陸碧云 李亞軍 龔 玲 劉代順 （遵義醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院，遵義市第一人民醫(yī)院，遵義563002）

癌癥是世界范圍內(nèi)的主要公共衛(wèi)生問題，在諸多國(guó)家中，位于人類死亡原因的首位，并且其發(fā)病率和死亡率仍逐年上升［1］。長(zhǎng)期以來癌癥的早期診斷、治療以及評(píng)估預(yù)后均是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域急需解決的難題。盡管近10年來在腫瘤的診療方面已取得顯著進(jìn)展，多種成熟的個(gè)體化癌癥治療手段已應(yīng)用于臨床，如：手術(shù)、放療、化療、靶向治療、激素治療、免疫治療及多學(xué)科聯(lián)合治療，已使許多癌癥患者的生存和預(yù)后得到了改善。但大多數(shù)癌癥患者的生存質(zhì)量不高，5年生存率不理想。這主要是由于他們無法得到早期診斷和治療［2］。因此，尋找與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)志物具有重要的臨床意義。

長(zhǎng)鏈非編碼RNA（LncRNA）是一類長(zhǎng)度超過200個(gè)核苷酸序列的非編碼RNA，缺乏蛋白質(zhì)編碼能力［3］?，F(xiàn)有研究已證實(shí)LncRNA在多種分子調(diào)控中發(fā)揮重要作用，如表觀遺傳調(diào)控、選擇性剪接、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控以及修飾等［4-5］；此外，LncRNA還參與細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化、凋亡、細(xì)胞周期進(jìn)展等多種生物學(xué)過程，在人類各種疾病的生理、病理過程中發(fā)揮不可或缺的作用［6］。越來越多的研究表明LncRNA在腫瘤組織中異常表達(dá)，可同時(shí)作為致癌基因與抑癌因子，并可通過調(diào)控癌細(xì)胞的增殖、分化、侵襲、遷移和凋亡影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展［7］。

LncRNA SBF2-AS1位于11p15.1位點(diǎn)，是具有2 708個(gè)核苷酸的反義RNA［8］。最近越來越多的研究表明SBF2-AS1在多種癌癥中異常表達(dá)，SBF2-AS1高表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、分化和浸潤(rùn)。研究證實(shí)它與多種癌癥患者的臨床病理特征和預(yù)后密切相關(guān)，如非小細(xì)胞肺癌、宮頸癌、胰腺癌、結(jié)腸癌和肝細(xì)胞癌等［8-12］。但是由于目前已有研究結(jié)果的不一致性和單個(gè)研究樣本的不足，本研究首次整合現(xiàn)有關(guān)于SBF2-AS1的研究結(jié)果進(jìn)行Meta分析，以進(jìn)一步驗(yàn)證其在腫瘤中的潛在預(yù)后價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 文獻(xiàn)檢索 采用PubMed，Web of Science，Co‐chrane Library、Embase、中國(guó)知網(wǎng)以及萬方等數(shù)據(jù)庫檢索2020年3月前發(fā)表的相關(guān)研究，檢索策略為主題詞和自由詞相結(jié)合，中文檢索詞包括長(zhǎng)鏈非編碼RNA、SBF2-AS1、SBF2反義RNA、癌癥、預(yù)后和臨床病理特征，外文數(shù)據(jù)庫檢索式為SBF2-AS1，SBF2 antisense RNA 1，cancer，survival，prognosis，clinico‐pathological features。中文數(shù)據(jù)庫檢索式為（長(zhǎng)鏈非編碼RNA SBF2-AS1）OR（LncRNA SBF2-AS1）OR（SBF2反義RNA）AND（腫瘤OR癌癥AND預(yù)后OR臨床病理特征）。

1.2 文獻(xiàn)納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①腫瘤組織樣本取自癌癥患者，并采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測(cè)組織中SBF2-AS1表達(dá)水平；②癌癥患者分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，分類標(biāo)準(zhǔn)為腫瘤組織中SBF2-AS1表達(dá)情況；③評(píng)估SBF2-AS1不同表達(dá)水平與癌癥患者預(yù)后或臨床病理特征的相關(guān)性；④提供可靠數(shù)據(jù)，用于提取或計(jì)算危險(xiǎn)比（HR）、比值比（OR）及95%CI；⑤以英文或中文形式出版。排除標(biāo)準(zhǔn)：①重復(fù)文章、病例報(bào)告、評(píng)論文章、信件、會(huì)議報(bào)告和動(dòng)物研究；②缺乏完整數(shù)據(jù)計(jì)算HR、OR、95%CI和P值；③僅涉及細(xì)胞水平研究；④未將患者分為高、低表達(dá)組。

1.3 數(shù)據(jù)的提取和文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià) 2名研究者嚴(yán)格按照納入和排除標(biāo)準(zhǔn)篩選相關(guān)文獻(xiàn)，評(píng)估和提取符合條件的文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，遇到分歧通過與第三位研究者協(xié)商最終達(dá)成一致。每篇文獻(xiàn)中需提取以下信息：第一作者、出版年份、腫瘤類型、截止（cutoff）值、SBF2-AS1檢測(cè)方法、病例總數(shù)、患者的年齡和性別、SBF2-AS1不同表達(dá)組中的患者總數(shù)、在不同表達(dá)組中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤大小和腫瘤分化的病例數(shù)，以及HR值和95%CI。若研究同時(shí)包含單因素和多因素分析，采用多因素分析結(jié)果。若僅提供了生存曲線，則采用軟件Engauge Digitizer 10.4提取生存數(shù)據(jù)。采用紐卡斯?fàn)?渥太華量表（Newcastle-Ottawa quality as‐sessment Scale，NOS）評(píng)估研究質(zhì)量。評(píng)分項(xiàng)目分為3個(gè)主要類別：選擇、結(jié)果評(píng)估和可比性。NOS評(píng)分總分為9分，分?jǐn)?shù)≥7則認(rèn)為研究質(zhì)量高。2名研究者分別打分，遇到分歧通過與第三位研究者協(xié)商解決。

1.4 GEPIA在線分析 GEPIA為癌癥和正?；虮磉_(dá)譜的公共數(shù)據(jù)庫，可用于分析TCGA的基因表達(dá)數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)庫采用單因素方差分析進(jìn)行目標(biāo)基因差異表達(dá)分析。生存分析采用Kaplan-Meier法和Logrank檢驗(yàn)；HR和95%CI在Kaplan-Meier曲線中展現(xiàn)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用stata12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。利用合并的HR或OR以及95%CI值評(píng)估SBF2-AS1與癌癥患者預(yù)后和臨床病理特征的關(guān)系。采用Q和I2進(jìn)行異質(zhì)性檢驗(yàn)，如不存在異質(zhì)性（I2＜50%，P＞0.05）采用固定效應(yīng)模型，反之則采用隨機(jī)效應(yīng)模型。如各研究存在異質(zhì)性，則采用亞組分析和敏感性分析探討異質(zhì)性來源，采用Begg法檢測(cè)潛在發(fā)表偏倚。

2 結(jié)果

2.1 納入研究的特征 嚴(yán)格按照納入和排除標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選后，共納入12篇文獻(xiàn)，篩選流程見圖1，12個(gè)研究均來自中國(guó)，共包含1 125例患者，樣本量為20～180，均在2016年至2020年出版，其中2篇以中文發(fā)表，10篇以英文發(fā)表。共涉及9種癌癥：胰腺癌2篇［10-13］、小細(xì)胞肺癌1篇［14］、結(jié)直腸癌1篇［11］、肝細(xì)胞癌2篇［12-15］、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤1篇［16］、非小細(xì)胞肺癌2篇［8-17］、宮頸癌1篇［9］、乳腺癌1篇［18］、胃癌1篇［19］。研究均采用qRT-PCR檢測(cè)SBF2-AS1表達(dá)，根據(jù)SBF2-AS1表達(dá)差異分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。研究質(zhì)量較高，其中5篇為7分，6篇為8分，1篇為9分。所有符合條件的文章特征見表1。

圖1 研究選擇和鑒別的流程圖Fig.1 Flow diagram of study selection and identification

2.2 SBF2-AS1表達(dá)與總生存期的關(guān)系 納入文獻(xiàn)中共有9篇包含945例患者探討不同癌癥患者SBF2-AS1表達(dá)水平與OS的關(guān)系。因研究間不存在明顯異質(zhì)性，故采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行分析（I2=0.0%，P=0.581），結(jié)果顯示，SBF2-AS1高表達(dá)組患者總生存期較短（HR=1.84，95%CI：1.31～2.36，P≤0.001，圖2A）。此外，本研究根據(jù)腫瘤類型、HR評(píng)估方法和樣本大小進(jìn)行亞組分析，結(jié)果表明以上3組中，SBF2-AS1高表達(dá)均會(huì)導(dǎo)致患者總生存期縮短（圖2B～D）。敏感性分析驗(yàn)證了結(jié)果的穩(wěn)健性（圖3A）；Begg法表明在OS相關(guān)文獻(xiàn)中不存在明顯發(fā)表偏倚（圖3B）。表明高表達(dá)SBF2-AS1有望成為預(yù)測(cè)患者總生存期的標(biāo)志物。

2.3 SBF2-AS1的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 采用OR及95%CI評(píng)估SBF2-AS1表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系如圖4、表2所示，SBF2-AS1高表達(dá)患者TNM分期傾向于向II/IIV期（HTS）發(fā)展（I2=0.0%，P=0.909；OR=3.15，95%CI：2.34～4.22，P≤0.001，4A），更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（LNM）（I2=59.8%，P=0.015；OR=2.61，95%CI：1.61～4.24，P≤0.001，圖4B），腫瘤直徑（LTS）更大（I2=67.4%，P=0.005；OR=1.98，95%CI：1.16～3.38，P=0.012，圖4C），但SBF2-AS1高表達(dá)與癌癥患者腫瘤低分化級(jí)別（PHG）（I2=80.6%，P≤0.001；OR=1.30，95%CI：0.65～2.59，P=0.458，圖4D）、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（DM）、年齡和性別無明顯相關(guān)性。

圖2 SBF2-AS1表達(dá)與總生存期的關(guān)系森林圖Fig.2 Forest plot for SBF2-AS1 expression and overall survival

表1 納入研究的主要特征Tab.1 Main characteristics of included studies

圖3 總生存期相關(guān)文獻(xiàn)的敏感性分析和Begg檢測(cè)Fig.3 Sensitivity analysis and Begg′s test of included studies related to overall survival

圖4 SBF2-AS1表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系的森林圖Fig.4 Forest plot of SBF2-AS1 expression and clinico?pathological features

2.4 GEPIA分析驗(yàn)證結(jié)果 為進(jìn)一步驗(yàn)證以上結(jié)果的可靠性，采用GEPIA研究SBF2-AS1在各種腫瘤中的作用。SBF2-AS1在膽管癌（CHOL）、彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBC）、腎嫌色細(xì)胞癌（KICH）和胸腺瘤（THYM）等腫瘤中異常表達(dá)（圖5A）。小提琴圖表明SBF2-AS1表達(dá)在多種腫瘤中與臨床分期密切相關(guān)［F=3.01，P（r＞F）=0.010 2，圖5B］。9 481例患者分為高、低表達(dá)組前提下，GEPIA分析將SBF2-AS1在各種腫瘤中的表達(dá)情況與其生存數(shù)據(jù)進(jìn)行合并，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SBF2-AS1高表達(dá)與較差的總生存期確實(shí)密切相關(guān)（HR=1.3，Log-rankP＜0.01，圖5C）。SBF2-AS1有望成為預(yù)測(cè)多種癌癥預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物。

圖5 GEPIA分析驗(yàn)證SBF2-AS1表達(dá)與癌癥患者預(yù)后的關(guān)系Fig.5 Verification of relation between SBF2-AS1 and prognosis of cancer patients via analysis of GEPIA

表2 納入研究的患者的主要臨床病理特征Tab.2 Clinicopathological features of included studies

3 討論

癌癥對(duì)人類健康造成嚴(yán)重威脅，至今仍無法治愈，因此，研究者致力于尋找新的腫瘤標(biāo)記物和治療靶點(diǎn)以改善腫瘤患者的早期診斷、治療和遠(yuǎn)期預(yù)后。目前研究認(rèn)為，LncRNA不僅在細(xì)胞生物學(xué)各方面具有重要作用，其異常表達(dá)與癌癥發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，因此被認(rèn)為是最有潛力的生物學(xué)標(biāo)志物之一［20］。最近Meta分析表明，多種LncRNA均可作為癌癥患者的預(yù)后標(biāo)志物，進(jìn)一步證實(shí)LncRNA在腫瘤患者預(yù)后預(yù)測(cè)中的潛力［21-23］。

LV等［24］發(fā)現(xiàn)SBF2-AS1在非小細(xì)胞肺癌中高表達(dá)，并與癌癥患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM II/IIV期相關(guān)，而沉默SBF2-AS1表達(dá)可抑制癌癥細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲。ZHAO等［8］發(fā)現(xiàn)SBF2-AS1在非小細(xì)胞肺癌中高表達(dá)，并與患者總生存期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理分級(jí)相關(guān)。膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中，SBF2-AS1高表達(dá)，敲低SBF2-AS1表達(dá)可抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤血管生成和細(xì)胞增殖［25］。SBF2-AS1在多種癌癥中表達(dá)上調(diào)，與患者總生存期和臨床病理特征密切相關(guān)，并參與癌癥細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和侵襲等生物學(xué)過程［9-10，14］。

但由于單個(gè)研究樣本量較小，且研究結(jié)果存在差異，為進(jìn)一步驗(yàn)證SBF2-AS1作為腫瘤預(yù)后標(biāo)記物的潛力，課題組進(jìn)行了Meta分析，共納入12篇文獻(xiàn)，1 125例腫瘤患者，包含9種癌癥。結(jié)果表明，與低表達(dá)組相比，SBF2-AS1高表達(dá)組癌癥患者生存率明顯降低。根據(jù)癌癥類型、樣本量和HR提取方法進(jìn)行亞組分析結(jié)果表明，在以上亞組中SBF2-AS1高表達(dá)與較差的總生存期密切相關(guān)。此外，SBF2-AS1表達(dá)與腫瘤TNM II/IIV期分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、更大的腫瘤直徑密切相關(guān)，但與癌癥患者年齡、性別、腫瘤分化級(jí)別和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)。表明SBF2-AS1有望成為新的癌癥預(yù)后標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。

目前研究致力于探索SBF2-AS1調(diào)控癌癥發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)，SBF2-AS1通過miR-188-5p/ZFP91途徑，作為致癌基因促進(jìn)急性髓系白血病細(xì)胞生長(zhǎng)［26］。CHEN等［27］發(fā)現(xiàn)SBF2-AS1可通過吸附miR-338-3p和miR-362-3p提高E2F1表達(dá)，促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)。肝細(xì)胞癌中，SBF2-AS1可通過提高TGFBR表達(dá)調(diào)控miR-140e5p表達(dá)，促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展［15］。另有研究發(fā)現(xiàn)，SBF2-AS1可通過提高HDAC3表達(dá)調(diào)控miR-619-5p進(jìn)而促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)［11］。GAO等［9］發(fā)現(xiàn)SBF2-AS1高表達(dá)可通過海綿式吸附miR-361-5p調(diào)節(jié)FOXM1表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控宮頸癌細(xì)胞增殖。HUA等［10］報(bào)道在胰腺癌中高表達(dá)的SBF2-AS1可通過調(diào)控miR-142-3p/TWF1途徑影響胰腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、細(xì)胞增殖遷移和侵襲等過程，進(jìn)而影響胰腺癌發(fā)生發(fā)展。此外，LIANG等［19］發(fā)現(xiàn)，在胃癌中，SBF2-AS1與miR-302b-3p的相互作用可通過調(diào)控E2F3表達(dá)影響胃癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲等過程。綜上所述，SBF2-AS1在癌癥中的調(diào)控機(jī)制主要表現(xiàn)為：通過對(duì)各種miRNA吸附進(jìn)而調(diào)控下游靶基因或蛋白，影響癌癥細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、侵襲和凋亡等生物學(xué)過程，從而促進(jìn)癌癥發(fā)生發(fā)展，為未來研究SBF2-AS1調(diào)控癌癥的機(jī)制提供了重要線索。

本研究局限性主要表現(xiàn)為：①納入研究的患者均來自中國(guó)，可能導(dǎo)致本研究結(jié)果僅適用于中國(guó)人或亞洲人；②樣本量相對(duì)較小，可能導(dǎo)致研究結(jié)果缺少可信度；③部分研究未直接提供HR和95%CI，而是從生存曲線中提取，相比直接提取的數(shù)據(jù)可能會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，本研究結(jié)果可能夸大SBF2-AS1在各種腫瘤中的預(yù)后價(jià)值。

綜上所述，SBF2-AS1高表達(dá)可能導(dǎo)致癌癥患者總生存期縮短，并與癌癥患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM的II/IIV期分期及更大的腫瘤直徑相關(guān)。因此，SBF2-AS1有望成為多種癌癥的預(yù)后標(biāo)志物，今后將通過更大的樣本量、更廣泛的人群來源和標(biāo)準(zhǔn)化的臨床試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證SBF2-AS1在各種腫瘤中的預(yù)后價(jià)值。