吳雪敏 林海麗 林曉 陳瑾

[摘要] 目的 分析抑制素B（INHB）、Makorin環(huán)指蛋白3（MKRN3）、成纖維生長因子受體2（FGFR2）對(duì)女童中樞性性早熟的預(yù)測價(jià)值。 方法 選取2018年1月至2021年1月期間于我院就診中樞性性早熟女童100例作為中樞性性早熟組、健康體檢的健康女童80名作為健康組。測定血清INHB水平、MKRN3、FGFR2相對(duì)表達(dá)量，比較三者在健康組、中樞性性早熟組中的表達(dá)及與疾病類型的關(guān)系，分析三者對(duì)此病的預(yù)測價(jià)值。結(jié)果 與健康組比較，中樞性性早熟組INHB水平升高，MKRN3、FGFR2相對(duì)表達(dá)量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。進(jìn)展型中樞性性早熟INHB水平高于緩慢進(jìn)展型，MKRN3、FGFR2相對(duì)表達(dá)量低于緩慢進(jìn)展型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。Pearson相關(guān)性分析顯示，INHB與MKRN3呈負(fù)相關(guān)（r=-0.420，P<0.001）;INHB與FGFR2呈負(fù)相關(guān)（r=-0.218，P=0.029）;MKRN3與FGFR2呈正相關(guān)（r=0.586，P<0.001）。與INHB、MKRN3、FGFR2單項(xiàng)預(yù)測比較，三項(xiàng)聯(lián)合對(duì)女童中樞性性早熟的預(yù)測價(jià)值較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 中樞性性早熟女童血中INHB升高，MKRN3、FGFR2降低，且與疾病類型相關(guān)，三者聯(lián)合對(duì)此病的預(yù)測價(jià)值較高。

[關(guān)鍵詞] 抑制素B;Makorin環(huán)指蛋白3;成纖維生長因子受體2;女童中樞性性早熟

[中圖分類號(hào)] R729? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2021）33-0023-04

[Abstract] Objective To analyze the predictive value of inhibin B （INHB）， makorin ring finger protein 3 （MKRN3）， and fibroblast growth factor receptor 2 （FGFR2） on central precocious puberty （CPP） of girls. Methods A total of 100 girls with CPP attending our hospital from January 2018 to January 2021 were selected as the CPP group and 80 healthy girls with health checkups as the healthy group. The relative expressions of serum INHB， MKRN3， and FGFR2 were measured， and the expressions of the three were compared between the healthy group and the CPP group. The correlation between the expressions of the three and the type of disease was analyzed， and the predictive value of the three for this disease was analyzed. Results Compared with the healthy group， the INHB level was increased and the relative expressions of MKRN3 and FGFR2 were decreased in the CPP group， with statistically significant differences（P<0.001）. The INHB level in progressive CPP was higher than that in slowly progressive CPP， and the relative expressions of MKRN3 and FGFR2 in progressive CPP were lower than those in slowly progressive CPP， with statistically significant differences（P<0.001）. Pearson correlation analysis showed that there was a negative correlation between INHB and MKRN3 （r=-0.420， P<0.001）， and between INHB and FGFR2 （r=-0.218， P=0.029）， and there was a positive correlation between MKRN3 and FGFR2（r=0.586， P<0.001）. Compared with INHB， MKRN3， and FGFR2 alone， the combination of the three had a higher predictive value for CPP of girls， with statistically significant difference（P<0.05）. Conclusion The increase of INHB level and the decrease in relative expressions of MKRN3 and FGFR2 in the blood of girls with CPP are correlated with the type of disease， and the combination of the three can achieve a higher predictive value for this disease.

[Key words] Inhibin B; Makorin ring finger protein 3; Fibroblast growth factor receptor 2;Central precocious puberty of girls

中樞性性早熟屬小兒內(nèi)分泌疾病，女童發(fā)病率明顯高于男童，研究認(rèn)為，此病的發(fā)生可影響著患兒的正常發(fā)育[1-2]。因此早期的診治對(duì)此病的治療和預(yù)后具有重要的意義，目前臨床上對(duì)于此病的預(yù)測較為困難，且相關(guān)報(bào)道較少，因此尋找特異性預(yù)測此病的指標(biāo)具有重要的意義。抑制素B（Inhibin B，INHB）屬于卵巢的直接產(chǎn)物，其在圍青春期中的水平變化可反映卵泡活性，可用于女性青春期進(jìn)展的評(píng)估[3]。研究顯示[4]，下丘腦-垂體-性腺軸活化可促進(jìn)性早熟的發(fā)生，而此軸活化受到多種基因的調(diào)控，其中以Makorin環(huán)指蛋白3（Makorin ring finger protein 3，MKRN3）研究最為廣泛，研究認(rèn)為此基因與性早熟相關(guān)。成纖維生長因子受體2（Fibroblast growth factor receptor 2，F(xiàn)GFR2）與骨骼發(fā)育相關(guān)，而骨骼發(fā)育異常為性早熟的表現(xiàn)之一，推測其可能與性早熟有關(guān)[5]。鑒于上述研究背景，在本研究中分析INHB、MKRN3、FGFR2在女童中樞性性早熟中的表達(dá)情況，并研究三者對(duì)此病的預(yù)測價(jià)值，以早期預(yù)測此病，促進(jìn)患兒正常發(fā)育，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

于2018年1月至2021年1月期間選取符合納入、排除標(biāo)準(zhǔn)的中樞性性早熟女童100例作為中樞性性早熟組、健康體檢的健康女童80名作為健康組。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究所有研究對(duì)象家屬對(duì)相關(guān)事項(xiàng)均知情同意，且獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①中樞性性早熟組均符合《女性性早熟的診治共識(shí)》[6]中對(duì)疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，在8歲前出現(xiàn)第二性征或10歲前出現(xiàn)月經(jīng)初潮，線性生長加速，骨齡≥實(shí)際1歲的骨齡，經(jīng)影像學(xué)檢查顯示卵巢、子宮形態(tài)變化，卵巢容積≥1 mL，可見有多個(gè)卵泡直徑>4 mm者;②促性腺激素釋放激素刺激實(shí)驗(yàn)顯示黃體生成素反應(yīng)增強(qiáng)，峰值≥5 IU/L者;③健康組無性早熟特征，卵巢、子宮形態(tài)正常，促性腺激素釋放激素刺激實(shí)驗(yàn)顯示黃體生成素<0.1 IU/L者;④兩組均自愿參與本研究。中樞性性早熟組排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他因素所致的性早熟者;②非外周性性早熟者;③合并其他內(nèi)分泌疾病者;④合并重要臟器功能不全者;⑤精神障礙者;⑥溝通障礙者。健康組排除標(biāo)準(zhǔn)：①有內(nèi)分泌遺傳代謝性疾病、腎上腺素、垂體等器質(zhì)性疾病史者;②精神障礙者;③溝通障礙者。

1.2 方法

INHB、MKRN3、FGFR2檢測方法：所有研究對(duì)象入組次日清晨抽取3 mL空腹靜脈血，以離心半徑5 cm、轉(zhuǎn)速3000 r/min離心處理10 min，分離上層血清，-80℃保存待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA）對(duì)所有研究對(duì)象血清INHB水平進(jìn)行測定。

所有研究對(duì)象入組次日清晨抽取3 mL空腹靜脈血，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法（RT-PCR）測定MKRN3、FGFR2相對(duì)表達(dá)量，加入Trizol提取血清總RNA，將RNA反轉(zhuǎn)錄后行PCR法測量ABCC4的相對(duì)表達(dá)量。采用Veriti7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀行PCR反應(yīng)，反應(yīng)體系：0.4 μL上下游引物、1 μL cDNA模板、10 μL SYB Green，加蒸餾水至20 μL。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性30 s、95℃ 5 s、60℃ 31 s，共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。采用2-△△Ct方法計(jì)算出需要檢測的MKRN3、FGFR2相對(duì)表達(dá)量，每組數(shù)據(jù)各測3次，取平均值。MKRN3上游引物序列：5-GTGGGACTTGCTTCATTAT-3，下游引物序列：5-CATTTACTCTTGAGGGTCTTC-3;FGFR2上游引物序列：5-ACAAATGGCGACTTCC-3，下游引物序列：5-TGGGCTTGTCCATCCTGT-3;內(nèi)參β-actin引物序列：上游：5-CTGGCACCACACCTTCTA-CAATGAGC-3，下游：5-GAGGATCTTCATGAGGT-AGTCAGT-3。

1.3 觀察指標(biāo)

①分析INHB、MKRN3、FGFR2在兩組研究對(duì)象中的表達(dá)差異;②分析INHB、MKRN3、FGFR2在不同中樞性性早熟組疾病類型中的表達(dá)差異;③分析INHB、MKRN3、FGFR2之間相關(guān)性;④ROC曲線分析INHB、MKRN3、FGFR2對(duì)女童中樞性性早熟的預(yù)測價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理。應(yīng)用Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)分布，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）描述，levene法進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，三組間比較采用方差齊性檢驗(yàn)，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的運(yùn)用中位數(shù)、四分位間距[M（Q1，Q3）]，組間采用Wilcoxon比較。計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)和百分比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Pearson相關(guān)性分析INHB、MKRN3、FGFR2之間相關(guān)性。ROC曲線分析INHB、MKRN3、FGFR2對(duì)女童中樞性性早熟的預(yù)測價(jià)值。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

兩組平均年齡、身高、體重、BMI、卵巢體積、有無家族早熟史等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與健康組比較，中樞性性早熟組平均骨齡較高，乳房發(fā)育年齡較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。見表1。

2.2 兩組INHB、MKRN3、FGFR2表達(dá)比較

中樞性性早熟組INHB水平高于健康組，MKRN3、FGFR2相對(duì)表達(dá)量低于健康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。見表2。

2.3 不同中樞性性早熟組疾病類型INHB、MKRN3、FGFR2表達(dá)比較

進(jìn)展型中樞性性早熟INHB水平高于緩慢進(jìn)展型，MKRN3、FGFR2相對(duì)表達(dá)量低于緩慢進(jìn)展型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。見表3。

2.4 INHB、MKRN3、FGFR2之間相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析顯示，INHB與MKRN3呈負(fù)相關(guān)（r=-0.420，P<0.001）;INHB與FGFR2呈負(fù)相關(guān)（r=-0.218，P=0.029）;MKRN3與FGFR2呈正相關(guān)（r=0.586，P<0.001）。見圖1。

2.5 ROC曲線分析INHB、MKRN3、FGFR2對(duì)女童中樞性性早熟的預(yù)測價(jià)值

與INHB、MKRN3、FGFR2單項(xiàng)預(yù)測相比，三項(xiàng)聯(lián)合對(duì)女童中樞性性早熟的預(yù)測價(jià)值較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表4。

3 討論

性早熟包括多種類型，其中以中樞性性早熟最為常見，中樞性性早熟縮短了兒童正常的生長年限，且早初潮為女童中樞性性早熟的主要特征表現(xiàn)，此表現(xiàn)的出現(xiàn)在一定程度上影響著患兒的心理和生活[7-9]。目前臨床對(duì)于女童中樞性性早熟的診斷多以促性腺激素釋放激素刺激實(shí)驗(yàn)為主，但隨著其應(yīng)用發(fā)現(xiàn)此實(shí)驗(yàn)診斷價(jià)值并不理想，且目前缺乏簡便有效的敏感指標(biāo)，鑒于此，在本研究中分析INHB、MKRN3、FGFR2預(yù)測女童中樞性性早熟的價(jià)值，以期望造福于更多的患兒。

INHB屬轉(zhuǎn)化生長因子β家族，為一種糖蛋白，研究顯示，在女性中INHB由卵泡膜細(xì)胞、黃體細(xì)胞以及卵巢顆粒細(xì)胞等所分泌，且其水平變化與卵巢功能變化密切相關(guān)[10]。在青春期前，INHB在正常女童血清中無表達(dá)或者極低表達(dá)，而在進(jìn)入Tanner Ⅰ～Ⅲ期時(shí)其在血清中的表達(dá)明顯升高，但在Tanner Ⅳ～Ⅴ期時(shí)其在血清中的水平降低，提示著其與生長發(fā)育相關(guān)[11-12]。有學(xué)者認(rèn)為，緩慢進(jìn)展中樞性性早熟女童血中INHB升高，且與卵泡活性相關(guān)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，INHB在中樞性性早熟中表達(dá)水平明顯升高，且進(jìn)展型中樞性性早熟表達(dá)水平高于緩慢進(jìn)展型，此結(jié)果提示著，INHB在女童中樞性性早熟中表達(dá)升高，且進(jìn)展型升高加劇，提示著其可能參與此病的發(fā)生發(fā)展。

研究發(fā)現(xiàn)，誘導(dǎo)中樞性性早熟發(fā)育相關(guān)的下丘腦-垂體-性腺軸活化機(jī)制尚不完全明確，此軸活化與基因位點(diǎn)相關(guān)，全基因組分析顯示，多個(gè)位點(diǎn)為發(fā)育時(shí)間相關(guān)，其中包括MKRN3[13-14]。MKRN3屬一種無內(nèi)含子的基因，既往研究顯示，其之后在父本等位基因所表達(dá)，但近年來有研究發(fā)現(xiàn)，其在母本的印跡突變在家族性性早熟中較為常見[15]。MKRN3與卵巢發(fā)育、乳房發(fā)育相關(guān)，其可經(jīng)鋅指結(jié)構(gòu)與RNA相結(jié)合，調(diào)控卵巢和乳房發(fā)育或雌激素相關(guān)受體RNA而發(fā)揮其抑制性腺軸活化的作用。目前已有研究發(fā)現(xiàn)，MKRN3在性早熟中表達(dá)降低[16-17]。鑒于上述背景，在本研究中進(jìn)一步驗(yàn)證，結(jié)果顯示，與健康女童比較，中樞性性早熟女童血中MKRN3表達(dá)降低，且與疾病類型相關(guān)，進(jìn)展型降低更為顯著，此結(jié)果提示著，MKRN3可能參與女童中樞性性早熟的發(fā)生進(jìn)展，本研究推測其降低可能與下丘腦-垂體-性腺軸活化相關(guān)。

另外在性早熟發(fā)生過程中，兒童機(jī)體內(nèi)的激素分泌紊亂，骨骼發(fā)育異常，進(jìn)而影響正常生長發(fā)育[18]。FGFR2屬于絡(luò)氨酸激酶受體家族，研究顯示，F(xiàn)GFR2可與FGF發(fā)生特異性結(jié)合作用激活胞內(nèi)信號(hào)，而發(fā)揮其作用，包括骨骼發(fā)育、顱骨發(fā)育等，且可負(fù)性調(diào)節(jié)軟骨發(fā)育，參與人體骨骼發(fā)育的過程[19]。目前臨床上已有研究顯示[20]，F(xiàn)GFR2表達(dá)異常與性早熟相關(guān)，其在一方面經(jīng)作用于骨骼發(fā)育影響患兒生長發(fā)育，還與機(jī)體激素水平相關(guān)，可能經(jīng)過與激素的相互作用影響骨骼發(fā)育，最終影響機(jī)體正常的生長發(fā)育。本研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)GFR2在女童中樞性性成熟血中表達(dá)異常，提示其可能與女童中樞性性成熟相關(guān)，分析其原因可能與FGFR2異常表達(dá)與激素共同作用，導(dǎo)致骨骼發(fā)育異常，進(jìn)而影響患兒生長發(fā)育和性成熟相關(guān)。

本研究分析三者之間的相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，三者線性相關(guān)，分析其原因可能與三者均經(jīng)激素軸發(fā)揮作用相關(guān)，但本研究并未進(jìn)一步分析三者共同作用的具體機(jī)制，且本研究所納入的樣本量較少，因此上述研究結(jié)果還需后續(xù)研究進(jìn)一步分析驗(yàn)證。另外本研究進(jìn)一步采用ROC曲線分析三者對(duì)此病的預(yù)測價(jià)值，結(jié)果顯示，三項(xiàng)聯(lián)合對(duì)此病的預(yù)測價(jià)值較高，提示臨床可根據(jù)三者水平高低早期預(yù)測此病，并盡早采取針對(duì)性措施干預(yù)，以促進(jìn)患兒正常生長發(fā)育。

綜上所述，本研究顯示，女童中樞性性早熟中INHB表達(dá)升高，MKRN3、FGFR2表達(dá)降低，且三者線性相關(guān)，三者聯(lián)合可用于此病的預(yù)測。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Soriano-Guillén L，Argente J. Central precocious puberty，functional and tumor-related[J]. Best Pract Res Clin Endocrinol Metab，2019，33（3）：101 262.

[2] Eugster EA. Treatment of central precocious puberty[J]. J Endocr Soc，2019，3（5）：965-972.

[3] Corvest V，Lemaire P，Brailly-Tabard S，et al. Puberty and inhibin B in 35 adolescents with pituitary stalk interruption syndrome[J]. Front Pediatr，2020，8（1）：304.

[4] 陳占峰，趙培偉，蔡曉楠，等. MKRN3基因rs2239669多態(tài)性與中樞性性早熟易感性的相關(guān)性研究[J]. 臨床兒科雜志，2018，36（5）：372-375，380.

[5] 陳虹，羅麗，周旭. 性早熟兒童血清FGFR2和FGFR3表達(dá)與骨齡指數(shù)的相關(guān)性[J].中國婦幼保健，2021，36（7）：1539-1542.

[6] 中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)婦女保健分會(huì)青春期學(xué)組. 女性性早熟的診治共識(shí)[J]. 中國婦幼健康研究，2018，29（2）：135-138.

[7] Li L，Gong C. Central precocious puberty as a prelude of gonad dysplasia[J]. Pediatr Investig，2019，3（1）：50-54.

[8] Heras V，Castellano JM，F(xiàn)ernandois D，et al. Central ceramide signaling mediates obesity-induced precocious puberty[J]. Cell Metab，2020，32（6）：951-966，e8.

[9] De Sanctis V，Soliman AT，Di Maio S，et al. Long-term effects and significant Adverse Drug Reactions （ADRs） associated with the use of Gonadotropin-Releasing Hormone analogs （GnRHa） for central precocious puberty：A brief review of literature[J]. Acta Biomed，2019，90（3）：345-359.

[10] 孫娜，高樹苓，安朗，等. 卵巢早衰患者血清抑制素B、抗苗勒管激素及性激素水平與子宮動(dòng)脈血流參數(shù)的相關(guān)性研究[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2021，21（5）：992-995.

[11] 牛曉兵，唐靜，王恒兵，等. 抑制素B在青春期前精索靜脈曲張患者睪丸功能評(píng)價(jià)中的作用[J]. 中華男科學(xué)雜志，2018，24（7）：618-621.

[12] 周學(xué)紅，張華，張春濤. 血清抗苗勒氏管激素和抑制素B預(yù)測女童緩慢進(jìn)展中樞性性早熟的臨床價(jià)值[J]. 中國性科學(xué)，2020，29（10）：89-93.

[13] 劉靚，王婷. 中樞性性早熟與KISS1、MKRN3系統(tǒng)的關(guān)系研究進(jìn)展[J]. 天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2018，24（3）：274-276，封3.

[14] 石玉蘭，貴子豪，郭冰冰，等. MKRN3基因與兒童中樞性性早熟[J]. 中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志，2019，47（6）：566-570.

[15] 許天友，留佩寧，徐仁福，等. 人胰島素生長因子BP3、makorin環(huán)指蛋白3在特發(fā)性中樞性性早熟女童診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2021，31（1）：86-89，97.

[16] 唐家彥，黃娟，黃連紅，等. 血清 makorin 環(huán)指蛋白3基因在中樞性性早熟女童診斷中的意義[J]. 廣東醫(yī)學(xué)，2016，37（11）：1648-1650.

[17] Meader BN，Albano A，Sekizkardes H，et al. Heterozygous deletions in MKRN3 cause central precocious puberty without prader-willi syndrome[J]. J Clin Endocrinol Metab， 2020，105（8）：2732-2739.

[18] 戴藝，黃雪艷，覃佩云，等. 7～9歲特發(fā)性中樞性性早熟女童的骨骼營養(yǎng)情況[J]. 廣西醫(yī)學(xué)，2020，42（8）：954-956.

[19] McKenzie J，Smith C，Karuppaiah K，et al. Osteocyte death and bone overgrowth in mice lacking fibroblast growth factor receptors 1 and 2 in mature osteoblasts and osteocytes[J]. J Bone Miner Res，2019，34（9）：1660-1675.

[20] 章建偉，張濤，吳滿武. 生長激素改善GnRHa干預(yù)后性早熟大鼠生長減速的作用機(jī)制[J]. 浙江臨床醫(yī)學(xué)，2021，23（2）：159-161.

（收稿日期：2021-06-28）