梁 銳，高太祥，趙 峰，李珊珊，王 瑞

（山西中醫(yī)藥大學，山西 晉中 030619）

白英為茄科茄屬植物白英（Solanum lyratum Thunb）的干燥全草，又名鬼目草、白毛藤、毛千里光、金線綠毛龜、葫蘆草等，以全草及根供藥用，具有清熱利濕、解毒消腫、抗癌等功效。白英為常用抗癌中草藥，用于治療肝癌、乳腺癌、宮頸癌、胃癌等各種癌癥，臨床上應用越來越廣泛［1-4］。對白英的化學成分及藥理研究表明，白英主要含皂苷類、甾體生物堿類、有機酸、黃酮類等，是白英藥理作用的主要有效成分［5-7］。本研究建立了HPLC 法測定白英中澳洲茄胺含量的方法，為石英藥材的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent1260 高效液相色譜儀（安捷倫公司）；AB-135S 十萬分之一電子天平（METTLER 梅特勒集團）；FA/JA 1004 萬分之一分析天平（上海天平儀器廠）；KV5200 超聲波儀（昆山超聲儀器有限公司）；數(shù)顯恒溫水浴鍋（上海申勝生物技術有限公司）；澳洲茄胺對照品（MUST-12052101，成都曼思特生物科技有限公司）；白英對照藥材（批號：121316-201003，中國食品藥品檢驗研究院）；乙腈（色譜純，GRACE COMPANY INC.）；乙酸乙酯（分析純，天津市北辰方正試劑廠）；甲醇（分析純，天津市進豐化工有限公司）；鹽酸（分析純，濃度：36%～38%，天津市耀華化學試劑有限責任公司）；氨水（分析純，濃度：25%，天津市科密歐化學試劑有限公司）；純凈水（杭州娃哈哈集團有限公司）；白英藥材為購買或自采，經(jīng)山西中醫(yī)藥大學鑒定教研室裴香萍副教授鑒定為茄科茄屬植物白英的干燥全草。

2 含量測定

2.1 色譜條件

Agilent SB-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脫；流速：1.0 mL/min；檢測波長：210 nm；進樣量：10 μL。梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取澳洲茄胺對照品1.0 mg 于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制得0.105 mg/mL 澳洲茄胺對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

稱取白英藥材（過50 目篩）0.5 g，精密稱定，置于150 mL 三角瓶中，依次加入1 mol/L 鹽酸10 mL 和甲醇20 mL，超聲處理40 min，過濾。濾液轉移至250 mL 圓底燒瓶中，向濾液中加入6 mol/L 鹽酸12.5 mL，回流水解1 h，趁熱揮去甲醇，放冷，用濃氨水調(diào)pH 值至10。用乙酸乙酯萃取3 次，每次20 mL，合并乙酸乙酯萃取液，置于水浴鍋上90 ℃揮干溶劑，殘渣加甲醇少量多次溶解，定容于10 mL 容量瓶中，即得供試品溶液［8］。

2.4 標準曲線的制備

取對照品溶液，分別進樣4、6、10、12、16、18 μL，測得澳洲茄胺的峰面積。以進樣量（μg）為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算得回歸方程：Y=4791.6X-230（r=0.999 6）。結果表明，澳洲茄胺對照品在0.4 μg～1.8 μg 范圍內(nèi)，呈良好的線性關系。

2.5 精密度實驗

稱取白英藥材（浙江）0.5 g，精密稱定，按“2.3”項下方法制備，制得供試品溶液，精密吸取供試品溶液10 μL 重復進樣6 次，測定澳洲茄胺峰面積，計算其含量的RSD 值為0.7%，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實驗

稱取白英藥材（浙江）0.5 g，精密稱定，按“2.3”項下方法制備，制得供試品溶液，精密吸取供試品溶液10 μL，在0、2、4、6、8、10、12、24 h 測定澳洲茄胺峰面積，計算其含量的RSD 值為3.1%。結果表明：澳洲茄胺在24 h 內(nèi)有良好的穩(wěn)定性。

2.7 重復性實驗

稱取白英藥材（浙江）6 份，每份0.5 g，精密稱定，按“2.3 供試品溶液的制備”項下方法制備，制得供試品溶液6 份，分別精密吸取供試品溶液10 μL，測定澳洲茄胺峰面積，計算其含量的RSD 為1.6%，表明本方法重復性良好。

2.8 加樣回收率實驗

稱取浙江白英藥材6 份，每份0.25 g，精密稱定，按“2.3 供試品溶液的制備”項下方法制備，用濃氨水調(diào)pH 值至10，分別加入0.105 mg/mL 澳洲茄胺對照品1 mL，用乙酸乙酯萃取3 次，每次20 mL，合并乙酸乙酯萃取液，置于水浴鍋上蒸干，殘渣加甲醇少量多次溶解，定容于10 mL 容量瓶中，即得供試品溶液。分別精密吸取供試品溶液10 μL，測定澳洲茄胺的峰面積，計算其回收率，結果見表2。

表2 加樣回收率試驗

2.9 專屬性實驗

精密移取甲醇溶劑10 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件進行測定，在澳洲茄胺的保留時間沒有色譜峰出現(xiàn)，說明溶劑甲醇不影響澳洲茄胺的測定，方法的專屬性良好。

2.10 樣品含量測定

分別稱取不同產(chǎn)地的白英藥材0.5 g，精密稱定，照“2.3 供試品溶液的制備”項下方法制備，制得不同產(chǎn)地的供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液10 μL，測定澳洲茄胺峰面積并計算含量，各產(chǎn)地白英藥材中澳洲茄胺含量見表3。澳洲茄胺對照品、對照藥材和樣品的色譜圖見圖1～3。

表3 白英藥材中的澳洲茄胺含量

圖1 澳洲茄胺對照品HPLC 色譜圖（0.105 mg/mL）

圖2 白英對照藥材HPLC 色譜圖

圖3 白英藥材（浙江）HPLC 色譜圖

3 討論

3.1 流動相的選擇

本實驗比較了不同的流動相：乙腈-氨水、乙腈-七氟丁酸、乙腈-水。結果表明，以乙腈-氨水作流動相，澳洲茄胺峰的拖尾現(xiàn)象比較嚴重；以乙腈-0.05%七氟丁酸（體積比為30∶70）作為流動相［3］，在本實驗條件下沒有出現(xiàn)色譜峰；以乙腈-水為流動相，梯度洗脫，與其他兩種流動相相比具有色譜圖基線平穩(wěn)、澳洲茄胺峰對稱因子較好、澳洲茄胺峰與其他色譜峰分離度較好等優(yōu)勢。因此選擇乙腈-水作為流動相。

3.2 測定波長的選擇

澳洲茄胺在波長為207 nm 處有最大吸收，且在206～210 nm 吸光度值差別不大，為了減小基線噪音，設定測定波長為210 nm。結果見圖4。

圖4 澳洲茄胺對照品光譜圖

白英作為一種抗癌消炎藥，在現(xiàn)今社會中應用越來越廣泛，建立一個有效的標準來控制白英的質(zhì)量很有必要。大量研究發(fā)現(xiàn)，植物中的生物堿具有明顯的抗腫瘤、抗菌消炎、鎮(zhèn)痛等功效［9］，因此本實驗選擇澳洲茄胺進行含量測定。本研究通過采用HPLC 法測定不同產(chǎn)地白英中澳洲茄胺的含量，建立了方便、快速的白英中澳洲茄胺含量的測定方法，該方法精密度、穩(wěn)定性和重復性均良好，為制定白英藥材的質(zhì)量標準提供了有價值的參考。