趙曉麗 李培雯 劉婉玉 宗兆睿 夏 天 付 于

(天津中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院生殖中心，天津 300193)

缺血性卒中是臨床上常見的心腦血管疾病，且近年來發(fā)病人群趨于年輕化[1-2]。缺血性卒中后盡快恢復再灌注能有效減少缺血造成的腦損傷，但再灌注也會產生鈣超載、炎性反應激活、線粒體損傷等再灌注損傷，導致神經細胞凋亡、壞死，造成不可逆損傷[3-4]。相關研究表明，卒中發(fā)生后積極有效的干預處理可以有效減輕卒中缺血再灌注造成的腦損傷[5]。合真中華藥香是天津市非物質文化遺產，秉承著“藥借香氣，香借藥性”的中醫(yī)內病外治理念，在防病、治病方面優(yōu)勢明顯。本研究將合真醒神香應用于卒中后再灌注損傷的防治，通過觀察合真醒神香穴位貼敷和香熏預處理對卒中缺血再灌注損傷模型大鼠的保護作用，探討其作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 雄性SD大鼠72只，8周齡，體質量260～280 g，均購自北京維通利華實驗動物公司[許可證號：SCXK(京)2016-0006]，常規(guī)適應性飼養(yǎng)7 d后進行實驗。

1.2 實驗藥物 合真醒神香主要成分包括沉香30 g、蘇合香5 g、安息香15 g、麝香0.3 g、冰片3 g、楠木粉黏合劑，由合真藥香文化藝術館(天津)有限公司提供。

1.3 實驗試劑及儀器

1.3.1 主要試劑 氯化三苯四氮唑(TTC)染色液、尼氏染色液(焦油紫法)、通用P物質(SP)檢測試劑盒(北京索萊寶科技有限公司)；大鼠白細胞介素1β(IL-1β)、干擾素γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯免疫吸附(ELISA)法檢測試劑盒(達科為生物技術股份有限公司)；抗天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶3(anti-Caspase-3)抗體(北京博奧森生物技術有限公司)；抗B淋巴細胞瘤2相關X蛋白(anti-Bax)抗體(英國Abcam公司)；抗B淋巴細胞瘤2(p65)[anti-Bcl-2(p65)]抗體(美國Bioworld公司)；蘇木素-伊紅(HE)染色試劑盒[生工生物工程(上海)股份有限公司]；原位末端標記法(TUNEL)細胞凋亡檢測試劑盒(上海碧云天生物技術有限公司)。

1.3.2 主要儀器 多功能酶標儀(美國Thermo公司)；熒光顯微鏡、冷凍切片機(德國Leica公司)；光學顯微鏡(日本Olympus公司)；臺式低速離心機(湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司)；組織研磨機(南京先歐儀器制造有限公司)。

1.4 實驗方法

1.4.1 實驗分組及給藥 將72只大鼠隨機分為假手術組、模型組、穴位貼敷組、穴位貼敷對照組、香熏組、香熏對照組，每組12只。假手術組和模型組大鼠均正常飼養(yǎng)14 d，不予任何藥物預處理。穴位貼敷組予合真醒神香穴位貼敷預處理14 d，貼敷前對大鼠腕部進行脫毛處理，將合真醒神香粉碎成細粉，根據成人常規(guī)劑量以體表面積換算成等效劑量0.75 g，再以生姜汁調和成糊狀，貼敷于大鼠“內關”及“外關”，并以膠布固定，每日更換2次。穴位貼敷對照組予楠木粉黏合劑貼敷預處理14 d，取穴和給藥方式同穴位貼敷組。香熏組予合真醒神香香熏預處理14 d，即將大鼠籠放置在15 m2的房間，在籠旁點燃合真醒神香，保持鼠籠空氣流通，緊閉門窗但不密封，以保持空氣中的熏香濃度穩(wěn)定，每次香熏15 min，每日1次。香熏對照組予楠木粉黏合劑香熏預處理14 d，香熏方法同香熏組。

1.4.2 建立模型 各組大鼠預處理14 d后，除假手術組外，其余各組參照文獻[9，10]中方法建立大腦中動脈缺血再灌注損傷模型。首先以10%水合氯醛按0.34 mL/100 g腹腔注射麻醉大鼠，然后仰臥固定于手術臺上，常規(guī)皮膚消毒，頸正中剪長約3 cm切口，鈍性分離右側胸鎖乳突肌與胸骨鎖骨肌，分離右側頸總動脈、頸外動脈、頸內動脈，避免損傷迷走神經。結扎頸內動脈顱外段的唯一分支翼腭動脈，再結扎頸總動脈近心端，于頸總動脈分叉處結扎頸外動脈，微動脈夾夾閉頸內動脈。在右側頸總動脈接近分叉處剪一小口插入線栓并用手術線輕度結扎，松開微動脈夾，輕推線栓沿頸總動脈入頸內動脈至有阻力時止，系緊結扎線，線栓尾端露于體外。此時線栓頭端入大腦前動脈，其體部阻擋住大腦中動脈入口，形成大腦中動脈供血中斷，閉塞2 h后拔出線栓，形成再灌注。假手術組僅剝離頸總動脈后立即縫合創(chuàng)口。

1.5 觀察指標及方法

1.5.1 神經功能缺損評分 再灌注24 h后參照文獻[11]中評分方法對各組大鼠神經功能缺損評分進行比較。0分：無神經功能損傷；1分：左側(癱瘓側)前爪不能完全伸展；2分：左側前肢不能伸展；3分：行走時，大鼠向左側轉大圈；4分：行走時，大鼠向左側轉小圈；5分：行走時，大鼠身體向左側傾倒。

1.5.2 TTC染色觀察腦梗死體積 神經功能檢測完畢后，處死各組大鼠，迅速取腦組織，-20 ℃冷凍保存。切取冠狀位腦片，厚度為2 mm，將腦片放入2%的TTC溶液中，37 ℃避光孵育30 min，每5 min輕微晃動容器，使充分染色。染色結束后，用4%多聚甲醛溶液固定腦片，拍照，每組3個樣品，使用Image J 軟件計算梗死部位體積占腦總體積的百分比[12-14]。

1.5.3 TUNEL法檢測梗死腦組織細胞凋亡率 梗死腦組織冰凍切片，用4%多聚甲醛溶液固定30 min，磷酸鹽緩沖溶液(PBS)洗滌2次，每次10 min，使用0.5%聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)室溫通透5 min。在組織上滴加TUNEL反應液，37 ℃避光孵育60 min。PBS洗滌3次，4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)避光復染5 min，再用PBS洗滌3次，抗熒光猝滅劑封片后，于熒光顯微鏡下觀察。每組3個樣品，采用Image J軟件進行細胞計數，計算梗死腦組織細胞凋亡率。

1.5.4 HE染色觀察梗死腦組織神經細胞形態(tài) 梗死腦組織冰凍切片，厚度8 μm。于蒸餾水中漂洗3 min，蘇木素染色10 min，流動水沖洗5 min，0.1%鹽酸-乙醇分色20 s，流動水沖洗1 min，PBS藍化，經75%、85%、95%乙醇處理各10 s，伊紅染色2 min，95%乙醇、無水乙醇脫水，二甲苯透明，封片后于光學顯微鏡下觀察梗死腦組織神經細胞形態(tài)。

1.5.5 尼氏染色觀察海馬組織尼氏小體形態(tài) 海馬區(qū)腦組織冰凍切片，蒸餾水漂洗1 min，梯度乙醇復水，切片置于尼氏染色液，56 ℃溫箱浸染1 h，蒸餾水漂洗1 min，將切片置于分化液分化2 min，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，封片后于光學顯微鏡下觀察海馬區(qū)尼氏小體形態(tài)。

1.5.6 ELISA法檢測海馬區(qū)和皮質部細胞因子含量 取海馬區(qū)和皮質部，稱質量，按1∶9加入預冷的0.9%氯化鈉注射液，勻漿，4000 r/min，離心10 min，取上清液。然后按照ELISA試劑盒操作說明書，使用多功能酶標儀測定560 nm吸光度，并根據標準品濃度繪制標準曲線，每組3個樣品，分別計算海馬區(qū)和皮質部IL-1β、IFN-γ、TNF-α的濃度。

1.5.7 免疫組化法檢測梗死腦組織凋亡相關蛋白表達 梗死腦組織冰凍切片，用甲醇固定10 min，3%雙氧水(H2O2)反應10 min，PBS洗滌3次，每次5 min，0.5% Triton X-100室溫通透10 min，羊血清封閉30 min，一抗(1∶50)4 ℃孵育過夜，相應二抗室溫孵育30 min，鏈酶親和素-過氧化物酶反應液室溫孵育30 min，二氨基聯苯胺(DAB)顯色30 min，蘇木精輕度復染5 min，1%鹽酸酒精分化30 s，蒸餾水沖洗藍化，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，于光學顯微鏡下觀察拍照，每組3個樣品，使用Image J軟件分析凋亡相關蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2染色陽性面積，計算相對表達情況及Bax/Bcl-2比值。

2 結果

2.1 各組大鼠神經功能缺損評分比較 見表1。

由表1可見，與假手術組比較，模型組大鼠神經功能缺損評分升高(P<0.05)。與模型組比較，穴位貼敷組和香熏組大鼠神經功能缺損評分均降低(P<0.05)，穴位貼敷對照組和香熏對照組與模型組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。穴位貼敷組和香熏組分別與穴位貼敷對照組和香熏對照組比較，大鼠神經功能缺損評分均降低(P<0.05)。穴位貼敷組與香熏組大鼠神經功能缺損評分組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表1 各組大鼠神經功能缺損評分比較 分，

2.2 各組大鼠腦梗死體積百分比比較 見圖1、表2。

假手術組 模型組 穴位貼敷組 穴位貼敷對照組 香熏組 香熏對照組

表2 各組大鼠腦梗死體積百分比比較

由表2可見，與假手術組比較，模型組大鼠腦梗死體積百分比增加(P<0.05)。與模型組比較，穴位貼敷組大鼠腦梗死體積百分比減小(P<0.05)，穴位貼敷對照組、香熏組、香熏對照組與模型組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與穴位貼敷對照組比較，穴位貼敷組大鼠腦梗死體積小于穴位貼敷對照組(P<0.05)，香熏組與香熏對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。穴位貼敷組大鼠腦梗死體積百分比小于香熏組(P<0.05)。

2.3 各組大鼠梗死腦組織細胞凋亡率比較 見圖2、表3。

圖2 各組大鼠梗死腦組織細胞凋亡情況[DNA片段用FITC標記(綠色熒光)，細胞核用DAPI標記(藍色熒光)，×40]

表3 各組大鼠梗死腦組織細胞凋亡率比較

由表3可見，與假手術組比較，模型組大鼠梗死腦組織細胞凋亡率升高(P<0.05)。與模型組比較，穴位貼敷組和香熏組大鼠梗死腦組織細胞凋亡率均降低(P<0.05)，穴位貼敷對照組和香熏對照組與模型組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。穴位貼敷組和香熏組分別與穴位貼敷對照組和香熏對照組比較，大鼠梗死腦組織細胞凋亡率均降低(P<0.05)。穴位貼敷組和香熏組大鼠梗死腦組織細胞凋亡率組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.4 各組大鼠梗死腦組織海馬區(qū)和皮質部IL-1β、IFN-γ、TNF-α水平比較 見表4。

表4 各組大鼠梗死腦組織海馬區(qū)和皮質部IL-1β、IFN-γ、TNF-α水平比較

由表4可見，與假手術組比較，模型組大鼠海馬區(qū)和皮質部IL-1β、IFN-γ、TNF-α水平均升高(P<0.05)。與模型組比較，穴位貼敷組大鼠海馬區(qū)和皮質部IL-1β、IFN-γ、TNF-α水平均下降(P<0.05)，香熏組大鼠僅海馬區(qū)IL-1β、IFN-γ、TNF-α水平下降(P<0.05)，皮質部各指標雖也有下降趨勢，但比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，穴位貼敷對照組和香熏對照組海馬區(qū)和皮質部各指標與模型組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與穴位貼敷對照組比較，穴位貼敷組大鼠海馬區(qū)和皮質IL-1β、IFN-γ、TNF-α水平均低于穴位貼敷對照組(P<0.05)，與香熏對照組比較，香熏組僅海馬區(qū)IL-1β、IFN-γ、TNF-α水平和皮質部IFN-γ水平低于香熏對照組(P<0.05)。穴位貼敷組大鼠皮質部IL-1β、IFN-γ、TNF-α水平均低于香熏組(P<0.05)。

2.5 各組大鼠梗死腦組織神經細胞形態(tài)和海馬區(qū)尼氏小體形態(tài)觀察 假手術組腦組織形態(tài)清晰，神經細胞排列密集，神經元胞漿豐富，膠質細胞結構完整，排列致密，細胞周圍間隙無水腫，海馬區(qū)尼氏小體排列緊密，數量繁多。模型組梗死腦組織可見大片神經細胞消失，細胞稀疏，排列紊亂，間質疏松，神經元、膠質細胞周圍間隙明顯增寬，神經纖維疏松，海馬區(qū)尼氏小體明顯減少，排列稀疏，形態(tài)不規(guī)則。穴位貼敷組和香熏組梗死腦組織神經細胞數量較模型組明顯增多，細胞排列較緊密，神經元、膠質細胞周圍間隙縮小，海馬區(qū)尼氏小體較模型組形態(tài)規(guī)則，數量增多。穴位貼敷對照組和香熏對照組梗死腦組織神經細胞形態(tài)和海馬區(qū)尼氏小體形態(tài)與模型組類似。見圖3、4。

圖3 各組大鼠梗死腦組織腦細胞形態(tài)(HE染色，×20)

圖4 各組大鼠梗死腦組織海馬區(qū)尼氏小體形態(tài)(尼氏染色，×40)

2.6 各組大鼠梗死腦組織Caspase-3、Bax、Bcl-2相對表達情況及Bax/Bcl-2比較 見圖5、表5。

Caspase-3

表5 各組大鼠梗死腦組織Caspase-3、Bax、Bcl-2相對表達情況及Bax/Bcl-2比較

由表5可見，與假手術組比較，模型組大鼠梗死腦組織Caspase-3、Bax、Bcl-2、Bax/Bcl-2水平均增加(P<0.05)。與模型組比較，穴位貼敷組和香熏組大鼠梗死腦組織Caspase-3、Bax、Bax/Bcl-2水平均降低(P<0.05)，穴位貼敷組Bcl-2水平升高(P<0.05)，穴位貼敷對照組和香熏對照組各指標與模型組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與穴位貼敷對照組比較，穴位貼敷組大鼠梗死腦組織Caspase-3、Bax、Bax/Bcl-2水平均低于穴位貼敷對照組(P<0.05)，Bcl-2水平高于穴位貼敷對照組(P<0.05)，與香熏對照組比較，香熏組大鼠梗死腦組織Caspase-3、Bax、Bax/Bcl-2水平均低于香熏對照組(P<0.05)。穴位貼敷組大鼠梗死腦組織Bcl-2水平高于香熏組(P<0.05)，Bax/Bcl-2水平低于香熏組(P<0.05)。

3 討論

缺血性卒中又稱為腦梗死，是由于各種原因引起腦組織血液供應障礙，從而導致腦組織缺血、缺氧性病變壞死，并出現一系列的神經功能缺損癥狀，屬于臨床上的急癥、重癥，具有高致殘率、高致死率的特點[15]。早期的靜脈溶栓治療是治療急性缺血性卒中的重要方法，通過靜脈輸注溶栓藥物治療，溶解堵塞血管的血栓，從而最大限度地減輕因缺血、缺氧造成的腦細胞損傷，對患者神經缺損功能的恢復具有重要臨床意義[16]。但大量臨床研究發(fā)現，部分患者采用靜脈溶栓治療在快速恢復梗死部位再灌注的同時，也帶來更為嚴重的損傷，并將這種現象稱為缺血再灌注損傷，是伴隨缺血性卒中的治療而產生，一般認為其損傷機制包括氧化應激、線粒體功能障礙、炎性反應、血腦屏障破壞、細胞凋亡等[17]。

神經細胞凋亡增加是引起缺血再灌注損傷的重要原因，導致缺血區(qū)域神經細胞死亡，細胞數量減少甚至消失，特別是海馬區(qū)細胞損傷，尼氏小體的數量明顯減少。Bax基因是人體最主要的凋亡基因，當發(fā)生腦缺血時可導致Bax轉移至線粒體外膜，使線粒體外膜通透性增加，促進細胞色素C(Cyt-C)和凋亡誘導因子(AIF)釋放，激活Caspase-3介導的內源性細胞凋亡途徑[18]。研究顯示，缺血再灌注損傷可進一步導致促凋亡蛋白Caspase-3和Bax表達增加，抗凋亡蛋白Bcl-2表達降低，導致細胞凋亡明顯增加[19]。Bcl-2能夠通過穩(wěn)定線粒體膜電位，抑制Cyt-C的釋放，發(fā)揮抑制凋亡作用，Bcl-2還可與Bax形成二聚體，當Bax相對量高于Bcl-2時，Bcl-2與Bax形成同二聚體，促進細胞凋亡，當Bcl-2相對量高于Bax時，Bcl-2與Bax形成異二聚體，抑制細胞凋亡[20]。因此，Bax與Bcl-2的平衡，是細胞凋亡途徑中的重要調節(jié)因子，決定了細胞的凋亡與存活。Zhang Y等[21]使用糖氧剝奪/復氧(OGD/R)方法模擬離體缺血再灌注，結果顯示降低Bax/Bcl-2能促進細胞存活。Leung S W等[22]研究發(fā)現，大黃素可通過細胞外信號調節(jié)激酶(ERK)1/2通路增加Bcl-2表達，降低Caspase-3表達，發(fā)揮抑制線粒體凋亡作用，降低缺血再灌注導致的氧化應激損傷，具有神經保護作用。本實驗研究結果顯示，與假手術組比較，模型組大鼠神經功能缺損評分升高(P<0.05)，腦組織出現大面積梗死(P<0.05)，細胞凋亡率增加(P<0.05)，梗死腦組織中Caspase-3、Bax、Bcl-2、Bax/Bcl-2水平均增加(P<0.05)，鏡下觀察顯示梗死腦組織神經細胞數量明顯減少，排列紊亂，海馬區(qū)尼氏小體明顯減少，排列稀疏。

神經炎性反應是介導缺血再灌注損傷的另一個重要機制。IL-1β是一種關鍵的促炎細胞因子，參與多種自身免疫性炎性反應和多種細胞活動，IL-1β的局部激活是介導促炎反應的中心環(huán)節(jié)，IL-1β介導缺血后腦水腫等病理損傷，抑制IL-1β能減少中性粒細胞浸潤和腦水腫[23]。TNF-α是一種多向性的促炎細胞因子，主要由活躍的巨噬細胞和單核細胞分泌，TNF-α表達的增加則可產生損傷性生物學效應[24]。IFN-γ是主要由T淋巴細胞和自然殺傷(NK)細胞分泌的多功能細胞因子，可介導黏附分子表達，促進煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶的產生，活化小膠質細胞、巨噬細胞產生IL-1β、TNF-α等，加重神經性炎性反應，并產生活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)等造成氧化應激損傷，ROS通過活化絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路亦可促進炎癥因子釋放，并誘導線粒體凋亡途徑，導致細胞凋亡[25-26]。研究顯示，抑制炎癥因子釋放或給予抗炎治療能減少小膠質細胞的激活，減輕神經炎癥，減少腦水腫，具有神經保護作用[27-28]。本實驗研究結果顯示，與假手術組比較，模型組大鼠海馬區(qū)和皮質部的IL-1β、IFN-γ、TNF-α水平均增加(P<0.05)，說明缺血再灌注損傷導致梗死腦組織炎性反應加劇。

缺血性卒中屬中醫(yī)學中風的范疇，元氣虛衰，風、火、痰、瘀損傷腦絡，氣血瘀阻，導致竅閉神匿，神不導氣是其發(fā)病的主要病因病機，故治療應以醒腦開竅、活血通絡為主。中醫(yī)自古就有“芳香避穢”的說法，是指芳香氣味的中藥多具有祛瘟除穢、避疫防病、醒腦開竅、扶正祛邪的功效，是中醫(yī)防病治病的重要方法[29]。合真醒神香是以芳香開竅藥為主制成，主要成分包括沉香、蘇合香、安息香、麝香、冰片。方中沉香溫腎通心，沁人心脾；蘇合香開竅辟穢，開郁豁痰；安息香開竅清神，行氣活血；麝香開竅醒神，活血通經；冰片開竅醒神，清熱散毒。研究表明，芳香開竅中藥可通過抗氧化損傷、抑制炎癥因子表達、減少神經細胞凋亡等作用保護卒中后腦組織損傷[30]；沉香對氨基酸類神經遞質的分泌具有調節(jié)作用，從而起到鎮(zhèn)靜安神的功效[31]；蘇合香可明顯改善缺血再灌注損傷大鼠的神經行為學評分，通過影響凝血功能增加正常及缺血狀態(tài)下血腦屏障通透性發(fā)揮腦保護作用[32]，蘇合香揮發(fā)油還可通過抑制神經細胞Toll樣受體9(TLR9)的表達，降低Caspase-3表達量，抑制細胞凋亡，促進神經細胞存活[33]；安息香可通過抑制TNF-α等炎癥因子的釋放，從而減少內皮細胞的損傷[34]；麝香可能通過抑制實驗性腦缺血模型大鼠缺血區(qū)小膠質細胞增生介導的炎性反應，減輕腦水腫，促進神經功能恢復[35]；冰片、麝香等芳香開竅藥能顯著降低缺血再灌注損傷大鼠的血管內皮生長因子(VEGF)含量，維持血管內皮細胞、星形膠質細胞的正常形態(tài)，發(fā)揮血腦屏障保護作用[36]，冰片還可抑制缺血再灌注損傷神經細胞內ROS、NO的產生，抑制核轉錄因子κB(NF-κB)誘導的炎性反應，逆轉神經元損傷[37]。穴位貼敷和香熏療法都屬中藥外治范疇，清·吳尚先在《理瀹駢文》中有言“外治之理，即內治之理，外治之藥，即內治之藥，所異者法耳”，充分概括和肯定了外治的治療作用。穴位貼敷是通過透皮吸收，香熏療法是通過呼吸道黏膜吸收，兩者略有不同，但藥物有效成分均可“切于皮膚，徹于肉理，攝于吸氣，融于滲液”(清·吳尚先《理瀹駢文》)，從而通經走絡，直達臟腑。本實驗研究結果顯示，與模型組比較，穴位貼敷組大鼠神經功能缺損評分降低(P<0.05)，腦梗死體積減小(P<0.05)，梗死腦組織細胞凋亡率降低(P<0.05)，海馬區(qū)和皮質部IL-1β、IFN-γ、TNF-α水平均下降(P<0.05)，梗死腦組織Caspase-3、Bax、Bax/Bcl-2水平均降低(P<0.05)，Bcl-2水平升高(P<0.05)，鏡下觀察顯示梗死腦組織神經細胞形態(tài)和海馬區(qū)尼氏小體形態(tài)均有改善；與模型組比較，香熏組大鼠神經功能缺損評分降低(P<0.05)，梗死腦組織細胞凋亡率降低(P<0.05)，海馬區(qū)IL-1β、IFN-γ、TNF-α水平均下降(P<0.05)，梗死腦組織Caspase-3、Bax、Bax/Bcl-2水平均降低(P<0.05)，鏡下觀察顯示梗死腦組織神經細胞形態(tài)和海馬區(qū)尼氏小體形態(tài)均有改善；穴位貼敷對照組和香熏對照組各指標與模型組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；2個治療組組間比較，穴位貼敷組大鼠腦梗死體積小于香熏組(P<0.05)，皮質部IL-1β、IFN-γ、TNF-α水平均低于香熏組(P<0.05)，梗死腦組織Bcl-2水平高于香熏組(P<0.05)，Bax/Bcl-2水平低于香熏組(P<0.05)。

綜上所述，合真醒神香穴位貼敷和香熏預處理對大鼠卒中缺血再灌注損傷具有保護作用，可明顯減輕神經功能缺損，減小腦梗死體積，減少細胞凋亡，其作用機制可能與降低海馬區(qū)和皮質部IL-1β、IFN-γ、TNF-α水平，抑制炎性反應，抑制缺血部位Caspase-3和Bax的表達，促進Bcl-2的表達，降低Bax/Bcl-2水平，發(fā)揮抗細胞凋亡作用有關，其中穴位貼敷干預的效果較香熏干預作用更為廣泛，效果更佳，對合真醒神香的臨床應用具有一定的指導作用。