盧漢文 劉海峰 吳躍平

深圳市兒童醫(yī)院輸血科，廣東深圳 518038

隨著兒科疾病的日益增多，病情日益復(fù)雜化，輸血治療成為目前兒科臨床治療的有效手段之一[1]。輸血前進(jìn)行血型鑒定、不規(guī)則抗體篩查和交叉配血檢測是安全有效輸血的三重保障[2]。然而，在做輸血前檢測實驗時，經(jīng)常會出現(xiàn)患兒不規(guī)則抗體篩查為陽性的結(jié)果。不規(guī)則抗體的存在極大可能會造成血型鑒定錯誤，交叉配血困難，且也是導(dǎo)致臨床輸血過程中發(fā)生溶血性輸血不良反應(yīng)的主要原因之一。因此，輸血前為患兒進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查的檢測顯得尤為重要[3]。同時，更進(jìn)一步地對不規(guī)則抗體篩查結(jié)果為陽性的患兒樣本進(jìn)行抗體鑒定檢測，并根據(jù)抗體鑒定檢測結(jié)果篩選相合的獻(xiàn)血員血液也是非常必要的，可以保障臨床用血的安全性和有效性?，F(xiàn)回顧性分析深圳市兒童醫(yī)院2018年7月至2020年6月51例輸血患兒的不規(guī)則抗體篩查陽性樣本，并對其進(jìn)行不規(guī)則抗體鑒定檢測。根據(jù)抗體鑒定檢測結(jié)果分析不規(guī)則抗體的分布和臨床意義，以確保臨床用血安全和輸血療效。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2018年7月至2020年6月在深圳市兒童醫(yī)院進(jìn)行輸血治療的51例不規(guī)則抗體篩查陽性患兒的臨床資料，留取患兒靜脈血樣本2 ml，EDTA抗凝，保存于2～8℃中，分批次進(jìn)行不規(guī)則抗體鑒定檢測。

1.2 儀器與試劑

SC-2546低速離心機(jī)（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司），TD-A型醫(yī)用離心機(jī)（長春博研科學(xué)儀器有限公司），F(xiàn)YQ型試劑卡孵育器（長春博研科學(xué)儀器有限公司），抗人球蛋白微柱凝膠卡（長春博迅生物技術(shù)有限公司，批號：20180503，20190904），不規(guī)則抗體篩選細(xì)胞（長春博德生物技術(shù)有限公司，批 號：20180718，20190309）不 規(guī)則抗體篩選細(xì)胞（長春博迅生物技術(shù)有限公司，批號：20191002，20200702），不規(guī)則抗體鑒定譜細(xì)胞（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，批號：20189014，20200423）。

1.3 檢測方法

1.3.1 不規(guī)則抗體篩查采用手工加樣的微柱凝膠卡法 將患兒血樣標(biāo)本置于SC-2546低速離心機(jī)中，3000 r/min離心5 min，分離血漿與紅細(xì)胞。標(biāo)記抗人球蛋白微柱凝膠卡Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三孔，分別加入稀釋至濃度為0.8%～1.0%的不規(guī)則抗體篩選細(xì)胞50 μl，再加入被檢患兒血漿50 μl于各孔，置FYQ型試劑卡孵育器37 ℃孵育15 min，取出置TD-A型醫(yī)用離心機(jī)中，按程序900 r/min離心2 min、1500 r/min離心3 min，取出肉眼觀察結(jié)果。紅細(xì)胞懸浮于凝膠表面或中段為陽性，均勻沉于凝膠底層的為陰性。

1.3.2 不規(guī)則抗體鑒定采用手工加樣的微柱凝膠卡法 標(biāo)記抗人球蛋白微柱凝膠卡譜細(xì)胞1～10號及自身對照孔，分別加入譜細(xì)胞1～10號20 μl及自身對照細(xì)胞20 μl，再加入被檢抗篩陽性患兒樣本血漿40 μl于各孔，置FYQ型試劑卡孵育器中，37 ℃孵育15 min，取出置TD-A型醫(yī)用離心機(jī)中，按程序900 r/min離心2 min、1500 r/min離心3 min，取出肉眼觀察結(jié)果。紅細(xì)胞懸浮于凝膠表面或中段為陽性，均勻沉于凝膠底層的為陰性。嚴(yán)格按照試劑說明書，根據(jù)譜細(xì)胞反應(yīng)格局進(jìn)行細(xì)胞譜核對，判定不規(guī)則抗體特異性。

2 結(jié)果

2.1 51例輸血兒童的不規(guī)則抗體陽性鑒定結(jié)果

不規(guī)則抗體鑒定出特異性抗體38例，分布于Rh、MNS、Kidd等血型系統(tǒng)，占74.5%；自身抗體及冷抗體13例，占25.5%。見表1。

表1 51例不規(guī)則抗體陽性鑒定結(jié)果

2.2 38例特異性抗體的抗體種類及分布頻率

38例特異性抗體（含組合抗體3例）檢測出Rh血型系統(tǒng)28例，占73.7%；MNS血型系統(tǒng)10例，占26.3%；Kidd血型系統(tǒng)3例，占7.9%。見表2。

表2 38例特異性抗體的抗體種類及分布頻率

3 討論

隨著兒科醫(yī)學(xué)的發(fā)展，新生兒溶血病、兒童惡性血液腫瘤等疾病的療效顯著提高，患兒某些疾病能夠治愈或生存率明顯上升，其中輸血醫(yī)學(xué)在疾病臨床治療過程中起到了不可或缺的獨特效果。現(xiàn)代輸血醫(yī)學(xué)規(guī)范要求的輸血安全不再僅是供、受者ABO、Rh（D）血型相同，還需要多種血型系統(tǒng)相容[4]。因此為輸血患兒進(jìn)行不規(guī)則抗體的篩查和鑒定，并探討其分布和臨床意義就顯得尤為迫切。

3.1 不規(guī)則抗體

不規(guī)則抗體是指不符合Landersteiner法則的ABO血型系統(tǒng)之外的其他血型抗體，即抗-A、抗-B以外的其他血型系統(tǒng)的意外抗體，這類抗體不按規(guī)律出現(xiàn)，可導(dǎo)致血型鑒定錯誤，或影響交叉配血結(jié)果，也是引起新生兒溶血病、免疫性溶血性輸血反應(yīng)等疾病的重要原因，其發(fā)生率約為0.3%～2.0%[5-7]。本研究回顧分析的51例不規(guī)則抗體鑒定結(jié)果顯示，以單獨抗體和組合抗體方式存在，其中Rh血型系統(tǒng)檢測到28例，占比54.9%（28/51）；MNS血型系統(tǒng)檢測到10例，占比19.61%（10/51）；Kidd血型系統(tǒng)抗體檢測到3例，占比5.88%（3/51），這一結(jié)果與孟霞等[8-9]相關(guān)文獻(xiàn)報道相符。

3.2 Rh血型系統(tǒng)

Rh血型抗原是同種異型抗原，在已發(fā)現(xiàn)的人類紅細(xì)胞血型系統(tǒng)中Rh血型系統(tǒng)最具遺傳多態(tài)性，是人類遺傳多態(tài)性的標(biāo)志之一，在臨床輸血中Rh血型系統(tǒng)相容性的意義僅次于ABO血型，本研究中Rh血型系統(tǒng)的不規(guī)則抗體占比最高，占特異性抗體73.7%。Rh血型系統(tǒng)的血型抗原有50多種，與臨床輸血密切相關(guān)的有5個抗原，其抗原性強(qiáng)弱依次為D、E、C、c、e抗原。Rh血型系統(tǒng)較容易因為同種免疫而產(chǎn)生相應(yīng)同種抗體，再次Rh血型不相容輸血可引起嚴(yán)重的溶血性輸血反應(yīng)。本研究中出現(xiàn)4例抗-D，為新生兒溶血性病的患兒，其抗體來源于患兒母親體內(nèi)的IgG類抗-D。更值得重視的是抗-E抗體，本研究中有抗-E 8例、抗-Ec 13例，占檢出的特異性抗體比例達(dá)55.3%。據(jù)文獻(xiàn)報道，我國漢族人群中E抗原陰性者的比例很高，約50%，抗-E抗體陽性患兒的輸血不容忽視[10-11]。因此，輸血前可對患者和供者血液均檢測Rh血型系統(tǒng)的D、E、C、c、e抗原，并實現(xiàn)相容性輸血，從源頭上降低抗-E、抗-c等高頻Rh抗體的發(fā)生率，避免臨床輸血時因為這些Rh不規(guī)則抗體引起的反復(fù)交叉配血不和而貽誤輸血時機(jī)，及時挽救患者生命[12]。

3.3 MNS血型系統(tǒng)

本研究顯示MNS血型系統(tǒng)產(chǎn)生不規(guī)則抗體頻率較高，占特異性抗體26.3%。MNS是第二個被發(fā)現(xiàn)的血型系統(tǒng)，其復(fù)雜性僅次于Rh血型系統(tǒng)，目前已了解到與MNS系統(tǒng)有關(guān)的抗原有46個[13]。本研究中有抗-M 8例和抗-S 2例。其中，抗-M是較為常見的“天然抗體”，不過也有研究發(fā)現(xiàn)通過輸血或細(xì)菌感染后刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗-M?？?M在溫度為4 ℃時反應(yīng)最強(qiáng)，個別能在37 ℃凝集紅細(xì)胞，其余大多數(shù)抗-M均在37 ℃以下時才會發(fā)生凝集紅細(xì)胞反應(yīng)?？?M表現(xiàn)出明顯的劑量效應(yīng)，與M+N+細(xì)胞的反應(yīng)比M+N-細(xì)胞弱，因此當(dāng)篩檢細(xì)胞為M+N+時，不能檢測出弱的抗-M樣本[14]。當(dāng)遇到37 ℃有活性的抗-M時，必須要選擇提供交叉配血相合的血液，以免引起溶血性輸血反應(yīng)?？?S通常是免疫性抗體，能造成溶血性輸血反應(yīng)和嚴(yán)重的HDN，需要選擇交叉相合的血液進(jìn)行輸注治療。

3.4 Kidd血型系統(tǒng)

Kidd血型系統(tǒng)抗體檢測到3例，其中抗-Jka 1例，抗-E、Jka組合1例，抗-Ec、Jka組合1例，占特異性抗體7.9%?？?Jka的特點是在人體外反應(yīng)非常微弱，在人體內(nèi)產(chǎn)生抗體后消失速度極快，數(shù)周后即難以檢出?？?Jka的回憶反應(yīng)很強(qiáng)，當(dāng)人體再次受到相應(yīng)抗原刺激時，抗-Jka抗體產(chǎn)生速度很快，可導(dǎo)致嚴(yán)重的遲發(fā)性輸血反應(yīng)[15]，這個特征需要予以特別關(guān)注。因此，對患兒不規(guī)則抗體鑒定既往結(jié)果進(jìn)行記錄和查詢也是必須的。

綜上所述，輸血是一項復(fù)雜、特殊、高風(fēng)險的治療方法。輸血前對患兒進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查和鑒定十分必要，可及時為患兒篩選到相合的血液進(jìn)行輸血治療[16]。在兒童群體中，因兒童處于生長發(fā)育階段，病情變化快，輸血顯得更為復(fù)雜，應(yīng)給予患兒ABO、Rh、MNS等多個血型系統(tǒng)相合的血液進(jìn)行輸注治療，可有效解決臨床配血不合的問題，也可有效減少遲發(fā)性輸血不良反應(yīng)的發(fā)生[17]。對于預(yù)期需要多次輸血的患兒，在首次輸血前即做好患兒ABO、Rh、MNS等血型系統(tǒng)高頻抗原的檢測，并給予不刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體的供者血液進(jìn)行輸注，是提高輸血安全的一個重要手段[18]，可從源頭上避免機(jī)體產(chǎn)生不規(guī)則抗體，進(jìn)一步促進(jìn)安全有效地輸血。