章瑛，劉彭浩邦，劉緒平，張春華

1.江西省藥品檢驗檢測研究院，國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評價重點實驗室，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330029；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330004

和膚洗劑具有清熱解毒、化濕潤燥、止癢收斂的功效，主要可用于疥瘡、濕疹、脂溢性皮炎、瘙癢性皮膚病和花斑癬［1-2］。和膚洗劑處方中主要由紫花地丁、白鮮皮、苦參、蛇床子等八味藥材組成，本身具有很強的抑菌效力，可以有效地解決大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌等引起皮膚瘙癢的問題［3-6］。但對白色念珠菌和黑曲霉的抑菌作用很弱，而真菌的污染和其繁殖能力很強，它對人體的危害很大，會引起系統(tǒng)性感染，其中嚴(yán)重危害生命的深部真菌感染目前呈上升趨勢。對于皮膚給藥的液體制劑而言，在存儲和使用過程中容易被微生物污染，為確保藥物制劑使用時的安全性，藥品中應(yīng)加入抑菌劑且應(yīng)該為其最低有效量［7-9］。

1 實驗材料與菌種

1.1 實驗菌種

銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）［CMCC（B）10 104］；大腸埃希菌（Escherichia coli）［CMCC（B）44 102］；金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）［CMCC（B）26 003］；白色念珠菌（Candida albicans）［CMCC（F）98 001］；黑曲霉（Aspergillus niger）［CMCC（F）98 003］（菌種均由中國醫(yī)學(xué)菌種保藏中心提供）。

1.2 實驗儀器

高壓蒸汽滅菌器HVA-85 日本Hirayama 公司；微波爐D8523CTL-2W 順德格蘭仕微波爐電器有限公司；電子天平Quintix6101-1CN 北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；生物安全柜AB2-4S1 新加坡ESCO 科技有限公司；生化培養(yǎng)箱IPP260 德國美墨爾特有限公司；霉菌培養(yǎng)箱 KB400 德國BINDER 有限公司；水浴鍋HH.W21.601S 上海躍進醫(yī)療器械廠

1.3 培養(yǎng)基批號及來源

被檢胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（批號：190704，生產(chǎn)單位：北京三藥科技開發(fā)公司）被檢沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（批號：20190310，生產(chǎn)單位：北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司）

胰酪胨大豆瓊脂對照培養(yǎng)基（批號：135025-201804，生產(chǎn)單位：中國食品藥品檢定研究院）沙氏葡萄糖瓊脂對照培養(yǎng)基（批號：135013-201703，生產(chǎn)單位：中國食品藥品檢定研究院）

1.4 樣品

含不同濃度抑菌劑的樣品，見表1。

表1 和膚洗劑中防腐劑以及濃度

2 方法

2.1 菌液制備

按照《中國藥典》2015 年版四部標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定程序，接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、黑曲霉進行培養(yǎng)，然后用稀釋劑制成適宜的濃度備用試驗。試驗用菌株均屬于第3 代。

2.2 計數(shù)方法適用性試驗

供試品微生物計數(shù)中所使用的培養(yǎng)基應(yīng)進行適用性檢查，供試品的微生物計數(shù)方法應(yīng)進行方法適用性試驗，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的微生物計數(shù)。

2.3 抑菌效力的測定

按照《中國藥典》2015 年版四部（通則1121）抑菌效力檢查法的要求，分別接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌菌和黑曲霉，按“2.2”項下經(jīng)驗證的計數(shù)方法觀察幾組對5 株菌的存活情況進行測定，并按照上述法規(guī)中的標(biāo)準(zhǔn)進行結(jié)果分析。

3 實驗結(jié)果

3.1 培養(yǎng)基適用性檢查

按規(guī)定程序新鮮配制胰酪胨大豆瓊脂和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基），121 ℃滅菌15 min，備用。

取12 個無菌平皿，分別接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、黑曲霉各兩皿，每皿接種1 mL 菌液（含菌50～100 cfu），另一平皿不接種菌作為空白對照，傾注對照培養(yǎng)基，混勻，凝固后倒置培養(yǎng)；被檢培養(yǎng)基同法操作。結(jié)果見表2。

表2 培養(yǎng)基適用性檢查

3.2 供試品計數(shù)方法學(xué)適用性試驗

取樣品（含苯甲酸鈉0.2%+羥苯乙酯0.02%），采用平皿法對5 株菌進行計數(shù)方法學(xué)適用性試驗，結(jié)果各試驗菌回收率均≥70%，符合藥典要求。

回收率的計算：（試驗組的平均菌落數(shù)―供試品對照組的平均菌落數(shù)）/菌液組的平均菌落數(shù)×100%，各試驗菌回收率均≥70%，結(jié)果一次獨立平行試驗中各試驗菌回收率均大于70%，說明采用平皿法（1∶10）不影響各菌的生長，可以用來計數(shù)，由此表明本品抑菌效力檢查方法可采用平皿法（1∶10），結(jié)果見表3。

表3 方法適用性試驗

3.3 抑菌效力的測定

每組樣品取5 支，每支接種一個試驗菌，每1 mL 供試品接種菌量為105～106cfu，接種菌液的體積不得超過供試品體積的0.5%～1%，充分混合，使供試品中的試驗菌均勻分布。然后將接種的供試品在試驗期間置25 ℃，避光貯存，貯存溫度的變化應(yīng)盡可能控制在最小范圍，并防止被污染。

分別于接種2、7、14、28 d 進行樣品中的微生物計數(shù)，對比初始加菌量，進行結(jié)果分析，結(jié)果見表4。

表4 抑菌效力試驗結(jié)果

4 討論

抑菌劑也叫作防腐劑，是指抑制微生物生長的化學(xué)物質(zhì)，主要作用在于抑制微生物的繁殖增長，防止微生物污染而影響藥品質(zhì)量。若藥品本身不具備或沒有足夠的抑菌作用，為了防止藥品在儲存和使用過程中被微生物污染，應(yīng)在藥品中適量加入抑菌劑，特別是多劑量使用需要反復(fù)打開的藥品制劑。抑菌劑本身是一種化學(xué)物質(zhì)，具有一定的毒性，使用過程中對人體都有一定的毒副作用，所以為確保藥物制劑使用時的安全性，藥品中使用的抑菌劑都應(yīng)該為其最低有效量，且能發(fā)揮正常的抑菌效力。

根據(jù)《中國藥典》及其他標(biāo)準(zhǔn)制定的防腐劑控制標(biāo)準(zhǔn)指導(dǎo)，針對液體制劑的性質(zhì)，筆者選用山梨酸類、苯甲酸類以及尼泊金類三種抑菌劑，不同的抑菌劑具有不同的用量和作用機制：山梨酸類常用量為0.15%～0.20%，主要用于酸性制劑，尤其pH值4.5左右的防腐效果最佳，其對霉菌抑制作用較強；苯甲酸類常用量為0.1%～0.3%，其在pH 值4 以下的抑菌作用強，作用主要靠未解離的分子，pH 值升高時，解離度增大，抑菌效力下降；尼泊金類常用量為0.05%～0.15%，對液體制劑的防發(fā)霉有效，尤其適用于中藥水性制劑。

綜合上述研究結(jié)果顯示可以得出，和膚洗劑本身對細菌具有一定的抑菌效力，但對白色念珠菌和黑曲霉的抑菌作用很弱，而加入山梨酸鉀抑菌劑時，增強了對真菌的抑菌作用，對細菌亦有一定的抑制，尤其對銅綠假單胞菌更為明顯，苯甲酸鈉防發(fā)酵能力較羥苯乙酯強，但防發(fā)霉能力較后者弱，故兩者聯(lián)用對液體制劑的防發(fā)酵和防發(fā)霉均有效，尤其適用于中藥水性制劑。參照《中國藥典》抑菌效力標(biāo)準(zhǔn)以及防腐劑控制標(biāo)準(zhǔn)，建議以“苯甲酸鈉0.1%+羥苯乙酯0.02%”作為和膚止癢洗劑中最適宜的抑菌劑以及最低有效濃度。

（續(xù)表）