李建英，邢 慶，陳 敏

（黑龍江江世藥業(yè)有限公司，黑龍江 哈爾濱 150069）

炎癥（inflammation）是生物組織受到外傷、感染等損傷因子的刺激下所發(fā)生的一種以防御反應(yīng)為主的基本病理過程，表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛和功能障礙。釋放炎性細(xì)胞因子如IL6、TNF等。炎癥引發(fā)的疼痛是多因素相互作用的結(jié)果。常見的炎癥包括皮炎、腦炎、心肌炎、鼻炎、關(guān)節(jié)炎等。其中關(guān)節(jié)炎是一種常見的慢性炎癥疾病。據(jù)統(tǒng)計，目前全世界關(guān)節(jié)炎患者有3.55億人。截至2015年中國大陸地區(qū)患關(guān)節(jié)炎的病人達(dá)1億人以上，且人數(shù)還在不斷增加。關(guān)節(jié)炎共有100多種類型。根據(jù)是否為細(xì)菌感染引起，可將關(guān)節(jié)炎分為化膿性關(guān)節(jié)炎、非化膿性關(guān)節(jié)炎。其中，非化膿性關(guān)節(jié)炎包括骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、大骨節(jié)病、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎等。炎性創(chuàng)傷可使機(jī)體炎癥因子水平顯著升高，炎癥因子的釋放在疼痛的機(jī)制研究中占有舉足輕重的地位，因而炎癥因子的改善是評價藥物抗炎效果的重要指標(biāo)[1]。目前，治療關(guān)節(jié)炎采用藥物治療、輔助治療和手術(shù)治療等三種方式。對于晚期患者，手術(shù)治療不失為一種好的治療手段；對于早中期的患者，一般采取藥物治療并配合其他方法輔助治療。其中藥物治療主要采用非甾體類抗炎藥以及腎上腺皮質(zhì)激素類藥物。

隨著生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的蓬勃發(fā)展，多種類型的多肽類藥物上市并進(jìn)入臨床研究階段，并逐漸成為治療關(guān)節(jié)疾病的首選藥物[2]。注射用骨肽（I）屬于生化藥物，是從胎牛的四肢骨中提取的骨肽（I）溶液加適量輔料制成的無菌凍干品。成分中主要含有多肽類骨代謝因子，有拮抗炎性細(xì)胞因子，緩解炎性反應(yīng)，調(diào)節(jié)鈣磷代謝，促進(jìn)新骨形成、同時增加骨鈣沉積的作用。本文詣在對注射用骨肽（I）的抗炎效果進(jìn)行研究，觀察評價注射用骨肽（I）的抗炎作用，為臨床合理用藥奠定基礎(chǔ)提供有效的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物

健康雄性大鼠20只，體重120～160g，由遼寧長生生物技術(shù)股份有限公司提供，許可證號：SCXK（遼）2015-0001，編號：211002300022971

1.1.2 主要藥品及試劑

注射用骨肽（I）（黑龍江江世藥業(yè)有限公司，批號170818）；角叉菜膠（Sigma 公司生產(chǎn)，批號080M0192V）；滅菌注射用水（山東華魯制藥有限公司生產(chǎn)，批號 1601282）；氯化鈉注射液（哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司，批號 170110D10）。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

電子天平（型號JJ2000，編號DWS-YQ-084）；超凈工作臺（型號CJ-2F，編號DWS-YQ-085）；手提式壓力蒸汽滅菌器（型號SYQ-DSX-280B，編號DWS-YQ-021）；足跖容積測量儀（型號YLS-7C，編號DWS-YQ-083）

1.2 方法

1.2.1 大鼠足腫脹度測定

取20只大鼠，稱重，隨機(jī)分為 2組。即空白對照組，注射用骨肽（I）組。分組后用足跖容積測量儀一次測量所有大鼠的右后足足容積作為基礎(chǔ)容積，測量完畢之后在其右后足足跖部位皮下注射1%角叉菜膠0.1 ml/只，空白對照組注射等容積的生理鹽水。注射完角叉菜膠或生理鹽水后，分別再用足跖容積測量儀測量致炎后1h、2 h、3 h、4 h、5 h大鼠的右后足足容積，記錄數(shù)據(jù)，計算腫脹抑制率[3]。通過比較兩組足腫脹程度及腫脹抑制率，評價注射用骨肽（I）的抗炎作用。

腫脹抑制率=(對照組足跖腫脹度－給藥組足跖腫脹度)/對照組足跖腫脹度×100%。

1.2.2 統(tǒng)計學(xué)方法

各組計量數(shù)據(jù)均采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，應(yīng)用Excel 2003和 SPSS 11.5 Graphpad 統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)，P＜0．05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 注射用骨肽（I）對大鼠足腫脹度的影響

大鼠足跖腫脹度隨致炎時間變化的結(jié)果如表1、圖1所示。應(yīng)用足跖容積測量儀測定大鼠的足跖體積，比較兩組足腫脹度的變化趨勢以及同一組中不同時間點(diǎn)大鼠的致炎程度變化趨勢。由方差分析結(jié)果可知時間因素有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，說明兩組大鼠致炎后的足腫脹度有隨時間變化的趨勢。從表中的結(jié)果可知，與空白對照組相比，注射用骨肽（I）組在致炎起始階段（1h時）大鼠的足跖腫脹度略低于空白對照組，說明藥物起了作用。兩組大鼠的足跖腫脹度在致炎后2h時均達(dá)到高峰，此時兩組大鼠的腫脹度分別為37.93±7.26、32.36±1.33，注射用骨肽（I）組大鼠足跖腫脹度（32.36±1.33）明顯低于空白對照組（37.93±7.26）（P＜0.01）。注射用骨肽（I）組在致炎后 2 h 與同一時間點(diǎn)的空白對照組比較，均能顯著抑制大鼠足跖腫脹度(P＜0.01)，說明注射用骨肽（I）組在 2 h 后能顯著抑制大鼠足跖腫脹。致炎后5h時空白對照組和注射用骨肽（I）組大鼠的足跖腫脹度分別下降到19.83±4.07、15.61±2.86。與空白對照組相比，注射用骨肽（I）組足腫脹度下降顯著(P＜0.05)。

大鼠足跖腫脹抑制率隨時間變化曲線如圖2所示。從圖中可以看出致炎后3h時抑制率呈明顯上升趨勢，4h時抑制率達(dá)到最高值，說明此時注射用骨肽（I）對大鼠足跖腫脹起到明顯的抑制作用。

表1. 大鼠足跖腫脹度隨致炎時間變化的結(jié)果（n=10，±s）Table 1. The results of the changes of swelling degree of rat plantar with time of in flammation（n=10，±s）

表1. 大鼠足跖腫脹度隨致炎時間變化的結(jié)果（n=10，±s）Table 1. The results of the changes of swelling degree of rat plantar with time of in flammation（n=10，±s）

注: *與空白組比較 P＜0．05， **與空白組比較 P＜0．01

足跖腫脹度1h 2h 3h 4h 5h空白對照組 31.53±2.34 37.93±7.26 32.55±4.51 29.22±4.37 19.83±4.07注射用骨肽（I）組 29.67±2.21 32.36±1.33** 21.57±2.44** 18.86±3.15** 15.61±2.86*組別

圖1. 大鼠足跖腫脹度隨致炎時間變化的結(jié)果（n=10）Fig1. The results of the changes of swelling degree of rat plantar with time of in flammation（n=10）

圖2. 大鼠足跖腫脹抑制率隨時間變化曲線Fig2. Time-dependent curve of inhibition rate of rat plantar swelling

3 討 論

本文主要對注射用骨肽（I）的抗炎作用進(jìn)行研究，首先通過角叉菜膠誘發(fā)大鼠足跖腫脹建立實(shí)驗(yàn)動物模型，觀察注射用骨肽（I）對大鼠足跖腫脹度變化的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白對照組相比，注射用骨肽（I）能夠明顯抑制大鼠足跖腫脹，說明其在大鼠患炎部位產(chǎn)生了明顯的抗炎消腫作用。并且從圖2可以看出，致炎4小時后，注射用骨肽（I）對大鼠足跖腫脹抑制率達(dá)到最高值，說明此時藥物對大鼠足跖腫脹起到明顯的抑制作用。

關(guān)節(jié)炎是常見的炎癥反應(yīng)之一，是一種慢性炎癥疾病。常常表現(xiàn)為關(guān)節(jié)疼痛、關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)功能障礙等。嚴(yán)重者可導(dǎo)致關(guān)節(jié)殘疾，并且影響患者生活質(zhì)量，給家庭帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。誘發(fā)關(guān)節(jié)炎的因素復(fù)雜，主要與自身免疫反應(yīng)、感染、代謝紊亂、創(chuàng)傷、退行性病變等因素相關(guān)。目前臨床上通常采用非甾體類抗炎藥以及腎上腺皮質(zhì)激素類藥物治療關(guān)節(jié)炎。但不屬于特效方法 ,且長期服藥毒性和不良作用較大[4]。

注射用骨肽（I）是應(yīng)用現(xiàn)代生物技術(shù)加工提取制成，其成份主要為胎牛四肢骨中的多肽類骨代謝因子。具有針對性強(qiáng)，副作用小，易于被人體吸收的特點(diǎn)。注射用骨肽（I）中含有的多肽類骨代謝因子能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生骨源性細(xì)胞及因子包括骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白( BMP)、轉(zhuǎn)化生長因子-β ( TGF-β) 、成纖維細(xì)胞生長因子( FGF) 、血小板衍生生長因子( PDGF) 、堿性磷酸酶(ALP)，故具有調(diào)節(jié)骨代謝、抗炎并促進(jìn)骨折愈合的作用。其中骨形態(tài)發(fā)生蛋白( BMP) 是骨組織形成過程中效用最強(qiáng)的骨生長因子，轉(zhuǎn)化生長因子-β ( TGF-β) 對骨形態(tài)發(fā)生蛋白( BMP)有協(xié)同作用，并具有抗炎活性，可抑制各種由于骨關(guān)節(jié)炎癥產(chǎn)生的炎性浸潤和關(guān)節(jié)損傷，并有效促進(jìn)軟骨關(guān)節(jié)修復(fù)，增加骨鈣沉積的作用[5]。