婁煥堃 趙 玲 王怡練 孫黎明

1.蚌埠醫(yī)學(xué)院附屬連云港市第二人民醫(yī)院心血管內(nèi)科，江蘇連云港 222006；2.蚌埠醫(yī)學(xué)院附屬連云港市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇連云港 222006

心血管疾病（cardiovascular disease，CVD）死亡率居世界首位，高于腫瘤及其他疾病，占居民疾病死亡構(gòu)成的40%以上[1]。研究表明，腸道菌群的代謝物氧化三甲胺（TMAO）與許多心血管疾病的發(fā)生有關(guān)[2-3]。TMAO 水平升高與心血管不良結(jié)局風(fēng)險(xiǎn)的增加密切相關(guān)，包括心臟病發(fā)作和死亡[4-6]。此外，TMAO 水平升高會(huì)促進(jìn)血管炎癥和氧化應(yīng)激[7-8]，損害血管功能[9-10]，并誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化[11]。本研究通過檢測冠心?。–HD）患者循環(huán)中的TMAO 表達(dá)水平進(jìn)一步探討TMAO 與CHD 的相關(guān)性，為CHD 的防治提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年7 月—2020 年6 月于蚌埠醫(yī)學(xué)院附屬連云港市第二人民醫(yī)院（以下簡稱“我院”）心血管內(nèi)科住院的CHD 患者98 例為CHD 組，另選擇同期我院體檢健康志愿者104 名為對(duì)照組。CHD 組中慢性穩(wěn)定性勞力型心絞痛患者52 例、缺血性心肌病患者26 例、急性冠狀動(dòng)脈綜合征之后穩(wěn)定的病程階段患者20 例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《2018 年穩(wěn)定性冠心病診斷與治療指南》[12]，即指冠脈造影顯示1 支或1 支以上主要冠狀動(dòng)脈（指左冠狀動(dòng)脈主干，前降支，回旋支，右冠狀動(dòng)脈）狹窄程度達(dá)到Ⅲ級(jí)或以上（Ⅲ級(jí)：51%＜管腔面積縮小≤75%；Ⅳ級(jí)：75%＜管腔面積縮小≤100%），包括慢性穩(wěn)定性勞力型心絞痛、缺血性心肌病和急性冠狀動(dòng)脈綜合征之后穩(wěn)定的病程階段。排除標(biāo)準(zhǔn)：①年齡＜18 歲；②處于妊娠前或妊娠中；③具有嚴(yán)重感染、肝腎功能不全、腫瘤、結(jié)核等重大疾病；④近1 個(gè)月內(nèi)使用過益生菌、抗生素等影響腸道菌群活性的制劑；⑤沒有完整病例和血液標(biāo)本。

本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)編號(hào)：2020K003），所有入選者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 觀察指標(biāo) 收集兩組一般資料，包括性別、年齡、身高、體重指數(shù)（BMI）、飲酒史、吸煙史、血糖、是否合并高脂血癥、尿酸、是否合并高血壓病。

1.2.2 樣本采集與儲(chǔ)存 兩組留取血液標(biāo)本前均禁食6 h，在凌晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血4 mL，離心20 min（離心半徑：16 cm，離心速度：2000～3000 r/min）后將血清在-80℃條件下冷凍保存。

1.2.3 樣本檢測及TMAO 定量分析 采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（試劑盒由上海江萊生物科技有限公司提供，貨號(hào)：JL47698）。以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，光密度（OD）值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)即為樣品的實(shí)際濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 24.0 對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。多因素分析采用logistic 回歸模型，采用Spearman 相關(guān)系數(shù)分析相關(guān)性。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

兩組年齡、身高比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。CHD 組男性占比、BMI、吸煙占比、飲酒占比、血清TMAO、血糖、尿酸、合并高脂血癥、合并高血壓病占比均明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P ＜0.05）。見表1。

表1 兩組一般資料比較

2.2 CHD 影響因素的多因素logistic 回歸分析

以CHD 為因變量，賦值：有=1，無=2。以TMAO、BMI、血糖、高脂血癥、合并高血壓為自變量進(jìn)行l(wèi)ogistic 回歸分析（BMI、TMAO、血糖、尿酸為連續(xù)性變量，二分類變量賦值如下：男性=1，女性=2；吸煙=1，不吸煙=2；合并高脂血癥=1，無高脂血癥=2；合并高血壓病=1，無高血壓病=2），其中分析顯示高TMAO 水平、高BMI、高血糖水平、合并高脂血癥、吸煙史、合并高血壓病、高尿酸水平均是CHD 的危險(xiǎn)因素（OR ＞1，P ＜0.05）。見表2。

表2 CHD 影響因素的多因素logistic 回歸分析

2.3 TMAO 與CHD 嚴(yán)重程度的相關(guān)性分析

CHD 組中冠脈造影顯示1 支或1 支以上主要冠狀動(dòng)脈狹窄程度達(dá)到Ⅲ級(jí)有65 例，達(dá)到Ⅳ級(jí)的有33 例，其平均血清TMAO 水平分別為（17.75±5.42）、（24.11±5.75）mg/L。相關(guān)性分析結(jié)果顯示TMAO 與CHD 嚴(yán)重程度呈正相關(guān)（rs=0.443，P ＜0.05）。

3 討論

根據(jù)《中國衛(wèi)生和計(jì)劃生育統(tǒng)計(jì)年鑒（2017）》[13]，自2012 年以來中國城市和農(nóng)村居民CHD 死亡率保持上升趨勢。導(dǎo)致CHD 的病因除冠狀動(dòng)脈粥樣硬化外（占95%～99%），還包括炎癥、栓塞等。研究發(fā)現(xiàn)，TMAO 與動(dòng)脈粥樣硬化呈正相關(guān)[14-15]。TMAO 如何促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制尚不完全清楚，可能與以下機(jī)制有關(guān)：TMAO 可抑制膽固醇的反向轉(zhuǎn)運(yùn)[16]，還能刺激巨噬細(xì)胞募集。TMAO 可以通過增加細(xì)胞表面CD36 受體的表達(dá)和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）和細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM1）的表達(dá)來加劇巨噬細(xì)胞膽固醇的積聚[17]。

本研究顯示CHD 組TMAO、BMI、吸煙占比、血糖水平、合并高脂血癥占比、合并高血壓病占比、尿酸水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05），提示TMAO 水平與傳統(tǒng)CHD 危險(xiǎn)因素一樣是導(dǎo)致CHD的原因之一。多因素logistic 回歸分析證明了暴露于高TMAO 水平患CHD 的風(fēng)險(xiǎn)是一般人群的5 倍，進(jìn)一步相關(guān)性分析顯示TMAO 水平與CHD 嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。一項(xiàng)橫斷面研究[18]和一項(xiàng)隊(duì)列研究[19]發(fā)現(xiàn)，血清中高水平的TMAO 會(huì)增加心血管事件（死亡、心肌梗死）的風(fēng)險(xiǎn)。在動(dòng)物模型中，證明額外補(bǔ)充TMAO是動(dòng)脈粥樣硬化的直接誘因，其通過促進(jìn)巨噬細(xì)胞膽固醇積累和泡沫細(xì)胞的形成，降低循環(huán)中TMAO 水平的干預(yù)措施可以在不同的動(dòng)物模型中預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展[19-20]。這可能解釋了TMAO 水平在CHD患者中較高的原因。

綜上，TMAO 在促進(jìn)動(dòng)脈硬化[21]和上調(diào)炎癥因子[22-23]中扮演著重要的角色，將其作為一種新的生物標(biāo)志物用于心血管疾病預(yù)防的可能性進(jìn)一步增加。然而，有必要在未來進(jìn)行進(jìn)一步的大規(guī)模隨機(jī)對(duì)照研究，以確定TMAO 作為疾病標(biāo)志物、致病因子和治療靶點(diǎn)的真正重要性。