丁基酮。對(duì)檢出的殘留量進(jìn)行加和，計(jì)為總殘留量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品測(cè)定結(jié)果

3 分析與討論

3.1殘留溶劑種類分析 本次納入殘留溶劑檢查的183批樣品中，丙酮、乙醇、正己烷和異丙醇的檢出率分別為100.0%、95.6%、67.2%、44.8%；少量樣品(<5%)檢出二氯甲烷、乙酸乙酯、環(huán)己烷和正丁醇；另有40批(21.9%)樣品在保留時(shí)間15.8 min檢出未知物質(zhì)(圖1 C)，有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)分析和確證。

多數(shù)企業(yè)檢出的殘留溶劑種類為2～4種，檢出種類及含量較為一致，僅有3批樣品檢出了6種及以上的溶劑殘留。回溯生產(chǎn)工藝，70%以上的生產(chǎn)企業(yè)直接購(gòu)買混粉原料藥后進(jìn)行無(wú)菌分裝，且原料藥來(lái)源于3家混粉生產(chǎn)企業(yè)。生產(chǎn)企業(yè)M15、M16和M22檢出殘留溶劑的種類和總量均偏低，且不同批次產(chǎn)品之間一致性較好，均是自行混合2種原料藥后分裝的工藝，可能與原料藥生產(chǎn)企業(yè)特有的生產(chǎn)工藝有關(guān)[17]。

3.2溶劑的選擇 頭孢哌酮鈉和舒巴坦鈉均易溶于水，既往研究[16，18]在溶解供試品時(shí)通常選擇水為溶劑。本研究在進(jìn)行方法驗(yàn)證時(shí)，發(fā)現(xiàn)以水、二甲基亞砜或水-二甲基亞砜(50∶50)作為溶劑時(shí)，正己烷和環(huán)己烷均不能在標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液中均勻分布，峰面積比與濃度的線性回歸相關(guān)系數(shù)r<0.999 7。使用DMF作為溶劑時(shí)，雖然1.0 g的樣品不能完全溶解于5 mL溶劑，但可以溶解所有待測(cè)物和內(nèi)標(biāo)，14種待測(cè)物回歸曲線的相關(guān)系數(shù)均>0.999 0，回收率良好，且所測(cè)得的殘留溶劑種類及含量與文獻(xiàn)[16]結(jié)果相近。

3.3限度合理性 抗感染藥物尤其是注射劑的不良反應(yīng)發(fā)生率高，頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉引起的嚴(yán)重不良反應(yīng)事件報(bào)告數(shù)量在2015～2017年高居抗感染藥物的前3位，不能排除該現(xiàn)象與其普遍高于0.8%的殘留溶劑總量之間的關(guān)系。

由于注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉的生產(chǎn)工藝不涉及其他輔料，制劑中的殘留溶劑主要來(lái)源于原料藥[18]。在頭孢哌酮鈉的生產(chǎn)工藝中，丙酮是關(guān)鍵溶劑且無(wú)法完全去除[19-20]，《中國(guó)藥典》規(guī)定頭孢哌酮鈉原料藥中丙酮?dú)埩袅坎坏贸^(guò)2.0%。本研究測(cè)得丙酮?dú)埩袅康淖畲笾禐?.84%，依據(jù)注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉的說(shuō)明書，其最大推薦劑量為每日8.0 g，因此ICH Q3C殘留溶劑指導(dǎo)原則推薦的限度相當(dāng)于含丙酮?dú)埩袅坎坏贸^(guò)0.625%。而本研究結(jié)果顯示，大多數(shù)生產(chǎn)企業(yè)的制劑中丙酮?dú)埩袅烤@著超過(guò)該限度，存在安全風(fēng)險(xiǎn)。在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中，有部分企業(yè)通過(guò)改進(jìn)原料藥成鹽過(guò)程或混粉工藝[17]，將丙酮?dú)埩袅靠刂圃?.5%以內(nèi)。綜上所述，有必要對(duì)注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉制劑的殘留溶劑進(jìn)行檢查，并考慮納入質(zhì)量控制。