王紅日 繆雪欽 高美云 盧坤斌 吳小梅

（福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院，福建 福州 350003）

妊娠期糖尿病為女性在妊娠期間，受糖代謝異常因素的影響而出現(xiàn)的一種疾病，胰島素抵抗以及胰島β細(xì)胞功能異常同疾病的發(fā)生之間有密切關(guān)聯(lián)。臨床相關(guān)研究指出，部分微小核糖核酸（miR-126）與胰島素生成和分泌之間有密切關(guān)聯(lián)，且對疾病發(fā)生和發(fā)展存在重要作用[1]。目前臨床針對妊娠期糖尿病孕婦血清miR-126表達(dá)水平的相關(guān)研究較少。我們觀察了妊娠期糖尿病孕婦的miR-126、血糖和血脂水平變化，并與糖耐量正常的孕婦進行比較，分析妊娠期糖尿病孕婦發(fā)生胰島抵抗的相關(guān)危險因素，旨在明確血清miR-126表達(dá)水平同妊娠期糖尿病孕婦胰島素抵抗之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 病例納入和排除標(biāo)準(zhǔn) ①納入標(biāo)準(zhǔn)：妊娠前無糖尿病，與妊娠期糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]相符；單活胎孕婦；存在巨大兒、胎盤功能不良等指征；對研究知情同意并且自愿納入研究的孕婦。②排除標(biāo)準(zhǔn)：孕前有心臟病以及高血壓；合并宮內(nèi)感染或其他感染性疾??；肝腎功能異常；合并惡性腫瘤；未在本院分娩或者中途失訪。

1.2 病例 于2018年5月—2019年5月在福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院就診、符合病例入選和排除標(biāo)準(zhǔn)的妊娠期糖尿病孕婦中隨機抽選35例作為觀察組，另隨機選取同期在本院接受孕檢、顯示糖耐量正常的孕婦35例作為對照組。本次研究中的相關(guān)資料均上交至醫(yī)院倫理委員會審核，且經(jīng)過批準(zhǔn)。觀察組孕婦年齡23～36歲，平均（29.50±4.72）歲；體質(zhì)量指數(shù)21～30 kg/m2，平均（26.81±1.29）kg/m2。對照組年齡24～35歲，平均（29.42±4.69）歲；體質(zhì)量指數(shù)22～31 kg/m2，平均（26.96±1.35）kg/m2。兩組一般資料比較，差異無顯著性（P＞0.05），有可比性。所有孕婦在檢查之前均未接受降糖藥物治療，僅通過嚴(yán)格飲食管控的方式控制血糖水平。兩組孕婦均于本院接受剖宮產(chǎn)手術(shù)，術(shù)前24 h之內(nèi)采集晨空腹靜脈血用于檢測相關(guān)指標(biāo)。

1.3 檢測指標(biāo)與方法

1.3.1 血清miR-126水平測定 采集的空腹靜脈血離心后取血清，于-80 ℃保存待檢。血清miR-126水平測定采用實時定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)方法：依據(jù)Trizol試劑盒說明書進行RNA提取，依據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，最后依據(jù)相關(guān)試劑說明配制反應(yīng)體系并加樣；程序設(shè)定為56 ℃、72 ℃及95 ℃各30 s，92 ℃ 1 min;miR-126的內(nèi)參基因為U6，使用北京豪邁生物工程股份有限公司設(shè)計合成的引物，結(jié)束反應(yīng)后收集相關(guān)數(shù)據(jù)，以循環(huán)閾值（Ct）分析所獲得的數(shù)據(jù)，miR-126相對表達(dá)量以2-△△Ct相對定量法進行計算。

1.3.2 血脂檢測 包括總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）以及低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）。取空腹靜脈血4 ml，離心,上層血清轉(zhuǎn)移至新環(huán)氧樹脂管中，4℃下保存，以全自動生化分析儀檢測各指標(biāo)水平。

1.3.3 血糖檢測 包括空腹血糖、糖化血紅蛋白。采集所有孕婦禁食10 h以后的空腹靜脈血，取血清，采用葡萄糖氧化酶法檢測空腹血糖水平，全自動生化分析儀檢測糖化血紅蛋白水平。

1.3.4 胰島素抵抗指數(shù) 利用穩(wěn)態(tài)模型胰島抵抗指數(shù)評估胰島素抵抗程度，穩(wěn)態(tài)模型胰島抵抗指數(shù)=（空腹胰島素×空腹血漿葡萄糖）/22.5。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)以SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行處理和分析。計數(shù)資料采用例數(shù)和百分比表示，計量資料以表示，t檢驗。采用單因素分析和Logistic回歸分析，P＜0.05為差異具有顯著性。

2 結(jié) 果

2.1 兩組孕婦空腹血糖、空腹胰島素、糖化血紅蛋白、血脂以及胰島素抵抗指數(shù)的比較 觀察組孕婦的空腹血糖、空腹胰島素、糖化血紅蛋白和胰島素抵抗指數(shù)均明顯高于對照組（P＜0.05），LDL-C、TC、TG均明顯高于對照組，HDL-C和miR-126水平均明顯低于對照組（P＜0.05）。見表1。

2.2 妊娠期糖尿病孕婦胰島素抵抗影響因素的多因素分析 以空腹血糖（≥5.1 mmol/L=1，＜5.1mmol/L=0）、空腹胰島素（＜10 mU/L=0、≥10 mU/L=1）、糖化血紅蛋白（≥6.0%=1，＜6.0%=0）、miR-126水平（＞1.0=1，≤1.0=0）為自變量，以胰島素抵抗為應(yīng)變量（Y）進行Logistic回歸分析。結(jié)果顯示，空腹胰島素水平與空腹血糖水平提升、miR-126水平下降為導(dǎo)致妊娠期糖尿病孕婦胰島素抵抗的重要危險因素。見表2。

表1 兩組孕婦血糖相關(guān)指標(biāo)、血脂和血清miR-126水平的比較

表1 兩組孕婦血糖相關(guān)指標(biāo)、血脂和血清miR-126水平的比較

組別 空腹血糖（mmol/L） 空腹胰島素（mU/L） 糖化血紅蛋白（%） 胰島素抵抗指數(shù)對照組 3.69±0.31 6.98±0.49 5.46±0.33 1.79±0.28觀察組 4.39±0.40 11.98±1.16 7.75±0.62 3.31±0.64 t值 8.183 23.491 19.289 12.873 P值 0.001 0.001 0.001 0.001組別 miR-126水平 TC（mmol/L） TG（mmol/L） LDL-C（mmol/L） HDL-C（mmol/L）對照組 1.14±0.33 4.19±0.42 1.01±0.25 2.41±0.59 1.51±0.09觀察組 0.49±0.04 5.53±0.71 2.43±0.36 3.18±0.71 1.18±0.04 t值 11.568 9.610 19.167 4.935 19.823 P值 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001

表2 妊娠期糖尿病孕婦胰島素抵抗影響因素的多因素分析

3 討 論

妊娠期糖尿病孕婦的主要特征為糖代謝異常，血糖水平提高可提高游離脂肪酸和三酰甘油的濃度，對胰島素的分泌具有抑制作用[3]。該疾病具有較為復(fù)雜的發(fā)病機制，臨床主要依據(jù)妊娠期糖尿病孕婦的胰島素抵抗與胰島素分泌下降情況掌握病情，且認(rèn)為疾病的發(fā)生是由于妊娠過程中性激素分泌量提高對胰島素敏感性存在不良影響，提高了發(fā)生胰島素抵抗的風(fēng)險。

miR-126為參與細(xì)胞基因調(diào)控的非編碼小分子RNA，它參與了多種疾病的發(fā)生和發(fā)展過程。miR-126成熟體為發(fā)揮特有生物學(xué)功能的重要片段，其為高度保守miRNA，位于表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域7基因的7號內(nèi)含子，其前提為可以折疊為四個穩(wěn)定“發(fā)夾”狀的二級結(jié)構(gòu)，最低自由能為-165.7 kJ/mol，具有穩(wěn)定的二級結(jié)構(gòu)。糖尿病的發(fā)生與發(fā)展均有miR-126參與，且miR-126對于血管并發(fā)癥的發(fā)生也具有重要作用。miR-126還是導(dǎo)致代謝性疾病發(fā)生以及進一步發(fā)展的重要危險因素，它可以通過對胰島素信號分子通路進行調(diào)節(jié)，誘發(fā)胰島素抵抗現(xiàn)象；通過負(fù)向調(diào)控血管內(nèi)皮生長因子水平的表達(dá)，在糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生中起重要作用；還可以特異性地參與呼吸系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)的病理生理過程[4]。研究顯示，妊娠糖尿病患者血漿中miR-126表達(dá)水平越低，LDL-C水平越高，提示miR-126與脂代謝異常有密切關(guān)系[5]。本研究結(jié)果顯示，觀察組孕婦的miR-126、HDL-C均顯著低于對照組，其空腹血糖、空腹胰島素、糖化血紅蛋白、胰島素抵抗指數(shù)、TG、TC以及LDL-C均顯著高于對照組（P＜0.01）。提示妊娠期糖尿病孕婦常有不同程度的糖代謝紊亂和脂質(zhì)代謝異常。本研究中還發(fā)現(xiàn)，妊娠期糖尿病孕婦的miR-126表達(dá)水平較低，且存在胰島素抵抗。多因素分析結(jié)果顯示，空腹胰島素水平、空腹血糖水平、miR-126水平同妊娠期糖尿病孕婦發(fā)生胰島素抵抗之間有密切關(guān)系，顯示糖尿病孕婦機體的糖代謝紊亂與胰島素抵抗有關(guān)，糖代謝紊亂可誘發(fā)及進一步加重胰島素分泌缺陷，這可能是由于高血糖、低miR-126水平均可誘發(fā)糖、脂類代謝異常以及炎癥反應(yīng)，加快了發(fā)生胰島素抵抗的過程[6]。

總之，血清miR-126表達(dá)水平與妊娠期糖尿病的發(fā)生和發(fā)展有密切關(guān)系，可能為妊娠期糖尿病孕婦出現(xiàn)胰島素抵抗的重要機制。密切監(jiān)測孕婦血清miR-126表達(dá)水平的變化可以判斷病情的發(fā)展情況以及胰島素抵抗的發(fā)生情況。本研究存在樣本量較小的缺陷，且未深入分析血清miR-126表達(dá)水平參與妊娠期糖尿病孕婦胰島素抵抗發(fā)生的具體作用機制，仍有待在今后臨床中展開更為深入的研究，以進一步明確該指標(biāo)水平同胰島素抵抗發(fā)生之間的關(guān)聯(lián)。