周文軍, 秦雁

廣西壯族自治區(qū)皮膚病防治研究所，廣西 南寧 530003

麻風(fēng)病是一種慢性傳染病，病理上表現(xiàn)為肉芽腫性炎癥，患者在臨床和病理上表現(xiàn)為從結(jié)核樣極型至瘤型極型的連續(xù)性病譜，代表著細(xì)胞免疫由強(qiáng)到弱的一種趨勢。麻風(fēng)病作為一種理想模型，已被大量用于免疫相互作用的研究中[1]。樹突狀細(xì)胞起源于髓系造血干細(xì)胞或外周循環(huán)和組織中的單核細(xì)胞，起著調(diào)節(jié)天然免疫與適應(yīng)性免疫的作用。在炎癥情況下，部分游走滲出的單核細(xì)胞分化為樹突狀細(xì)胞，近年來研究較多的有漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞。皮膚組織還有常駐于真皮的真皮樹突狀細(xì)胞和常駐于表皮的朗格漢斯組織細(xì)胞，這兩類細(xì)胞在炎癥環(huán)境下也會(huì)活化，起到樹突狀細(xì)胞的作用。CD123、FXⅢA、CD1a分別為上述三類樹突狀細(xì)胞較特異性代表的抗體標(biāo)記[2]，其在麻風(fēng)病皮損中的表達(dá)情況及意義研究報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集我院2015年1月至2020年4月新發(fā)診斷的麻風(fēng)病例，排除伴有麻風(fēng)反應(yīng)的病例，共17例，包括男11例、女6例，年齡23～76歲，平均48歲。其中少菌型麻風(fēng)7例(結(jié)核樣型麻風(fēng)2例，界線類偏結(jié)核樣型麻風(fēng)5例)，多菌型麻風(fēng)10例(界線類偏瘤型麻風(fēng)4例，瘤型麻風(fēng)6例)。所有病例均經(jīng)1名皮膚科主任醫(yī)師和1名高年資皮膚?？撇±磲t(yī)師按照2018年修訂版的中華人民共和國麻風(fēng)病診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]共同復(fù)核診斷。

1.2 方法

取患者皮損標(biāo)本，經(jīng)HE染色和免疫組織化學(xué)(EnVision兩步法)染色，標(biāo)記抗體為CD123、FXⅢA、CD1a。

2 結(jié)果

2.1 組織病理

7例少菌型麻風(fēng)表現(xiàn)為真皮層內(nèi)形成良好的結(jié)核樣肉芽腫，肉芽腫中央為上皮樣組織細(xì)胞，淋巴細(xì)胞較緊密圍繞(圖1A)，部分肉芽腫內(nèi)可見朗格漢斯多核巨細(xì)胞形成。10例多菌型麻風(fēng)表現(xiàn)為真皮層內(nèi)片狀的組織細(xì)胞肉芽腫，部分組織細(xì)胞胞漿泡沫化，淋巴細(xì)胞散在分布(圖1B)。

圖1 組織病理(HE染色) 1A：少菌型麻風(fēng)表現(xiàn)為真皮層內(nèi)形成良好的結(jié)核樣肉芽腫，肉芽腫中央為上皮樣組織細(xì)胞，外圍淋巴細(xì)胞較緊密圍繞(200×)；1B：多菌型麻風(fēng)表現(xiàn)為真皮層內(nèi)片狀的組織細(xì)胞肉芽腫，部分組織細(xì)胞胞漿泡沫化，淋巴細(xì)胞散在分布(100×)

2.2 免疫組化染色

CD123抗體標(biāo)記在7例少菌型麻風(fēng)病例的結(jié)核樣肉芽腫的上皮樣樹突狀組織細(xì)胞胞漿部位呈中等至較強(qiáng)棕黃色染色，且連接成片(圖2A)；在10例多菌型麻風(fēng)病皮損切片中各部位均未見明顯陽性表達(dá)，或僅偶見單個(gè)組織細(xì)胞胞漿弱陽性表達(dá)(圖2B)。

FXⅢA抗體標(biāo)記在7例少菌型麻風(fēng)病皮損切片中的真皮乳頭層和真皮內(nèi)肉芽腫性炎癥周圍的樹突狀細(xì)胞中強(qiáng)陽性表達(dá)，樹突勾勒明顯，部分樹突狀細(xì)胞穿插于結(jié)核樣肉芽腫炎癥細(xì)胞團(tuán)外圍的淋巴細(xì)胞區(qū)域(圖2C)；在10例多菌型麻風(fēng)病皮損切片中的真皮乳頭層和真皮內(nèi)肉芽腫性炎癥周圍的樹突狀細(xì)胞中強(qiáng)陽性表達(dá)，樹突勾勒明顯，而未見樹突狀細(xì)胞進(jìn)入肉芽腫性炎癥細(xì)胞團(tuán)中(圖2D)。

CD1a抗體標(biāo)記在7例少菌型麻風(fēng)病皮損切片中見表皮內(nèi)正常表達(dá)，真皮乳頭層和真皮內(nèi)的肉芽腫性炎癥細(xì)胞團(tuán)中散在陽性細(xì)胞表達(dá)(圖2E)，淺層炎癥細(xì)胞團(tuán)中表達(dá)較深部炎癥細(xì)胞團(tuán)多；在10例多菌型麻風(fēng)病皮損切片中表皮內(nèi)朗格漢斯組織細(xì)胞正常陽性表達(dá)，真皮內(nèi)未見陽性表達(dá)(圖2F)。

圖2 免疫組化(200×) 2A:結(jié)核樣肉芽腫的上皮樣樹突狀組織細(xì)胞胞漿部位呈中等至較強(qiáng)棕黃色染色，且連接成片; 2B:肉芽腫性炎癥中未見明顯陽性表達(dá)，或僅偶見單個(gè)組織細(xì)胞胞漿弱陽性表達(dá);2C:部分FXⅢA陽性樹突狀細(xì)胞穿插于結(jié)核樣肉芽腫炎癥細(xì)胞團(tuán)外圍的淋巴細(xì)胞區(qū)域;2D:肉芽腫性炎癥細(xì)胞中未見明顯FXⅢA陽性細(xì)胞;2E:表皮內(nèi)CD1a正常表達(dá)，真皮乳頭層和真皮內(nèi)的肉芽腫性炎癥細(xì)胞團(tuán)中散在陽性細(xì)胞表達(dá);2F:表皮內(nèi)朗格漢斯組織細(xì)胞正常陽性表達(dá)，真皮內(nèi)未見陽性表達(dá)

3 討論

根據(jù)宿主的免疫狀態(tài)和組織病理表現(xiàn)，麻風(fēng)病可以表現(xiàn)為從結(jié)核樣型麻風(fēng)(tuberculoid lepra)至瘤型麻風(fēng)(lepromatous lepra)這一連續(xù)性病譜，包括結(jié)核樣型麻風(fēng)(tuberculoid leprosy,TT)、界線類偏結(jié)核樣型麻風(fēng)(borderline tuberculoid leprosy,BT)、中間界線類麻風(fēng)(mid-borderline leprosy,BB)、界線類偏瘤型麻風(fēng)(borderline lepromatous leprosy,BL)和瘤型麻風(fēng)(lepromatous leprosy,LL)。根據(jù)細(xì)菌負(fù)荷量可以分為少菌型(paucibacillary leprosy)和多菌型，少菌型對應(yīng)結(jié)核樣型一極，多菌型對應(yīng)瘤型一極。少菌型或結(jié)核樣型一極代表針對麻風(fēng)桿菌抗原較強(qiáng)的細(xì)胞免疫反應(yīng)和低感染狀態(tài)，多菌型或瘤型一極代表較強(qiáng)的體液免疫反應(yīng)和高感染狀態(tài)[4-5]。多種類型的細(xì)胞參與麻風(fēng)的發(fā)病機(jī)制中，包括淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、施旺式細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和表皮角質(zhì)形成細(xì)胞[6]。

淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的分化在麻風(fēng)病分型中起到關(guān)鍵作用，在結(jié)核樣型一極分別分化為Th1型輔助性T淋巴細(xì)胞和活化的M1型巨噬細(xì)胞(CD68+/CD163-)，代表較強(qiáng)的細(xì)胞免疫功能；瘤型一極則分化為Th2型輔助性T淋巴細(xì)胞和替代活化的M2型巨噬細(xì)胞(CD68+/CD163+)，代表受到抑制的細(xì)胞免疫和相對較強(qiáng)的體液免疫反應(yīng)[1,7]。

樹突狀細(xì)胞作為專性抗原呈遞細(xì)胞，可以呈遞抗原給T淋巴細(xì)胞，并誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞的分化，因此推測其在麻風(fēng)病的免疫反應(yīng)過程中發(fā)揮著重要作用。各種類型的樹突狀細(xì)胞表達(dá)各自的樹突狀細(xì)胞標(biāo)記性抗原，可以用對應(yīng)的免疫組化抗體染色進(jìn)行原位觀察，根據(jù)其陽性程度和表達(dá)位置分析其在發(fā)病機(jī)制中的作用。本研究主要利用三種已知的樹突狀細(xì)胞抗體標(biāo)記CD123、CD1a、FXⅢA進(jìn)行研究。

CD123抗原位于IL-3受體a亞基，巨噬細(xì)胞表達(dá)IL-3受體且在該受體信號(hào)刺激下，活化成上皮樣組織細(xì)胞，即CD123陽性的單核細(xì)胞起源的樹突狀細(xì)胞，與髓系干細(xì)胞起源的漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞一樣，該細(xì)胞高表達(dá)CD123抗原，而不表達(dá)髓系標(biāo)記[ 8]。已有研究表明CD123陽性細(xì)胞表達(dá)于一些皮膚病中，并可用于鑒別盤狀紅斑狼瘡與扁平苔蘚[9]、角化棘皮瘤與鱗狀細(xì)胞癌[10]。亦有研究表明CD123+的漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞高表達(dá)于Ⅰ型麻風(fēng)反應(yīng)中[11]。

本研究結(jié)果顯示，CD123標(biāo)記主要表達(dá)于少菌型麻風(fēng)肉芽腫中，在多菌型麻風(fēng)中未見明顯表達(dá)，表明其參與了少菌型麻風(fēng)的細(xì)胞免疫反應(yīng)，而在多菌型麻風(fēng)的免疫反應(yīng)中其作用受到抑制或不參與其中，這與以往研究認(rèn)為少菌型麻風(fēng)有著較強(qiáng)的細(xì)胞免疫反應(yīng)，而多菌型麻風(fēng)細(xì)胞免疫反應(yīng)受到抑制的結(jié)果一致。另外，其免疫組化染色陽性表達(dá)的位置與HE切片上對應(yīng)的上皮樣細(xì)胞的位置一致，表明HE染色上見到的上皮樣細(xì)胞是CD123+的細(xì)胞。有研究認(rèn)為這種細(xì)胞是由單核巨噬細(xì)胞表達(dá)CD123抗原后分化為漿細(xì)胞樣單核細(xì)胞，即不成熟的漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞的前體細(xì)胞，進(jìn)一步成熟為漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞[12]。因此，CD123陽性細(xì)胞僅表達(dá)于少菌型麻風(fēng)中，且高表達(dá)于Ⅰ型麻風(fēng)反應(yīng)中，推測其可用于少菌型麻風(fēng)和Ⅰ型麻風(fēng)反應(yīng)的診斷與鑒別診斷中，但尚需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證以及臨床應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)的積累。

FXⅢA是凝血因子XⅢ的活化形式，是常駐真皮樹突狀細(xì)胞(一種特化的纖維組織細(xì)胞)的特異性標(biāo)記，病理診斷中可用來鑒別皮膚纖維瘤和隆突性皮膚纖維肉瘤等(FXⅢA在前者中呈陽性表達(dá)，而在后者中呈陰性)[13]。有研究表明FXⅢA陽性的真皮樹突狀細(xì)胞表達(dá)于未定類麻風(fēng)皮損中，與正常皮膚對照差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而且認(rèn)為這種樹突狀細(xì)胞在炎癥反應(yīng)中參與了抗原呈遞的作用[14]。本實(shí)驗(yàn)觀察到在少菌型和多菌型麻風(fēng)的真皮乳頭層和肉芽腫周圍均有較強(qiáng)的表達(dá)，而在肉芽腫的炎癥細(xì)胞團(tuán)中僅在少菌型麻風(fēng)中見陽性表達(dá)，并可見陽性細(xì)胞穿插于結(jié)核樣肉芽腫的淋巴細(xì)胞間?？梢姡現(xiàn)XⅢA陽性的真皮樹突狀細(xì)胞亦參與了少菌型麻風(fēng)的細(xì)胞免疫反應(yīng)中，而未參與多菌型麻風(fēng)的發(fā)病或在其中受到抑制。

CD1a是一種免疫細(xì)胞的表面膜抗原，在病理診斷中常用作朗格漢斯組織細(xì)胞的標(biāo)記，其參與將脂類抗原呈遞給Th1類輔助性T細(xì)胞。朗格漢斯組織細(xì)胞起源于髓系干細(xì)胞，成熟后遷移并常駐于表皮內(nèi)，其本質(zhì)是一種有著抗原呈遞功能的樹突狀細(xì)胞，是皮膚的天然免疫細(xì)胞，參與皮膚炎癥的細(xì)胞免疫反應(yīng)[15]。有研究表明其在結(jié)核樣型麻風(fēng)中表達(dá)，而在瘤型麻風(fēng)中不表達(dá)，與麻風(fēng)病不同類型的細(xì)胞免疫強(qiáng)度呈正相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)中觀察到少菌型麻風(fēng)切片中緊鄰表皮的真皮乳頭層和真皮內(nèi)的肉芽腫性炎癥中均散在有陽性表達(dá)的細(xì)胞，而多菌型麻風(fēng)的切片中不管是表皮下無浸潤帶或者是肉芽腫性炎癥中均未見陽性表達(dá)。表明CD1a陽性表達(dá)的樹突狀細(xì)胞參與了麻風(fēng)病細(xì)胞免疫應(yīng)答中。

麻風(fēng)桿菌屬于胞內(nèi)寄生菌，被巨噬細(xì)胞吞噬后，能夠阻礙吞噬體和溶酶體的融合，從而可以寄生存活在巨噬細(xì)胞的胞漿內(nèi)。少菌型麻風(fēng)肉芽腫中高表達(dá)的樹突狀細(xì)胞標(biāo)記與其有效激活巨噬細(xì)胞的殺菌活性有關(guān)，可能是通過促進(jìn)Th1類輔助性T細(xì)胞的分化，分泌INF-γ等細(xì)胞因子起作用。另外，樹突狀細(xì)胞可以在巨噬細(xì)胞周圍形成一道免疫屏障，防止麻風(fēng)桿菌的播散，因此少菌型麻風(fēng)僅能偶爾在神經(jīng)束內(nèi)發(fā)現(xiàn)少量麻風(fēng)桿菌。而多菌型麻風(fēng)肉芽腫中缺少樹突狀細(xì)胞的活化，不能有效地激活巨噬細(xì)胞殺滅胞內(nèi)菌，導(dǎo)致麻風(fēng)桿菌在巨噬細(xì)胞胞漿內(nèi)大量繁殖。少菌型麻風(fēng)患者較多菌型麻風(fēng)患者有更強(qiáng)乃至過強(qiáng)的細(xì)胞免疫功能，更有可能發(fā)生Ⅰ型麻風(fēng)反應(yīng)，而多菌型麻風(fēng)患者則更常發(fā)生體液免疫機(jī)制介導(dǎo)的Ⅱ型麻風(fēng)反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)研究的三種樹突狀細(xì)胞之間的差異則表現(xiàn)為表達(dá)部位的不同，即CD123+細(xì)胞以真皮肉芽腫中央為主，F(xiàn)XⅢA+細(xì)胞以真皮內(nèi)肉芽腫周邊部位為主，CD1a+細(xì)胞以表皮內(nèi)和真皮淺層為主。另外，有研究發(fā)現(xiàn)一種單核細(xì)胞起源的DC-SIGN+的樹突狀細(xì)胞在多菌型麻風(fēng)中表達(dá)更多[16]。近年來的分子遺傳學(xué)研究表明多數(shù)麻風(fēng)易感基因?yàn)槊庖呦嚓P(guān)的，其中MMP12基因與少菌型麻風(fēng)中的樹突狀細(xì)胞相關(guān)[17]，說明易感基因等內(nèi)在因素在麻風(fēng)病的發(fā)病和型別方面起著關(guān)鍵性的作用。

綜上所述，本研究顯示，CD123陽性的上皮樣組織細(xì)胞(漿細(xì)胞樣單核/樹突狀細(xì)胞)、CD1a陽性的朗格漢斯組織/樹突狀細(xì)胞和FXⅢA陽性的真皮樹突狀細(xì)胞作為抗原呈遞細(xì)胞均不同程度地參與少菌型麻風(fēng)病的發(fā)病機(jī)制，起到激活Th1輔助性T淋巴細(xì)胞和細(xì)胞免疫的作用，而在多菌型麻風(fēng)皮損中未見明顯表達(dá)，推測其功能在多菌型麻風(fēng)宿主免疫狀態(tài)的微環(huán)境中受到抑制，致使其對細(xì)胞免疫的調(diào)節(jié)作用缺失，從而確立了多菌型麻風(fēng)的免疫類型。