曹韻茗，姜會(huì)真，李佳茹，楊郁鵬，司佳弘，任華山，趙季宇，金曉飛，燕 平

（山西中醫(yī)藥大學(xué)，山西 晉中 030619）

男子不育的原因多為少弱精癥，少弱精癥是指男性精液中精子數(shù)量低于正常參考值范圍（20×106/mL），或精子運(yùn)動(dòng)能力差，甚至不運(yùn)動(dòng)［1］。

“秩邊透水道”是長針療法中的特殊刺法，由山西名醫(yī)冀來喜教授提出并規(guī)范了其操作方法，后又通過多年的臨床實(shí)踐和科學(xué)研究，逐漸建立起較為成熟的針法體系［2］。基于該針法能夠有效治療泌尿生殖系統(tǒng)疾病，并且普通常規(guī)針刺能夠?qū)ι偃蹙Y患者的精液質(zhì)量有所改善［3-4］，本研究欲探究“秩邊透水道”針法對腺嘌呤誘導(dǎo)下少弱精癥大鼠的精液質(zhì)量及激素卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH）、黃體生成素（luteinizing hormone，LH）、睪酮（testosterone，T）水平的影響，從而為臨床提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Sprague-Dawley（SD）大鼠40只，清潔級、健康、成年雄性，體質(zhì)量（200±20））g，購于北京市海淀興旺動(dòng)物養(yǎng)殖場［SCXK（京）2014-0013］，并于山西中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心飼養(yǎng)，室溫（25±2）℃，濕度55%～60%，噪音低于60 分貝，自由攝食飲水。

1.1.2 試劑與儀器 Vetec Adenine（美國SIGMAALORICH）；徠卡（Leica）正置生物顯微鏡（DM400B/DFC4SOC，徠卡微系統(tǒng)有限公司）；Rat Testosterone（T）ELISA Kit 96T，Rat Luteotropic hormone（LH）ELISA Kit 96T，Rat Follicle-stimulating hor mone（FSH）ELISAKit 96T 均購置于Bio-Swamp公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組與造模 將40 只SD 大鼠稱重后編號(hào)，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組、模型組、腎俞組、秩邊透水道組4 組，每組10 只，5 只/籠。模型組、腎俞組、秩邊透水道組大鼠以20 mg/mL 腺嘌呤溶液按1 mL/100 g 體質(zhì)量灌胃，共28 d，制備大鼠少弱精癥模型。空白組使用等量的生理鹽水連續(xù)灌胃28 d。

1.2.2 干預(yù)措施 模型建立后，腎俞組選取雙側(cè)腎俞穴進(jìn)行針刺干預(yù)，深度約為6 mm。秩邊透水道組治療方法：大鼠呈俯臥位進(jìn)行固定，用針灸針快速刺入秩邊穴，并往水道穴方向透刺進(jìn)針，深度8～12 mm。皆行平補(bǔ)平瀉手法，留針30 min，1 次/d，連續(xù)治療28 d?？瞻捉M與模型組只進(jìn)行等時(shí)間的抓取固定，不做其他處理。

1.2.3 標(biāo)本采集與指標(biāo)觀察

1.2.3.1 一般情況 逐日監(jiān)測記錄各組大鼠毛發(fā)光澤、活動(dòng)狀況、反應(yīng)表現(xiàn)、食量、體質(zhì)量等方面的變化。

1.2.3.2 血清中FSH、LH、T 含量 大鼠使用10%水合氯醛麻醉，待夾尾無肢體反應(yīng)后于腹主動(dòng)脈處進(jìn)行采血，靜置、分離出血清，并遵照ELISA 試劑盒說明書對血清中FSH、LH、T 的含量進(jìn)行檢測。

1.2.3.3 精子質(zhì)量分析 麻醉后斷頭處死各組大鼠，摘取睪丸、附睪、腎臟等相關(guān)臟器，剪取附睪尾部10 mg，經(jīng)離心、孵化、混勻后，在血細(xì)胞記數(shù)板上行鏡下觀察，記錄精子總數(shù)與活力，并計(jì)算出精子密度。按照WHO 推薦使用的方法對精子活力進(jìn)行分級并記錄。向前運(yùn)動(dòng)（PR）：即不考慮速度的情況下能夠主動(dòng)呈直線或沿大圓周進(jìn)行運(yùn)動(dòng)。非向前運(yùn)動(dòng)（NP）：即其余非向前運(yùn)動(dòng)的形式，如運(yùn)動(dòng)軌跡呈現(xiàn)出小圓周型，尾部無法驅(qū)動(dòng)頭部，或者僅有尾部運(yùn)動(dòng)。不動(dòng)（IM）：即沒有運(yùn)動(dòng)。精子活動(dòng)率=（PR+NP）/ PR+NP+IM。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 24.0 軟件對資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。計(jì)量資料滿足正態(tài)性且方差齊，組間采取單因素方差分析（One-way ANOVA）進(jìn)行比較，兩兩比較以LSD-t法進(jìn)行；符合正態(tài)分布、方差不齊及不符合正態(tài)分布，采用非參數(shù)檢驗(yàn)比較。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

空白組大鼠無異常情況，模型組、腎俞組和秩邊透水道組大鼠均有不同程度的變化，出現(xiàn)毛發(fā)發(fā)黃，粗糙，光澤度下降，并且整體精神狀態(tài)欠佳，活動(dòng)量也有所下降。

2.2 血清中FSH、LH、T 含量

4 組大鼠血清FSH 含量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與空白組比較，模型組LH 含量升高，T 含量下降（P＜0.01）；與模型組比較，腎俞組、秩邊透水道組LH 含量降低，T 含量升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；腎俞組、秩邊透水道組LH、T 含量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表1。

表1 大鼠血清中FSH、LH、T 水平的變化 （）

表1 大鼠血清中FSH、LH、T 水平的變化 （）

注：與空白組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01

2.3 精子質(zhì)量

與空白組比較，模型組大鼠精子密度與活力下降明顯（P＜0.01），提示造模成功；與模型組比較，腎俞組、秩邊透水道組精子密度和活力均升高（P＜0.01），秩邊透水道組較腎俞組精子密度及活力升高幅度更大（P＜0.05）。結(jié)果見表2。

表2 各組精子密度與精子活力的變化 （）

表2 各組精子密度與精子活力的變化 （）

注：與空白組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01；與腎俞組比較，3）P＜0.05

3 討論

造成男性不育癥的原因大致有先天生殖器異常、內(nèi)分泌紊亂、免疫性因素以及外界環(huán)境污染、化學(xué)藥物造成的器質(zhì)性病變，或因功能性病變?nèi)缭缧?、勃起功能障礙、性欲淡漠等，從而引起下丘腦-垂體-睪丸軸調(diào)節(jié)功能異常［5］，造成睪酮T 等激素水平下降，精子密度和精子活力也隨之下降。

用以維持男性生殖系統(tǒng)正常功能的雄激素，是精子得以產(chǎn)生、發(fā)育和成熟的基礎(chǔ)，主要為睪酮（T），經(jīng)由生物軸下丘腦-垂體-睪丸實(shí)行雙向調(diào)控分泌［6］。呈脈沖式分泌的促性腺激素釋放激素（GnRH）由下丘腦產(chǎn)生并作用于垂體，使垂體前葉繼而分泌合成卵泡刺激素（FSH）和黃體生成素（LH），睪丸內(nèi)的間質(zhì)細(xì)胞受到LH 的刺激生成睪酮，以促進(jìn)精子的成熟；而FSH 通過結(jié)合相應(yīng)受體提高曲細(xì)精管腔的睪酮濃度，進(jìn)而加快成熟精子的分化程度［7］，所以說睪酮的含量直接影響到精子的質(zhì)量。

在一些生殖泌尿疾病的治療中，針灸已作為一種常用的手段和方法。在臨床實(shí)踐中，作為傳統(tǒng)針法的秩邊透水道技術(shù)已得到廣泛使用。從其經(jīng)絡(luò)屬性上來看，秩邊穴歸屬于膀胱經(jīng)，絡(luò)腎，膀胱經(jīng)分布于頭面、腰背及下肢外側(cè)，別入于肛。根據(jù)現(xiàn)代解剖研究，膀胱經(jīng)與人體中樞神經(jīng)及周圍神經(jīng)存在著某種聯(lián)系［8］，加之骶區(qū)的秩邊穴下分布有豐富的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，無疑可擴(kuò)大其主治范圍［9］。臨床治療時(shí)發(fā)現(xiàn)針感可向下肢放射至足趾部，治療下肢、腰部的疾患，如坐骨神經(jīng)痛［10］；針刺朝向肛周區(qū)域可用于直腸癰等肛腸類疾病的治療［11］；若針尖轉(zhuǎn)向會(huì)陰部，則可放射至前陰部，通過刺激盆叢神經(jīng)治療多種原因?qū)е碌哪蜾罅簦?2-13］、尿失禁［14］以及前列腺相關(guān)的泌尿生殖系統(tǒng)疾?。?5-16］；刺向小腹則擅治原發(fā)性痛經(jīng)［17-18］和多囊卵巢綜合征［19］等婦科疾患。

基于秩邊穴的特殊解剖位置，本研究通過秩邊透刺水道來刺激陰部神經(jīng)、盆叢神經(jīng)等，以激活下丘腦-垂體-睪丸軸的分泌作用。結(jié)果顯示4 組間FSH 含量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與高學(xué)勇等［20］研究結(jié)果類似，分析其可能與該生物軸復(fù)雜的雙向調(diào)節(jié)機(jī)制有關(guān)。在GnRH 的影響下，F(xiàn)SH 和LH同樣呈現(xiàn)出脈沖式分泌，加之FSH 比LH 的半衰期長，故而FSH 的脈沖式分泌特征不如LH 明顯［21］；同時(shí)GnRH 的脈沖頻率也會(huì)影響到LH 和FSH的分泌水平，GnRH 脈沖頻率較高時(shí)有利于促進(jìn)LH的分泌，而較低時(shí)則有利于促進(jìn)FSH 的分泌［22］；另外，睪丸支持細(xì)胞內(nèi)的FSH 受體在受到FSH 刺激后會(huì)分泌生成一種抑制素，而這種物質(zhì)具有選擇性抑制垂體分泌FSH 的功能［23］。

本研究結(jié)果提示兩種針刺干預(yù)手段對少弱精癥大鼠模型均有效果，均能降低大鼠血清中FSH、LH、T 含量，提高大鼠精子密度與活力，且秩邊透水道針法對精子密度與活力的療效更明顯。由于本實(shí)驗(yàn)的局限性，未能測得兩種針刺干預(yù)方法對激素分泌時(shí)間與效應(yīng)關(guān)系的影響，有待于進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)探究。