林授 江偉梅 詹友知 林洪鏗

自人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）被證實可通過輸血傳播以來，血液安全問題已成為醫(yī)療界，乃至全社會的關(guān)注熱點之一。如何最大程度上降低HIV經(jīng)輸血傳播，保障血液安全，是采供血人員工作的重中之重，全球都將HIV作為血液檢測的強制性篩查項目之一。獻血人群中的HIV感染者可分為新近感染和既往感染，新近感染的獻血者是造成HIV經(jīng)輸血傳播的最大隱患[1，2]，但國內(nèi)輸血行業(yè)對此關(guān)注較少，尚未見此類研究報道。新近感染指血清陽轉(zhuǎn)后，可檢測到HIV抗體產(chǎn)生，但感染時間較短。相較于新近感染，既往感染時間相對較長，二者的血清抗體反應(yīng)在抗體滴度、所占比例、特異性及親和力等方面不同，可通過Vironostika-LSEIA法、親和力測定試驗、BED-CEIA等試驗進行鑒別。本文通過對CDC（疾病預防控制中心）確證的HIV抗體陽性獻血者標本進行限制性抗原親和力酶聯(lián)免疫法（LAg-Avidity EIA）與BED捕獲酶聯(lián)免疫法（BEDCEIA）檢測，區(qū)分HIV-1新近感染與既往感染，再對判定為新近感染的獻血者特征進行分析，現(xiàn)報道如下。

材料與方法

1 標本 2011年～2018年來自福州地區(qū)的自愿無償獻血者，經(jīng)獻血前征詢體檢符合《獻血者健康檢查要求》[3]，并經(jīng)ALT、HBsAg和梅毒抗體金標法初篩檢測合格。在采集全血或成分血液同時留取血液檢測標本，所有標本采用EDTA-K2抗凝，HIV項目血清學抗體或核酸反應(yīng)性的標本均置于-80℃凍存，在進行新近感染檢測之前將樣本置于4℃復融，待室溫平衡后再檢測，檢測后剩余樣本放回-80℃凍存。

2 試劑與儀器 ELISA檢測試劑為法國BIO-RAD公司HIV抗原抗體檢測試劑和北京萬泰生物藥業(yè)有限公司HIV抗原抗體檢測試劑；核酸檢測試劑為Grifols公司的Procleix Ultrio和Procleix Ultrio Plus HBV/HCV/HIV-1核酸聯(lián)合檢測試劑盒（TMA-化學發(fā)光法）及其鑒別試劑；CDC確證試劑為新加坡MP生物醫(yī)學亞太有限公司生產(chǎn)的HIV1+2型抗體免疫印跡（WB）試劑；新近感染檢測試劑為采用美國SEDIA公司的HIV-1 LAg-Avidity EIA檢測試劑盒（批號：KM0601）、MAXIM公司的HIV-1 LAg-Avidity EIA檢測試劑盒（批號：J7795A）和美國SEDIA公司的BED HIV-1 Incidence CEIA檢測試劑盒（批號：HD1301）。使用主要檢測設(shè)備有TIGRIS全自動核酸檢測系統(tǒng)（美國Gene-Probe公司）、FAME全自動酶免分析儀及STAR全自動加樣儀（均為瑞士HAMILTON公司產(chǎn)品）、奧地利Anthos 2010型酶標儀和新加坡MP Biomedicals公司的全自動蛋白印跡儀等。所有試劑均在有效期內(nèi)使用，儀器設(shè)備按廠家規(guī)定進行定期維護、校準。

3 方法

3.1 篩查確證：按照《血站技術(shù)操作規(guī)程》[4]和《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》[5]要求，獻血者血液標本采用2種ELISA試劑和1種核酸試劑（NAT）分別進行HIV抗原/抗體和核酸檢測，任何檢測結(jié)果為反應(yīng)性的標本送CDC進行HIV抗體確證檢測。CDC采用WB方法對血液篩查HIV項目為反應(yīng)性的標本進行HIV抗體確證檢測，對確證為不確定的獻血者進行跟蹤采樣檢測。

3.2 新近感染檢測：分別采用MAXIM和SEDIA 2種LAg-Avidity EIA法HIV-1新近感染檢測試劑對所有確證陽性的標本進行檢測，對2種試劑檢測結(jié)果不一致的標本采用BED試劑進行復核。

3.3 結(jié)果判定：標本檢測OD值與校準品OD值的比值為樣本的ODn值，初篩時采用單孔重復，當樣本的ODn值＞2.0時，直接判定為既往感染；當ODn值≤2.0時，進行3孔重復確證檢測。試驗過程設(shè)置2孔陰性對照、3孔校準品、3孔弱陽性對照和3孔強陽性對照，只有所有對照品和校準品滿足試劑盒要求的范圍時檢測結(jié)果有效，否則重新進行檢測。當ODn值＞1.5時，判定為既往感染，ODn值≤1.5時判定為新近感染。3種試劑中只有當2種試劑檢測均判為新近感染時，結(jié)果判定為新近感染，代表血清轉(zhuǎn)陽期小于180天，其他情況均判定為既往感染。

結(jié) 果

1 2011年～2018年間共收集HIV抗體確證陽性的標本109份，經(jīng)SEDIA與MAXIM HIV-1 LAg-Avidity新近感染檢測試劑判定均為新近感染的標本共39份。另有9份標本單一試劑結(jié)果判定為新近感染，結(jié)果不一致的9份標本再用BED法檢測，有4份判定為新近感染。最終判定為新近感染的標本共43份，占39.45%，具體檢測情況見表1和表2。

表1 SEDIA與MAXIM 2種LAg試劑HIV-1新近感染檢測情況

表2 SEDIA與MAXIM檢測不一致標本BED檢測情況

2 經(jīng)3種試劑檢測43例標本判定為新近感染，判為新近感染的獻血者性別、年齡、文化程度、獻血次數(shù)及職業(yè)分布見表3。

討 論

雖然2011年～2018年福州地區(qū)無償獻血人群中HIV確證陽性率在2013年達到最高峰（0.03%）后呈現(xiàn)下降趨勢，但每年確證陽性率還維持在0.02%左右，略高于全國無償獻血人群HIV平均陽性率0.018%[6]，與華東地區(qū)其他省市[7-9]相比，也處于中高位水平。HIV的輸血傳播幾乎都是來自新近感染獻血者血液的“窗口期”感染，在本研究中收集的109例HIV感染的無償獻血者標本中，新近感染者為43例，占比高達39.45%?？梢姳镜貐^(qū)臨床用血安全仍面臨嚴重威脅，遏制HIV經(jīng)輸血傳播仍然是我們血站工作者乃至全社會面臨的重要課題。目前核酸檢測方法雖可將HIV檢測的窗口期縮短至11天，但處于窗口期的獻血者捐獻的血液仍無法檢出，存在傳播疾病的風險。安全獻血是減少“窗口期”疾病傳播的關(guān)鍵。因此，血站應(yīng)加強安全獻血教育宣傳，讓存在高危行為的獻血者自覺避免獻血。

表3 2011年～2018年HIV-1新近感染獻血者基本情況

做好HIV新近感染獻血者防控的前提是區(qū)分新近感染和既往感染者，在CDC系統(tǒng)針對特定人群此項工作已開展得較為成熟，但在我國血站系統(tǒng)幾乎還未開展HIV新近感染的監(jiān)測。目前，HIV-1新近感染可通過多種實驗室檢測進行，隨著檢測技術(shù)日趨成熟國內(nèi)外已有較多應(yīng)用報道，較為常用的方法有BED捕獲酶聯(lián)免疫法（BED-CEIA）和限制性抗原親和力酶聯(lián)免疫法（LAg-Avidity EIA）[10]，后者因評估結(jié)果更為準確逐步得到廣泛應(yīng)用[11]。本研究使用2種LAg-Avidity EIA試劑對經(jīng)CDC確證為抗體陽性的獻血者進行HIV-1新近感染檢測，再對2種試劑檢測不一致的標本采用BED法進行復核，最終判定43例HIV-1新近感染獻血者。本研究所收集的標本全部來自自覺健康的無癥狀獻血者，標本均送省CDC進行HIV確證試驗，若遇為既往確認陽性的的獻血者CDC會予以告知，而CD4+T淋巴細胞＜200個/μL的人員已處于發(fā)病期狀態(tài)，故本研究涉及的試驗背景為已排除了既往確認陽性及CD4+T淋巴細胞＜200 個/μL的情況。

從本地區(qū)新近感染獻血者特征分析顯示，男性占95.35%，年齡在18～30歲間占69.76%，受教育文化程度高中以上占62.79%，高校學生占25.58%，職員占27.91%，可見本地區(qū)無償獻血者HIV新近感染者中，以文化程度高的年輕男性為主，這是非常值得我們關(guān)注的防控點。在福州地區(qū)受人們生活方式轉(zhuǎn)變、城市改造和地鐵修建等各種客觀因素的影響，近年來街頭無償獻血量明顯下降，高校大學生越來越成為保障血液供應(yīng)不可或缺的一部分，高校男生則是這支獻血隊伍的主力軍與中堅力量。男性大學生正處于性活躍期，對新鮮事物充滿好奇，又尚未受到婚姻家庭等責任約束，性觀念開放，對男男性行為接受度較高，加上自我防護意識差，特別容易受到HIV感染，近年來其他地區(qū)也陸續(xù)報道無償獻血者HIV感染的趨勢正由一般人群向高校青年男男性行為者轉(zhuǎn)變[12-14]。在這類人群中他們發(fā)生高危行為后往往不愿意去醫(yī)療機構(gòu)或CDC等相關(guān)機構(gòu)檢測，而將參加獻血作為檢測的方式，忽視該行為可能導致因窗口期漏檢發(fā)生HIV的輸血傳播嚴重后果，這給血液安全埋下一個極大隱患。為降低經(jīng)輸血傳播HIV殘余風險，我國采供血機構(gòu)已在血清學檢測基礎(chǔ)上全面增加HIV核酸檢測，在最大程度上縮短HIV檢測窗口期，但由于病毒檢測窗口期的客觀存在，單憑檢測完全阻斷HIV經(jīng)輸血傳播，是不切合實際也是無法做到的。針對這些特定人群，我們采供血機構(gòu)工作人員在引導高校學生積極參與無償獻血的同時，應(yīng)加大開展高校艾滋病防控知識宣教工作的力度，建立低危的固定獻血者隊伍，在現(xiàn)場進行血液采集時工作人員應(yīng)加強與獻血者的溝通交流，仔細觀察并判斷其是否存在高危行為跡象和潛在的獻血隱患，告知利用獻血檢測HIV或惡意報復獻血須承擔的法律責任，勸說高危人員放棄獻血，淘汰不宜獻血者，從源頭上徹底阻斷HIV經(jīng)輸血傳播，保障臨床血液安全。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突