李培勇

[摘要] 目的 探究生殖支原體對(duì)男性精液參數(shù)的影響。 方法 選擇2018年4月至2020年4月在本院進(jìn)行不育癥治療的患者160例作為研究對(duì)象。全部患者均采集精液樣本，使用核酸擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)精液樣本中有無(wú)生殖支原體感染，同時(shí)利用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)分析全部精液樣本參數(shù)，通過Shorr染色技術(shù)觀察精子形態(tài)，并對(duì)精漿中γ-L-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶活性、果糖、α-葡糖苷酶以及鋅水平進(jìn)行檢測(cè)。觀察全部患者中生殖支原體陽(yáng)性感染例數(shù)及陰性例數(shù)，比較陽(yáng)性感染者與陰性者的一般資料;比較生殖支原體陽(yáng)性感染者與陰性者精漿指標(biāo)及精液樣本參數(shù)。 結(jié)果 160例患者中，生殖支原體檢測(cè)顯示陽(yáng)性感染者80例、陰性者80例，陽(yáng)性感染組與陰性組患者在年齡及不育時(shí)間方面比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;兩組患者γ-L-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、果糖、α-葡糖苷酶及鋅水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;陽(yáng)性感染組患者精液量、精子濃度、精子活力及形態(tài)正常精子水平均低于陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 生殖支原體感染可降低精液量、精子濃度、精子活力及形態(tài)正常精子水平，因此需在診斷后及時(shí)采取有效措施進(jìn)行治療。

[關(guān)鍵詞] 精液參數(shù);生殖支原體;不育癥;核酸擴(kuò)增技術(shù);精液量

[中圖分類號(hào)] R697? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2021）03-0104-04

The influence of Mycoplasma Genitalium on semen parameters

LI Peiyong

Department of Reproductive Andrology， the First Affiliated Hospital of Xiamen University， Xiamen? ?361000， China

[Abstract] Objective To explore the influence of Mycoplasma Genitalium on semen parameters in males. Methods A total of 160 patients receiving treatment for infertility in our hospital were selected as study samples， and the study duration was from April 2018 to April 2020. Semen samples were collected from all the patients， and were detected by nucleic acid amplification technology for the presence of Mycoplasma Genitalium infection， and were analyzed by computer system for their parameters. Spermatozoa morphology was observed by Shorr staining， and γ-L-glutamyl transpeptidase activity， fructose， α-glucosidase， and zinc levels in seminal plasma were detected. The number of positive mycoplasma genitalium infections and that of negative Mycoplasma Genitalium infections in all patients were observed and the general data of positive and negative infections were compared; seminal plasma indexes and semen parameters were compared between positive and negative patients with Mycoplasma Genitalium. Results Of the 160 patients， 80 were tested positive and 80 were tested negative， and there was no significant difference in age and infertility time between the positive infection group and the negative group（P>0.05）. There was no significant difference in γ-L-glutamyl transpeptidase， fructose， α-glucosidase and zinc between the two groups（P>0.05）; the semen volume， sperm concentration， sperm motility and level of morphologically normal sperm of patients in the positive group were lower than those in the negative group， with significant differences（P<0.05）. Conclusion Mycoplasma Gentiformis infection reduces the semen volume， sperm concentration， sperm motility and level of morphologically normal sperm. Therefore， effective treatment should be given in time after diagnosis.

[Key words] Semen parameters; Mycoplasma Genitalium; Infertility; Nucleic acid amplification technology; Volume of semen

不育癥指正常育齡期夫婦正常性生活1年或更長(zhǎng)時(shí)間，未采取避孕措施出現(xiàn)未生育的情況[1]。臨床有研究顯示，已婚夫婦出現(xiàn)不育癥者占15%[2]，并且男性不育癥發(fā)病率達(dá)到30%。隨著臨床對(duì)不育癥研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)生殖道感染在導(dǎo)致不育癥的原因中最為常見，近年來(lái)隨著性傳播疾病發(fā)病率的升高，生殖道感染性疾病發(fā)病率也逐漸升高，并且疾病嚴(yán)重程度也明顯增加，對(duì)男性生育能力產(chǎn)生嚴(yán)重影響。生殖支原體是全部支原體中基因組最小的一種，生殖支原體由于分離難度較大，因此無(wú)法進(jìn)行培養(yǎng)檢測(cè)。當(dāng)前，臨床有報(bào)道顯示[3]，男性感染生殖支原體后會(huì)導(dǎo)致精液質(zhì)量有顯著降低，并且還可發(fā)生不育癥，對(duì)男性生育功能產(chǎn)生不利影響，但目前臨床對(duì)這一說(shuō)法尚未形成統(tǒng)一結(jié)論。因此，本研究對(duì)本院治療的不育癥男性患者160例進(jìn)行精液質(zhì)量檢查，探討精液質(zhì)量與生殖支原體感染之間關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料及方法

1.1 一般資料

選擇2018年4月至2020年4月本院治療的不育癥患者160例作為研究對(duì)象，年齡24～45歲，平均（32.22±2.98）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)[4]：①正常性生活≥1年且未進(jìn)行任何避孕措施者;②患者及其家屬知情同意，在充分了解研究目的及研究方法后表示自愿參加研究。排除標(biāo)準(zhǔn)[5]：①患有全身性感染疾病者;②近期有外傷史者;③存在精索靜脈曲張、附睪結(jié)核及先天性性腺發(fā)育不良等疾病者;④有家族遺傳病史者;⑤存在嚴(yán)重認(rèn)知功能障礙，無(wú)法正常進(jìn)行言語(yǔ)交流者;⑥肝腎功能有明顯異常者;⑦不配合研究者;⑧女性因素導(dǎo)致不孕癥者。由于其他類型生殖道感染會(huì)對(duì)精子質(zhì)量產(chǎn)生一定影響，因此在進(jìn)行精子參數(shù)比較時(shí)將有沙眼衣原體、淋病奈瑟菌及解脲支原體感染的患者排除。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過。

1.2 方法

指導(dǎo)全部患者在檢查前3～7 d禁欲，檢查時(shí)使用新潔爾滅消毒劑棉球?qū)δ虻揽凇㈥幥o頭及雙手進(jìn)行消毒，之后再使用含有無(wú)菌生理鹽水的棉球?qū)ο静课辉俅尾潦茫ㄟ^手淫的方式采集精液，并放置在無(wú)菌容器盒中，精液采集后立即放置在37℃水浴箱中液化。精液液化后，使用移液器吸取100 μL精液至標(biāo)本保存管中，震蕩混勻，放置在-20℃環(huán)境中保存，進(jìn)行支原體檢測(cè)樣本采集;吸取2.0 mL精液進(jìn)行精子質(zhì)量檢測(cè);剩余精液樣本置于3000 r/min的離心機(jī)中進(jìn)行持續(xù)10 min的離心處理，并分離精漿，對(duì)精漿進(jìn)行生化檢測(cè)。對(duì)精液樣本進(jìn)行生殖支原體檢測(cè)時(shí)，使用生殖支原體PCR檢測(cè)試劑盒（上海仁度生物科技有限公司）、實(shí)時(shí)熒光恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)儀（濟(jì)南君意生物科技有限公司），全部操作均嚴(yán)格依據(jù)試劑盒使用說(shuō)明進(jìn)行。操作步驟包括，分別設(shè)定陽(yáng)性及陰性對(duì)照，選擇400 μL含有樣本保存液的精液樣本及100 μL核酸提取液，將其充分混合均勻后放置在60℃恒溫環(huán)境中反應(yīng)5 min，隨后放置在室溫環(huán)境下10 min，最后置于磁珠分離器上進(jìn)行5 min靜置處理，丟棄液體，分別添加2次洗滌液進(jìn)行洗滌，保留與磁珠結(jié)合的RNA，隨后添加40 μL核酸反應(yīng)液。將其中30 μL轉(zhuǎn)移至PCR反應(yīng)試管中，首先放置在60℃環(huán)境中持續(xù)反應(yīng)10 min，之后放置在42℃環(huán)境中持續(xù)反應(yīng)5 min，最后添加42℃預(yù)熱的SAT酶，在42℃環(huán)境中實(shí)時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增40 min;擴(kuò)增后出現(xiàn)的RNA拷貝和優(yōu)化的探針進(jìn)行特異性結(jié)合并出現(xiàn)熒光信號(hào)，利用檢測(cè)儀分析熒光信號(hào)。使用精漿生化檢測(cè)試劑盒（深圳市博銳德生物科技有限公司）進(jìn)行精漿檢測(cè)，其中γ-L-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶活性及α-葡糖苷酶通過速率法進(jìn)行檢測(cè)，鋅則通過1-（2-吡啶偶氮）2-萘酚法進(jìn)行檢測(cè)，將95%CI作為判斷正常參考范圍的標(biāo)準(zhǔn);果糖通過已糖激酶法進(jìn)行檢測(cè)，其參考范圍主要是通過對(duì)100例正常男性精漿樣本進(jìn)行檢測(cè)，觀察第5百分位數(shù)進(jìn)行確定。γ-L-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶該批次內(nèi)變異系數(shù)≤8%，批次間變異系數(shù)≤10%;果糖批次內(nèi)變異系數(shù)≤5%，批次間變異次數(shù)≤7%;α-葡糖苷酶批次內(nèi)變異系數(shù)≤7%，批次間變異系數(shù)≤8%;鋅批次內(nèi)變異系數(shù)≤7%，批次間變異系數(shù)≤8%。采用精子質(zhì)量分析儀（徐州市寶興醫(yī)療設(shè)備有限公司）對(duì)精子質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)。通過Shorr染色技術(shù)觀察精子形態(tài)，該項(xiàng)措施由實(shí)驗(yàn)室專業(yè)人員進(jìn)行人工操作。

1.3觀察指標(biāo)

觀察所有患者精液樣本中生殖支原體感染情況，并分析陽(yáng)性感染者與陰性者的一般資料，主要包含年齡及不育時(shí)間。比較生殖支原體陽(yáng)性感染者與陰性者精漿指標(biāo)及精液樣本參數(shù)，其中γ-L-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、果糖、α-葡糖苷酶及鋅屬于精漿指標(biāo)，精液量、精子濃度、精子活力及形態(tài)正常精子屬于精液樣本參數(shù)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

在160例患者中，有80例（50.00%）出現(xiàn)生殖支原體感染，有80例（50.00%）檢測(cè)結(jié)果呈陰性。陽(yáng)性感染組與陰性組患者在年齡及不育時(shí)間方面比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2 兩組精漿指標(biāo)及精液參數(shù)比較

兩組患者在γ-L-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、果糖、α-葡糖苷酶及鋅水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;陽(yáng)性感染組患者精液量、精子濃度、精子活力及形態(tài)正常精子水平均低于陰性組，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3討論

生殖支原體于1981年從非淋菌性尿道炎男性患者中被分離出來(lái)，但是受到分離培養(yǎng)困難及生殖支原體致病性有待證實(shí)等因素影響，臨床對(duì)此研究較少;直至1985年通過進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的DNA擴(kuò)增技術(shù)，使得臨床對(duì)生殖支原體的關(guān)注度大大提升[6]。生殖支原體是人類泌尿生殖道感染潛在的病原體，同時(shí)也是人類泌尿生殖道感染的重要原因之一。隨著臨床對(duì)生殖支原體研究的不斷深入，有研究顯示，其在導(dǎo)致男性不育癥方面可能與其從多個(gè)層面直接或間接對(duì)生殖器官造成損害有關(guān)，進(jìn)而阻礙精子發(fā)育及成熟、堵塞精子運(yùn)輸通道，進(jìn)一步使機(jī)體出現(xiàn)抗精子抗體、降低精子運(yùn)動(dòng)功能[7]。但也有研究結(jié)果顯示，生殖支原體導(dǎo)致男性不育癥可能是由于感染生殖支原體后，其可依附在精子表面，從而降低精子活性，最終導(dǎo)致不育癥[8]。鑒于此，臨床將探討精液質(zhì)量與生殖支原體感染之間的關(guān)聯(lián)性作為研究重點(diǎn)。

γ-L-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶在谷胱甘肽代謝過程中發(fā)揮重要作用，其可保護(hù)精子免遭氧化應(yīng)激反應(yīng)的損傷[9]。α-葡糖苷酶檢測(cè)是臨床男性常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，檢測(cè)其水平可反映附睪分泌能力[10]。本研究中，陽(yáng)性感染者與陰性者在γ-L-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、α-葡糖苷酶、果糖及鋅水平方面均無(wú)顯著差異，對(duì)于生殖支原體感染是否影響精漿生化指標(biāo)還需臨床進(jìn)一步研究。朱來(lái)晴等[11]的研究結(jié)果顯示，生殖支原體感染者的精液量為（3.20±1.30）mL，未感染者精液量為（3.57±1.36）mL，因此其認(rèn)為男性感染生殖支原體后會(huì)導(dǎo)致其精液量下降，進(jìn)而影響其生育功能。本研究中，陰性組患者精液量為（3.68±1.09）mL，顯著高于陽(yáng)性感染組的（3.11±1.01）mL;陽(yáng)性感染組精子濃度為（50.79±16.92）×106/mL，顯著低于陰性組的（56.88±17.01）×106/mL;陰性組患者精子活力為（45.98±13.22）%，顯著高于陽(yáng)性感染組的（41.67±12.88）%;陰性組患者形態(tài)正常精子水平為（5.82±1.92）%，顯著高于陽(yáng)性感染者的（5.25±1.55）%（P<0.05）。分析結(jié)果可知，正常精液屬于黏稠狀液體混合物，主要由精漿及精子構(gòu)成，其中精漿占比超過90%。在精漿中含有豐富的蛋白質(zhì)、果糖、多肽、水、無(wú)機(jī)鹽、前列腺素、葡萄糖及有機(jī)小分子物質(zhì)，可為精子提供營(yíng)養(yǎng)和能源[12]。但當(dāng)機(jī)體感染生殖支原體后，支原體會(huì)吸附在精子的頭、體及尾各段，直接影響精子活力，精子吸附大量支原體后，則會(huì)喪失運(yùn)動(dòng)能力，導(dǎo)致大量精子黏連，影響精子質(zhì)量;由于炎癥影響會(huì)導(dǎo)致精液量下降，無(wú)法為精子發(fā)育提供充足營(yíng)養(yǎng)，導(dǎo)致精子活力下降，對(duì)男性生育功能產(chǎn)生不利影響[13-15]。由于RNA在環(huán)境中極不穩(wěn)定，并且在支原體死后可快速降解，通過對(duì)RNA保存液進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)，可一定程度上避免RNA降解，同時(shí)經(jīng)該技術(shù)檢測(cè)到的生殖支原體水平則代表處于存活狀態(tài)的生殖支原體，可協(xié)助醫(yī)師準(zhǔn)確掌握患者機(jī)體內(nèi)生殖支原體水平，對(duì)于判斷臨床用藥效果具有積極意義[16-17]。

綜上所述，生殖支原體感染會(huì)導(dǎo)致精液量顯著下降，對(duì)精液質(zhì)量產(chǎn)生不利影響。但本研究存在樣本量較少、研究時(shí)間較短等問題，因此還需后續(xù)擴(kuò)大樣本量及延長(zhǎng)研究時(shí)間來(lái)做進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2020-07-14）