傅金瑞，唐淑穩(wěn)（天津市寶坻區(qū)人民醫(yī)院.檢驗(yàn)科；.產(chǎn)科,天津 301800）

亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)是葉酸代謝通路的關(guān)鍵酶之一，目前已發(fā)現(xiàn)MTHFR基因多態(tài)性位點(diǎn)有20余種，以其中的C677T 和A1298C 多態(tài)性研究較多，并證實(shí)會(huì)直接影響到體內(nèi)葉酸、同型半胱氨酸等的水平，引起新生兒神經(jīng)管畸形、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、高血壓等疾病[1-2]。本研究通過(guò)檢測(cè)C677T 和A1298C 多態(tài)性，探討MTHFR基因多態(tài)性與育齡女性高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）感染的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 于2017年11月～2019年12月間來(lái)天津市寶坻區(qū)人民醫(yī)院產(chǎn)科進(jìn)行孕期或孕前體檢的育齡女性中，收集做HR-HPV 和MTHFR 多態(tài)性（包括C677T 和A1298C）檢測(cè)的樣本資料共1 130例，平均年齡24.07（18～37）歲，排除患有遺傳疾病或其他機(jī)體異常影響檢測(cè)結(jié)果者。

1.2 儀器與試劑 HR-HPV分型檢測(cè)采用凱普生物化學(xué)有限公司的HR-HPV檢測(cè)試劑盒及其配套的HHM2型核酸雜交儀；MTHFRC677T，A1298C 基因多態(tài)性檢測(cè)采用西安金磁納米生物技術(shù)有限公司試劑盒；核酸擴(kuò)增均使用宏石SLAN96P型擴(kuò)增儀。

1.3 方法 HR-HPV 進(jìn)行包括16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68，66 和82等15種基因型的檢測(cè)。采集標(biāo)本時(shí)，窺陰器暴露宮頸，于宮頸口輕輕搓動(dòng)宮頸刷使其順時(shí)針旋轉(zhuǎn)3～5 圈，慢慢取出將其放入裝有細(xì)胞保存液的樣品管中。如不能馬上送檢，可暫于4℃保存；同時(shí)采集EDTA 抗凝全血2～3ml 進(jìn)行MTHFRC677T，A1298C 基因多態(tài)性檢測(cè)，血樣本可于4℃保存5 天；均依據(jù)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)和判斷結(jié)果。收集符合條件樣本的相關(guān)臨床資料，進(jìn)行MTHFR基因多態(tài)性與HR-HPV感染之間的相關(guān)性分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 17.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與分析，多組間率的比較采用R×C列表χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HR-HPV感染和MTHFR C677T 及A1298C 多態(tài)性檢測(cè)結(jié)果 見(jiàn)表1。所收集的1 130例樣本中，126例為HR-HPV 多重感染（同時(shí)感染2個(gè)及以上型別），其中MTHFRC677T的CC，CT，TT型及A1298C的AA，AC，CC型分別為26，60，40例及88，31，7例；C677T 和A1298C 基因多態(tài)性雙重影響下MTHFR的代謝活性分為三種類型[3]，即正常、中間和弱代謝型。此126例樣本中，正常代謝型中的CCAA型18例，CCAC型8例；中間代謝型中的CTAA型37例，CTAC型16例；弱代謝型中的TTAA型33例，TTAC型7例，CTCC型7例。其余1 004例樣本中，陽(yáng)性者均為單病毒感染，HR-HPV 總陽(yáng)性率為22.31%（224/1 004）；前三種優(yōu)勢(shì)型別依次是HPV52型6.37%（64/1 004），16型4.18%（42/1 004），58型1.89%（19/1 004）。

表1 1 004例樣本MTHFR基因檢測(cè)結(jié)果

2.2 MTHFR基因多態(tài)性與HR-HPV感染相關(guān)性分析 見(jiàn)表2。在包含HR-HPV 單病毒感染病例的1 004例樣本中，MTHFR 正常、中間，弱代謝型的HR-HPV 陽(yáng)性率分別為23.40%（55/235）、19.96%（96/481）和25.35%（73/288），相互之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但就其中的優(yōu)勢(shì)型別52型或16型的感染率而言，若將弱代謝型與正常及中間代謝型比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[χ2=4.764，P=0.029,OR=1.771（1.054～2.975）；χ2=4.304，P=0.038,OR=1.922（1.027～3.599）]。提示MTHFR的弱代謝活性增強(qiáng)了優(yōu)勢(shì)型別的易感性（處于優(yōu)勢(shì)型別第三位的58型因陽(yáng)性例數(shù)過(guò)少故未作統(tǒng)計(jì)分析）。類似地，在正常、中間、弱代謝型，HR-HPV 單病毒感染與多重感染的陽(yáng)性率分別為23.41%（235/1 004）和20.63%（26/126）；47.91%（481/1 004）和42.06%（53/126）；28.69%（288/1 004）和37.30%（47/126）。若在同一代謝型中比較HR-HPV 單病毒感染與多重感染的陽(yáng)性率差異，則在弱代謝型統(tǒng)計(jì)分析得χ2=3.985，P=0.046,OR=1.479（1.005～2.176），提示弱代謝型也是多重感染的易感型別。

表2 HPV-52型及16型在MTHFR 三種表現(xiàn)型中的陽(yáng)性率比較

3 討論

目前有關(guān)MTHFR基因多態(tài)性與葉酸或同型半胱氨酸水平、胎兒唇裂、甲氨蝶呤化療效果等之間關(guān)系的研究較為多見(jiàn)，且大多只檢測(cè)C677T 多態(tài)性，結(jié)論也比較一致[4-6],認(rèn)為MTHFR基因C677T 和（或）A1298C位點(diǎn)的突變與較高的血同型半胱氨酸水平、唇腭裂等胎兒出生缺陷以及宮頸癌的發(fā)生等密切相關(guān)。薛雄燕等[7]收集均為HPV-16 陽(yáng)性的82例宮頸癌患者和82例對(duì)照者，發(fā)現(xiàn)與野生型（CC）相比，C677T的突變純合型（TT）可增加宮頸癌發(fā)生的危險(xiǎn)（OR ＝3.485，95%CI：1.331～9.122），周琰等[8]發(fā)現(xiàn)在接受 5-氟尿嘧啶化療治療的98例消化道腫瘤患者中，MTHFR 677C>T 突變型（CT和 TT）顯著增加了化療相關(guān)毒副反應(yīng)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)（χ2=4.188，P<0.05），而MTHFR 1298A>C 突變型（AC和 AA）與此并無(wú)顯著關(guān)聯(lián)性。但有關(guān)MTHFR 與HPV感染之間有否關(guān)聯(lián)，國(guó)內(nèi)研究較少，國(guó)外研究結(jié)論不盡一致。巴西研究者SILVA 等[9]收集宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）和宮頸鱗癌及對(duì)照組各30例，在HPV-16 或其它型別HR-HPV感染率上，未發(fā)現(xiàn)兩組間與C677T 多態(tài)性有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。但是伊朗學(xué)者HAJIESMAEIL 等收集96例宮頸癌和100例正常對(duì)照樣本，發(fā)現(xiàn)C677T 中的突變型（TT）對(duì)宮頸癌起防護(hù)作用，A1298C 中的突變型（CC）或者其與C677T 中的野生型（CC）的組合（屬于MTHFR 中間代謝型）均可增加罹患宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)也更易于感染HPV-16[10]。事實(shí)上，僅檢測(cè)C677T 多態(tài)性，由此得出的結(jié)論可能存在偏差。宋娜等[11]發(fā)現(xiàn)當(dāng)C677T-CC 合并A1298C-CC的時(shí)候，表達(dá)出的葉酸代謝能力是中間代謝型，這和單獨(dú)檢測(cè) C677TCC時(shí)的正常型不一致；同樣當(dāng) A1298C-CC 合并C677T-CT時(shí)，表達(dá)出的是弱代謝型，也和單獨(dú)檢測(cè) C677T-CT時(shí)的中間代謝型不一致。因此本課題聯(lián)合檢測(cè)C677T 和A1298C 多態(tài)性，以求得到更加客觀的結(jié)論。

本課題所檢測(cè)千余例樣本，C677T 基因型以CT（雜合）型為多見(jiàn)，占48.61%；A1298C 基因型以AA（野生純合）型為多見(jiàn)，占67.93%；MTHFR 代謝以中間型為多見(jiàn)，占47.91%，又以其中的CTAA亞型為主。研究發(fā)現(xiàn)，在國(guó)內(nèi)各地，尤其是在南北方之間，某些所述基因型的分布還是具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的[12-14]，比如 C677T 基因位點(diǎn)的TT 純合突變型由北向南呈現(xiàn)出逐漸下降的趨勢(shì)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析表明，在包含HR-HPV 單病毒感染病例的1 004例樣本中，雖然各代謝型之間HR-HPV 陽(yáng)性率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但相對(duì)于優(yōu)勢(shì)型別52型或16型而言，若將弱代謝型與正常及中間代謝型比較，則可發(fā)現(xiàn)弱代謝型是優(yōu)勢(shì)型別52型及16型的易感型別（OR值分別為1.771 和1.922）。并且，若在同一代謝型中比較HRHPV 單病毒感染與多重感染的陽(yáng)性率差異，則發(fā)現(xiàn)弱代謝型同樣是多重感染的易感型別（OR值1.479）。究其原因，認(rèn)為弱代謝型（TTAA，TTAC，CTCC，TTCC），亦即MTHFR的弱代謝活性能夠明顯引起血清葉酸水平下降，引起DNA 甲基化異常和DNA合成障礙，不但造成皮膚黏膜的損傷，影響其完整性和對(duì)病原微生物的抵抗力[15]，同時(shí)可能參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程[16-17]。本研究結(jié)果提示聯(lián)合檢測(cè)C677T 和A1298C 比單獨(dú)檢測(cè)C677T 多態(tài)性能夠更加客觀地反映機(jī)體MTHFR的酶活性，聯(lián)合檢測(cè)的MTHFR 弱代謝型可能是HR-HPV感染的優(yōu)勢(shì)病毒以及多重感染的易感型別，這為充分揭示葉酸代謝與皮膚黏膜病毒感染乃至轉(zhuǎn)變?yōu)槟[瘤之間的內(nèi)在聯(lián)系提供了新的理論依據(jù)，有助于更有效地防治HPV感染及其相關(guān)腫瘤的發(fā)生。