張尚師，謝曉玲，鄭 滔，鄧南翔 ，舒 兵*

(1.廣東藥科大學(xué) 新藥研究中心，廣東 廣州 510006 ； 2.廣東藥科大學(xué) 藥學(xué)院，廣東 廣州 510006)

奧貝膽酸(Obeticholic Acid，Ocaliva)，分子式為C26H44O4，化學(xué)名為3α，7α-二羥基-6α-乙基-5β-膽烷-24-酸，由Intercept制藥公司研發(fā)的，用于治療原發(fā)性膽汁性膽管炎和膽酸所致的肝膽疾病等，具有較高的安全性[1-3]。但是，在合成奧貝膽酸的最后一個(gè)步驟，還原產(chǎn)生的羥基需要經(jīng)歷構(gòu)型翻轉(zhuǎn)后才能轉(zhuǎn)變成奧貝膽酸，具體為硼氫化鈉還原7位羰基為7β-羥基，后在較高溫度下轉(zhuǎn)變?yōu)?α-羥基[4]。由于工業(yè)化生產(chǎn)過(guò)程中，反應(yīng)體系量大，加熱溫度難以均一控制，導(dǎo)致羰基還原成羥基后難以徹底異構(gòu)化，從而可能引入奧貝膽酸的關(guān)鍵異構(gòu)體雜質(zhì)OCA-β，嚴(yán)重影響奧貝膽酸的純度[5-7]。為了控制奧貝膽酸原料藥中的質(zhì)量，必須對(duì)其中的異構(gòu)體雜質(zhì)進(jìn)行研究，建立奧貝膽酸的質(zhì)量分析標(biāo)準(zhǔn)。

因此，制備高純度的異構(gòu)體雜質(zhì)，并建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)具有重要意義。

圖1 奧貝膽酸(OCA)和異構(gòu)體雜質(zhì)(OCA-β)的結(jié)構(gòu)

本研究前期參考文獻(xiàn)，以(Z)-3α-羥基-6-亞乙基-7-氧代-5β-膽烷-24-酸(1)為起始物料，在氫氣鈀碳體系中還原，然后在正丁醇(n-BuOH)溶液中與金屬鈉室溫反應(yīng)過(guò)夜，兩步反應(yīng)得到奧貝膽酸異構(gòu)體雜質(zhì)3α,7β-二羥基-6α-乙基-5β-膽烷-24-酸(OCA-β)，合成的OCA-β>經(jīng)1H NMR、13C NMR和HRMS確證其結(jié)構(gòu)[8-9]。本研究能夠合成出純度較高的奧貝膽酸異構(gòu)體雜質(zhì)OCA-β，能夠用于奧貝膽酸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立和質(zhì)量分析研究，具體合成路線如圖2所示。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

實(shí)驗(yàn)儀器：DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器，河南鞏義予華有限公司；ME104分析天平，上海泰坦科技股份有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海艾朗儀器有限公司；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵，鞏義市科瑞儀器有限公司；Advance Bruker 400M超導(dǎo)核磁共振波譜儀，瑞士BRUKER公司；Thermo超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，賽默飛世爾科技公司。

實(shí)驗(yàn)試劑：(Z)-3α-羥基-6-亞乙基-7-氧代-5β-膽烷-24-酸、鈀碳、金屬鈉，分析純，上海泰坦科技股份有限公司；其余所有試劑如氫氧化鈉、正丁醇、乙酸乙酯等，均為市售分析純或化學(xué)純。

2 合成

2.1 3α-羥基-6α-乙基-7-氧代-5β-膽烷-24-酸(2)的合成

稱取(Z)-3α-羥基-6-亞乙基-7-氧代-5β-膽烷-24-酸1(5.0 g，12.01 mmol)于氫化反應(yīng)釜中，加75 mL 10%氫氧化鈉水溶液，攪拌10 min后，加入0.5 g 5%濕Pd/C攪拌5 min，反應(yīng)體系置于氫氣反應(yīng)釜中(0.1 MPa)，將體系緩慢升溫60 ℃，攪拌10 h。反應(yīng)完畢后，濾去鈀碳，濾液轉(zhuǎn)入反應(yīng)瓶中，在120 ℃油浴中加熱5 h。反應(yīng)畢，放冷至室溫，倒入含有50 mL乙酸乙酯和50 mL稀鹽酸組成的混合溶液中，攪拌10 min后分液，水層用20 mL乙酸乙酯萃取2次，合并有機(jī)層，加飽和食鹽水洗1次，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干。所得粗品用乙酸乙酯重結(jié)晶，得到中間體2，白色固體，3.8 g，產(chǎn)率76%。1H NMR (400 MHz,DMSO)δ12.06(s,1H),4.67～4.48(m,1H),3.52～3.42(m,1H),2.92～2.81(m,1H),2.59～2.47(m,1H),2.42～2.28(m,1H),2.28～2.09(m,2H),2.08～1.99(m,1H),1.99～1.73(m,5H),1.73～1.55(m,3H),1.55～1.40(m,4H),1.39～1.25(m,5H),1.25～1.07(m,5H),1.07～0.93(m,4H),0.92～0.81(m,3H),0.79～0.67(m,4H)。

2.2 奧貝膽酸異構(gòu)體雜質(zhì)(OCA-β)的合成

精確稱取2(2.0 g，4.78 mmol)于100 mL反應(yīng)瓶中，加入30 mL無(wú)水正丁醇，N2換氣3次后置于冰浴下攪拌10 min，分批加入金屬小鈉塊(1.10 g,47.81 mmol)。加畢，室溫下攪拌2 h后緩慢升溫至80 ℃，反應(yīng)過(guò)夜。放冷至室溫，將反應(yīng)液緩慢倒入含有100 mL冰中；攪拌10 min后，加入80 mL乙酸乙酯，攪拌下滴加稀鹽酸溶液調(diào)pH值=5～6，分液；水層加30 mL乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯層，加飽和食鹽水洗1次；無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干，硅膠柱分離[DCM∶MeOH=(100∶1)～(40∶1)，含1% HAc]，得到奧貝膽酸異構(gòu)體雜質(zhì)(OCA-β)，白色固體，1.22 g，產(chǎn)率61%，mp.219.1～221.8 ℃；1H NMR (400 MHz,MeOD)δ3.49～3.36(m,1H),3.12～3.01(m,1H),2.37～2.24(m,1H),2.23～2.11(m,1H),2.07～1.95(m,1H),1.94～1.70(m,5H),1.74～1.35(m,8H),1.36～0.98(m,10H),0.97～0.88(m,6H),0.83(t,J=7.4 Hz,3H),0.69(s,4H)。13C NMR(101 MHz,MeOD)δ176.74、74.82、71.02、56.40、55.22、43.73、43.63、43.23、43.19、40.27、39.72、35.32、35.07、34.16、30.97、30.62、29.74、29.43、28.25、26.52、22.64、21.20、20.61、17.54、11.36、10.16。ESI-MS(m/z) 418.9[M-H]+，與參考文獻(xiàn)一致[5]。

3 結(jié)論

本研究以?shī)W貝膽酸的結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)，對(duì)(Z)-3α-羥基-6-亞乙基-7-氧代-5β-膽烷-24-酸的烯烴部分和酮羰基分別進(jìn)行還原，得到了異構(gòu)體雜質(zhì)OCA-β，兩步產(chǎn)率為46%。本方法操作簡(jiǎn)單，反應(yīng)條件溫和，產(chǎn)率高?？芍苯佑糜诮W貝膽酸原料藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)雜質(zhì)分析。