張麗娜，吳洪波，程學哲，門曉彥，閆秋艷，高 儉

(1.河北省秦皇島市海港醫(yī)院內(nèi)分泌科，河北 秦皇島 066000；2.中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊北戴河康復療養(yǎng)中心綜合內(nèi)科，河北 秦皇島 066100)

2型糖尿病是糖尿病中最常見的類型之一，其基本病因為β細胞功能出現(xiàn)缺陷，胰島素分泌不足，無法有效降低糖、血糖水平；但部分患者胰島素分泌正常，機體對胰島素不敏感，對胰島素的利用率較低，產(chǎn)生抵抗，亦會導致血糖升高[1]。2型糖尿病患者在早期時無明顯癥狀，不易被察覺，多在常規(guī)體檢或伴隨慢性并發(fā)癥時發(fā)現(xiàn)此?。弧叭嘁簧佟睘榈湫筒?，即多食、多飲、多尿，消瘦或短期內(nèi)體重減少[2]。2型糖尿病患者若出現(xiàn)乏力、疲勞、口干等表現(xiàn)，則提示代謝異常，需引起重視。隨著生活方式的改變以及人口老齡化的進程，糖尿病的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，對患者的生活質(zhì)量和經(jīng)濟帶來一定壓力[3]。在魏素濱[4]研究中，認為糖尿病是一種慢性且需終身服藥的代謝性疾病，其主要病因為具有抵抗力的胰島素相對缺乏。在劉晶等[5]研究中，采用胰島素泵可模擬機體正常的胰島素分泌過程，操作簡便、安全，且療效較好。本研究主要分析阿格列汀聯(lián)合不同胰島素強化方案對2型糖尿病患者微小RNA-144(microRNA-144，miR-144)、微小RNA-142(microRNA-142，miR-142)表達的影響，報告如下。

1 資 料 與 方 法

1.1一般資料 選取2019年3月—2020年3月我院接診的2型糖尿病患者106例作為研究對象，按照隨機數(shù)字表法將其分為胰島素泵組和基礎治療組各53例。胰島素泵組男性25例，女性28例，年齡46～73歲，平均(56.53±9.65)歲，基礎治療組男性26例，女性27例，年齡44～71歲，平均(54.63±9.55)歲。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

所有研究對象及家屬均知情同意且簽署知情同意書，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2納入標準和排除標準 納入標準：①符合《中國2型糖尿病防治指南(2017年版)》[6]中的診斷標準；②糖化血紅蛋白(hemoglobin，HbAlc)≥7.0%；③初始患者HbAlc≥9.0%或空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)≥11.0 mmol/L。排除標準：①1型糖尿病、妊娠期糖尿病及特殊類型糖尿病者；②對研究所用藥物過敏或有過敏史者；③合并糖尿病急性并發(fā)癥者；④癡呆、腦血管意外、心肌梗死者；⑤入院前2年有酒依賴、神經(jīng)活性藥物濫用或服用鎮(zhèn)靜催眠藥等藥物者。

1.3方法 兩組均采用阿格列汀進行治療，給予阿格列汀25 mg/次，1次/d，胰島素泵組采用胰島素泵進行治療，門冬胰島素持續(xù)皮下注射，初始劑量0.5 U/kg，地特胰島素，初始劑量0.2 U/kg，后期根據(jù)患者血糖水平變化適當調(diào)整劑量?；A治療組采用皮下胰島素進行治療，門冬胰島素注射液三餐前皮下注射，初始劑量0.5 U/kg，地特胰島素注射液睡前皮下注射，初始劑量0.2 U/kg。兩組基礎胰島素是總劑量的50%，其余50%均分至三餐前給藥。

1.4指標檢測

1.4.1FBG、餐后2 h血糖(2 h blood glucose,2 hBG)、HbAlc水平、治療總費用評價 采用上海玉研科學儀器有限公司的血糖測試儀檢測FBG、2 hBG水平；采用東西儀(北京)科技有限公司的Hb201+快速血紅蛋白檢測儀檢測HbAlc水平。統(tǒng)計兩組治療總費用，并做比較。

1.4.2炎性因子水平評價 抽取兩組清晨空腹靜脈血3 mL，以離心半徑為5 cm、以轉(zhuǎn)速3 000 r/min離心處理10 min，分離上層血清，-80 ℃保存，待用。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測C反應蛋白(C-reactive protein，CRP)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白細胞介素6(interleukin-6，IL-6)水平，實驗步驟：將血清樣本置于室溫后，取出試劑盒，標記酶標板，制作標準品，以1∶2的稀釋液稀釋樣品；在反應孔上依次加入稀釋好的待測血清及標準品100 μL/孔，放置37 ℃恒溫孵育箱中濕育2 h；用專用洗滌液將反應板清洗3次后，加入抗體工作液(1∶100倍稀釋后)100 μL/孔，置于37 ℃恒溫孵育箱中濕育45 min；繼續(xù)清洗反應板4次后，在反應孔內(nèi)加入TMB溶液100 μL/孔，置于37 ℃恒溫孵育箱中濕育45 min后在反應孔內(nèi)加入終止液100 μL/孔以終止反應，在450 nm處讀OD值；以OD值為縱坐標，以標準品為橫坐標，繪制標準曲線，根據(jù)血清樣本的OD值可在標準曲線上查出CRP、TNF-α、IL-6水平。

1.4.3miR-144、miR-142表達評價 采用實時熒光定量PCR法檢測miR-144、miR-142表達水平，將待測miRNAs反轉(zhuǎn)錄成cDNA，以β-actin為內(nèi)參基因，反轉(zhuǎn)錄反應體系：5 μL mRQ緩沖液(2×)、1.25 μL mRQ酶、3.75 μL RNA樣本，反轉(zhuǎn)錄反應條件：37 ℃ 60 min，85 ℃ 5 min，RCR管中加入90 μL純水稀釋至100 μL，采用日本Takara Bio公司的SYBR Advantage qPCR Premix Kit試劑盒和英國Applied Biosystems公司的7500定量PCR儀進行PCR反應，定量PCR反應體積為25 μL，包括2 μL cDNA、12.5 μL SYBR Advantage預混液(2×)、0.5 μL熒光染料校正液(50×)、0.5 μL mRQ3′引物、5 μL miRNAs特異性引物和9 μL純水，定量PCR反應條件：95 ℃ 10 s、95 ℃ 5 s，65 ℃ 20 s，循環(huán)40次，采用2-△△Ct方法計算miR-144、miR-142表達量，其中△Ct=Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因(miR-451a)，實驗獨立重復3次。miR-144上游引物：5′-UACAGUAUAGAUGAUGUACU-3′，下游引物：5′-TACTGTATAGATGATGTACT-3′；miR-142上游引物：5′-UGUAGUGUUUCCUAC-UUUAU-GGA-3′，下游引物：5′-TGTAGTGTTT-CCTACTTTATGGA-3′；內(nèi)參β-actin引物序列：上游：5′-CTGGCACCACACCTTCTACAATGAGC-3′，下游：5′-GAGGATCTTCATGAGGTAGTCA-GT-3′。

1.4.4治療效果評價 將治療效果分為顯效、有效、無效三個標準，其中顯效為FBG、2 hBG、HbAlc水平下降至正常范圍，有效為FBG、2 hBG、HbAlc水平下降超過治療前20%，無效為未達到上述標準。總有效率=(顯效+有效)例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.4.5不良反應發(fā)生情況評價 觀察兩組腹痛、頭暈、低血糖、尿路感染、急性胰腺炎等不良反應發(fā)生情況，并作比較。

1.5統(tǒng)計學方法 應用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)。計量資料比較分別采用兩獨立樣本t檢驗和配對t檢驗；計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1兩組FBG、2 hBG、HbAlc水平、治療總費用比較 治療前兩組FBG、2 hBG、HbAlc水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后兩組FBG、2 hBG、HbAlc水平均低于治療前，胰島素泵組FBG、2 hBG、HbAlc水平、治療總費用低于基礎治療組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

2.2兩組炎性因子水平比較 治療前兩組炎性因子水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后兩組炎性因子水平低于治療前，胰島素泵組炎性因子水平低于基礎治療組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表1 兩組FBG、2 hBG、HbAlc水平、治療總費用比較Table 1 Comparison of FBG, 2 hBG, HbAlc levels and total treatment costs between two groups

表2 兩組炎性因子水平比較Table 2 Comparison of the levels of inflammatory factors between two groups

2.3兩組miR-144、miR-142表達比較 治療前兩組miR-144、miR-142表達比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后兩組miR-144表達低于治療前，miR-142表達高于治療前，胰島素泵組miR-144表達低于基礎治療組，miR-142表達高于基礎治療組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組miR-144、miR-142表達比較Table 3 Comparison of miR-144 and miR-142 expression between two groups

2.4兩組治療效果比較 胰島素泵組治療總有效率高于基礎治療組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表4。

表4 兩組治療效果比較Table 4 Comparison of therapeutic effect between two groups (n=53，例數(shù)，%)

2.5兩組不良反應發(fā)生情況比較 兩組總不良反應發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表5。

表5 兩組不良反應發(fā)生情況比較Table 5 Comparison of adverse reactions between two groups (n=53，例數(shù)，%)

3 討 論

2型糖尿病發(fā)病與胰島素的分泌和胰島素異常相關聯(lián)，其中高糖毒性、胰島炎癥、終末糖基化產(chǎn)物形成均會對胰島β細胞造成損害[7]。如何有效控制或降低患者血糖、減少胰島素抵抗、保護胰島β細胞功能、提高患者預后，仍是目前研究熱點[8]。

地特胰島素、門冬胰島素在2型糖尿病治療中運用較為廣泛，其中地特胰島素可有效發(fā)揮降糖效果，增強胰島素聚合能力，促進其與白蛋白發(fā)生可逆性結(jié)合，在使用時需控制用量，血糖波動較??；門冬胰島素起效快且作用持續(xù)時間更短，可有效預防患者夜間出現(xiàn)低血糖癥狀[9-10]。隨著醫(yī)療水平的進步，胰島素泵在2型糖尿病的治療中得到廣泛運用，可有效改善胰島β細胞功能，對血糖具有長期控制作用，且無需長時間使用降糖藥物，在一定程度上減輕患者經(jīng)濟負擔[11]。有研究顯示，胰島素泵可促進胰島功能得到不同程度改善，其作用機制可能為通過對胰島素生理分泌模式進行模擬，快速緩解并解除高糖毒性[12]。阿格列汀是非擬肽類二肽基肽酶4抑制劑，具有高選擇性、高效的特點，對血糖具有顯著的控制作用。本研究中，阿格列汀聯(lián)合胰島素泵可有效改善2型糖尿病患者血糖及臨床相關指標，對胰島功能具有顯著的改善作用，療效較佳。

胰島素抵抗是糖尿病的主要病因之一，其中炎癥狀態(tài)會導致胰島素抵抗并參與胰島素抵抗的發(fā)生發(fā)展，CRP、TNF-α、IL-6等炎性因子具有協(xié)同作用，可直接增進胰島β細胞的破壞和損傷，增加糖尿病的風險[13]。肝細胞CRP的產(chǎn)生依賴于TNF-α和IL-6，其中TNF-α對CRP這類急性相反應蛋白具有刺激作用，還可直接作用于胰島β細胞，調(diào)節(jié)胰島β細胞的胰島素信號通路，促進2型糖尿病的延續(xù)；IL-6則可誘導血管內(nèi)皮細胞黏附分子表達，進而激活炎癥細胞，釋放氧自由基、蛋白酶，損傷血管內(nèi)皮細胞，增加血管通透性[14-15]。在劉偉等[16]研究中，他汀類藥物在治療糖尿病的過程中可有效抑制炎性因子水平，本研究與其結(jié)果一致。在周亞男等[17]研究中，TNF-α、IL-6等炎性因子水平出現(xiàn)非特異性升高時，會增加血管壁厚度、管腔狹窄、血管阻力等，若炎癥反應持續(xù)，還會造成神經(jīng)進一步損傷。本研究中，阿格列汀聯(lián)合不同胰島素強化方案可有效降低兩組患者炎性因子水平，且采用胰島素泵治療，可有效控制炎性反應。

在梁英智等[18]研究中，應激相關miRNAs與2型糖尿病存在線性相關的關系，其中miR-144表達升高會增加2型糖尿病患病風險，miR-142表達降低會增加2型糖尿病患病風險。miR-144是一種具有多種生物活性的miRNA，可通過靶向不同基因，對細胞起調(diào)節(jié)作用；在糖尿病的發(fā)生發(fā)展中，其參與胰腺β細胞抗凋亡作用，進而參與糖尿病抵抗[19]。在劉春興等[20]研究中，miR-144表達升高會加劇2型糖尿病的患病風險，其機制可能為miR-144可通過抑制胰島素受體底物1表達，進而破壞胰島素信號通路。此外，miR-144還可調(diào)節(jié)膽固醇代謝以及血漿中高密度脂蛋白水平，在腫瘤方面，可調(diào)節(jié)腫瘤細胞的增殖、分化、遷移[21]。本研究中，經(jīng)治療后miR-144表達降低、miR-142表達升高，且胰島素泵組治療效果更佳，說明胰島素泵在治療2型糖尿病中臨床意義更大。

綜上所述，阿格列汀聯(lián)合胰島素泵可有效改善2型糖尿病患者的臨床癥狀，減輕機體炎癥反應，降低不良反應發(fā)生率，提高預后效果，其機制可能為降低miR-144表達、升高miR-142表達。