吳 勇，陳登俊，汪 瀟，孫宏張*，霍美蓉**

（1中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥劑系，南京210009；2合肥合源藥業(yè)有限公司，創(chuàng)新藥物成藥性評價安徽省重點實驗室，合肥230031）

N-（4-甲基-3-（1-異煙?；哙?4-基）氧基）苯基）-3-（三氟甲基）苯甲酰胺（英文名稱：N-（3-（（1-isonicotinoylpiperidin-4-yl）oxy）-4-methylphenyl）-3-（trifluoromethyl）benzamide，實驗室代號：CHMFLKIT-110）是針對胃腸間質(zhì)瘤（gastrointestinal stromal tumors，GISTs）的新型c-KIT 激酶抑制劑，能夠強(qiáng)烈抑制激酶c-KIT 的磷酸化，在人類468 種激酶的選擇性測試中顯示出較小脫靶作用［1］，化合物結(jié)構(gòu)式如圖1。CHMFL-KIT-110 極難溶于水，為制劑開發(fā)帶來了挑戰(zhàn)。

Figure 1 Molecular structure of CHMFL-KIT-110

目前，制藥生產(chǎn)實踐中增加藥物溶解度的方法有很多，如選擇合適晶型、微粉化、表面活性劑增溶、制成前體藥物、制成包合物或固體分散體等。其中，固體分散體是指將藥物以分子、膠態(tài)、無定形或微晶狀態(tài)分散于另一種載體材料中以形成高度分散的體系，最早由Sekiguchi 和Obi 在1964 年提出。制成固體分散體后，高度分散的藥物溶解時不需克服晶格能，因此溶出速率比結(jié)晶型快［2］，而且載體通常具有良好的潤濕性，可促進(jìn)藥物的溶出。

本研究采用聚乙烯己內(nèi)酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物（Soluplus）、泊洛沙姆407（Poloxamer 407）、聚乙二醇6000（PEG 6000）和共聚維酮（Kollidon VA64）為載體材料，制備CHMFLKIT-110 固體分散體，并考察物相狀態(tài)、初步穩(wěn)定性和大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)。其中，Soluplus 為德國BASF 公司于2009年開發(fā)的新型兩親性載體材料，制備的固體分散體具有良好的制劑穩(wěn)定性、增溶作用和可加工性能［3］。目前常用于制備固體分散體的方法有熱熔擠出法、熔融溶劑法、研磨法和溶劑蒸發(fā)法等。其中，熱熔擠出法和熔融溶劑法需要使用較低熔點（或低玻璃化轉(zhuǎn)變溫度）的載體材料，熔融后的高黏度載體可能與藥物混合不充分，而且高溫條件會影響熱敏感性藥物的穩(wěn)定性［4］。研磨法效率較低，大規(guī)模生產(chǎn)時會面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)；而溶劑法制備固體分散體操作簡便，有利于快速篩選處方，同時適合實驗室轉(zhuǎn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的需求。因此，本論文選用溶劑法作為CHMFL-KIT-110 固體分散體的制備工藝。

1 材 料

1.1 藥品與試劑

CHMFL-KIT-110 原料藥（純度99.3%，合肥合源藥業(yè)有限公司）；厄貝沙坦標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.8%，中國食品藥品檢定研究院）；Soluplus、Poloxamer 407、Kollidon VA64（德國BASF 公司）；PEG 6000（西隴科學(xué)股份有限公司）；十二烷基硫酸鈉（SLS，湖南爾康制藥股份有限公司）；吐溫80（Tween 80，四川金山制藥有限公司）；聚氧乙烯氫化蓖麻油（Cremophor RH40，德國BASF 公司）；乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為市售分析純。

1.2 儀 器

CP213電子天平（美國奧豪斯儀器有限公司）；XS105 電子天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）；RC12AD 智能溶出儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；LC-20A 高效液相色譜儀、LabSolutions 數(shù)據(jù)采集處理軟件、傅里葉變換紅外光譜儀、DTG-60A 差熱熱重同步分析儀（日本島津公司）；DX-27mini X 射線粉末衍射儀（丹東浩元儀器有限公司）。

Finnigan TSQ Quantum Discovery MAX 型LCMS/MS 聯(lián)用儀（美國Thermo Electron 公司）；Milli-Q Academic 純水機(jī)（密理博上海貿(mào)易有限公司）；16K高速離心機(jī)（珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司）；H2050R 臺式高速大容量冷凍離心機(jī)（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）。

1.3 動 物

雄性SD大鼠，購入時體重180 ～220 g，購自安徽醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，許可證號：SCXK（皖）2017-001。本實驗通過合肥諾明藥物安全研究有限公司實驗動物倫理委員會批準(zhǔn)，倫理號：IACUC-2019-PK-024。

2 方法與結(jié)果

2.1 CHMFL-KIT-110平衡溶解度研究

2.1.1 色譜條件 WondaSil C18-WR 色譜柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；柱溫：35 ℃；流動相：20 mmol/L KH2PO4溶液（H3PO4調(diào)pH 至2.90）-乙腈（40∶60）；流速：1.2 mL/min；檢測波長：220 nm；進(jìn)樣體積：20 μL。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密稱取CHMFL-KIT-110 原 料藥26.22 mg，置25 mL 量瓶中，加 適量50% 乙腈并超聲使原料藥溶解，再加50% 乙腈稀釋至刻度，搖勻得CHMFL-KIT-110 儲備液。精密量取儲備液適量，用50% 乙腈稀釋，質(zhì)量濃度梯度為5.21、26.04、52.07、104.15、156.22、208.29 μg/mL，分別精密量取20 μL 注入液相色譜儀。以峰面積（A）對溶液質(zhì)量濃度（c，μg/mL）進(jìn)行回歸運(yùn)算，得回歸方程A = 39 778.32 c + 4 016.54（r =1.000 0，n = 3）。結(jié)果表明CHMFL-KIT-110 質(zhì)量濃度在5.21 ～208.29 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.1.3 平衡溶解度測定 考察CHMFL-KIT-110在不同pH 溶液和有機(jī)溶劑中的溶解度。參考USP40-NF35-Buffer Solutions，分 別 配 制HCl 溶 液（pH 1.0）、HCl 溶液（pH 2.0）、鄰苯二甲酸氫鉀緩沖液（pH 3.0）、醋酸鹽緩沖液（pH 4.5）、磷酸鹽緩沖液（pH 6.8）和磷酸鹽緩沖液（pH 8.0）。另外準(zhǔn)備純化水以及常用有機(jī)試劑，包括丙酮、甲醇、95%乙醇、無水乙醇、乙腈和乙酸乙酯。取上述水性溶液和有機(jī)溶劑適量，分別加入過量CHMFL-KIT-110 原料藥，渦旋分散，每種溶劑同法配制3 份樣品，密封后置于37 ℃恒溫?fù)u床，振搖頻率為每分鐘130 次。24 h 后，取溶液1.5 mL 于離心管中，以15 000 r/min 轉(zhuǎn)速離心8 min，取上清液經(jīng)適當(dāng)稀釋后，分別精密量取20 μL注入液相色譜儀。按外標(biāo)法以峰面積計算CHMFL-KIT-110 在各水性溶液和有機(jī)溶劑中的平衡溶解度，結(jié)果見表1。

Table 1 Equilibrium solubility of CHMFL-KIT-110 in different solvents (± s, n = 3)

Table 1 Equilibrium solubility of CHMFL-KIT-110 in different solvents (± s, n = 3)

Dissolution media HCl (pH 1.0)HCl (pH 2.0)Biphthalate (pH 3.0)Acetate (pH 4.5)Phosphate (pH 6.8)Distilled water Solubility/(μg/mL)175.47±13.23 21.98±0.41 3.47±0.00 0.71±0.01 0.68±0.02 0.73±0.11 Organic solvent Acetone Methanol 95% ethanol Absolute ethanol Acetonitrile Ethyl acetate Solubility/(mg/mL)90.55±0.36 78.58±0.23 47.37±0.36 33.30±2.28 30.35±1.00 24.56±1.09

如圖1，CHMFL-KIT-110 的吡啶環(huán)呈弱堿性，其平衡溶解度呈pH 依賴性，即平衡溶解度隨pH的升高而下降。當(dāng)pH 為6.8 時，溶解度僅為0.68 μg/mL，因此藥物在腸道環(huán)境中溶解度極低，推測會成為制約口服吸收的主要因素?；谏鲜隹紤]，本研究選擇pH 6.8 磷酸鹽緩沖液用于后續(xù)的增溶研究。此外，鑒于安全性、低毒性考慮以及CHMFL-KIT-110 在95% 乙醇中的良好溶解性［5］，本研究固體分散體的制備選用95% 乙醇作為溶劑。

2.2 CHMFL-KIT-110固體分散體的制備及評價

2.2.1 固體分散體制備 稱取CHMFL-KIT-1101 g溶解于95% 乙醇100 mL 中得澄清溶液，邊攪拌邊 分 別 緩 慢 加 入Soluplus、Poloxamer 407、PEG 6000 和Kollidon VA64 等載體材料4 g。60 ℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溶劑，置于40 ℃真空干燥箱過夜除去殘留溶劑，研磨粉碎后再置干燥器內(nèi)保存，制得4 份固體分散體樣品。

2.2.2 動力學(xué)溶解度測定 37 ℃條件下，分別稱取適量固體分散體（折合含CHMFL-KIT-110 10 mg）置于pH 6.8 磷酸鹽緩沖液500 mL 中，以槳法100 r/min 攪拌1 440 min。 分別 于 第10、20、30、60、120、240、1 440 min 取溶液10 mL，同時補(bǔ)充等量同溫緩沖液。樣品溶液經(jīng)12 000 r/min 離心5 min后，取上清液20 μL 注入液相色譜儀測定濃度，繪制動力學(xué)溶解度與時間的變化曲線，結(jié)果見圖2。

難溶性藥物與親水性載體達(dá)到分子層面的混合后，藥物釋放行為由聚合物載體的性質(zhì)驅(qū)動［4］。分別用4 種載體制備固體分散體后，CHMFL-KIT-110 的釋放行為不盡相同，但均有一定的增溶作用。Kollidon VA64 固體分散體具有明顯的速釋行為，呈現(xiàn)“彈簧效應(yīng)”［6］。檢測后期溶液略顯渾濁，可能是發(fā)生重結(jié)晶，溶液濃度恢復(fù)到藥物的平衡溶解度水平。Poloxamer 407 固體分散體增溶效果良好，但動力學(xué)溶解度呈持續(xù)下降的趨勢，有較高的析晶風(fēng)險。PEG 6000固體分散體增溶效果持續(xù)穩(wěn)定，但制備的樣品難以粉碎處理，不利于后續(xù)工藝開展。Soluplus 固體分散體在檢測前期藥物釋放緩慢，但與其他3種載體相比，Soluplus增溶效果最好，溶液過飽和狀態(tài)維持能力良好，而且樣品松脆易研磨，因此選用Soluplus 作為后續(xù)研究的載體。

Figure 2 Solubility profiles in pH 6.8 PBS of CHMFL-KIT-110 solid dispersions with different carriers (xˉ± s, n = 3)

2.2.3 載體用量選擇 按原料藥和載體質(zhì)量比1∶2、1∶3、1∶4、1∶5 分別稱取CHMFL-KIT-110 和Soluplus，按“2.2.1”項下方法制備固體分散體。分別稱取適量固體分散體（含CHMFL-KIT-110 50 mg）進(jìn)行動力學(xué)溶解度檢測，結(jié)果見圖3。

Figure 3 Solubility profiles in pH 6.8 PBS of CHMFL-KIT-110 solid dispersions with different Soluplus ratios (xˉ± s, n = 3)

質(zhì)量比為1∶2的處方在240 min后動力學(xué)溶解度下降，存在原料藥重結(jié)晶析出的風(fēng)險。質(zhì)量比在1∶3 ～1∶5范圍內(nèi)的處方動力學(xué)溶解度一直呈上升趨勢，各溶液過飽和維持能力良好。但隨著載體用量加大，載體本身的增溶效果略有下降。結(jié)合穩(wěn)定性、操作空間以及載體用量最少原則，優(yōu)選比例適中的1∶4處方用于后續(xù)研究。

2.2.4 增溶劑種類篩選 在載體材料中加入表面活性劑有助于增加難溶性藥物的親水性，表面活性劑可以配合載體材料抑制藥物結(jié)晶，提高固體分散體的貯藏穩(wěn)定性［4］。向原料藥的乙醇溶液分別添加SLS、Tween 80、Cremophor RH40，加入量為CHMFL-KIT-110 用量的50%，攪拌條件下再緩慢加入Soluplus，按“2.2.1”項制備固體分散體。分別稱取適量固體分散體（折合含CHMFL-KIT-110 10 mg）進(jìn)行動力學(xué)溶解度檢測，結(jié)果見圖4。

Figure 4 Solubility profiles of CHMFL-KIT-110 solid dispersions in pH 6.8 PBS with different solubilizers (xˉ± s, n = 3)

與圖2 相比較，添加Tween 80 和Cremophor RH40 后，CHMFL-KIT-110 動力學(xué)溶解度無明顯改善，但SLS的增溶效果較好并可顯著提高藥物溶解速率，可能是SLS 吸附于Soluplus 的疏水片段形成復(fù)合物，產(chǎn)生更多的疏水結(jié)構(gòu)域［7］，有利于CHMFL-KIT-110的“儲存”?；谠鋈苄Ч?，選擇SLS用于后續(xù)研究。

2.2.5 增溶劑用量選擇 按質(zhì)量比1∶4∶0.25、1∶4∶0.5、1∶4∶0.75 分 別 稱 取CHMFL-KIT-110、Soluplus、SLS，按“2.2.4”項制備固體分散體。分別稱取適量固體分散體（折合含CHMFL-KIT-110 50 mg）進(jìn)行動力學(xué)溶解度檢測，結(jié)果見圖5。

Figure 5 Solubility profiles of CHMFL-KIT-110 solid dispersions in pH6.8 PBS with different SLS ratios (xˉ± s, n = 3)

經(jīng)計算，3個處方的SLS在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中均未達(dá)到臨界膠束濃度（0.23%）［8］。質(zhì)量比為1∶4∶0.25 的處方動力學(xué)溶解度波動較大，240 min后動力學(xué)溶解度明顯下降。但是此處方的增溶效果優(yōu)于其他兩組，在120 ～240 min 動力學(xué)溶解度幾乎是其他組的2 倍。質(zhì)量比為1∶4∶0.75的處方在前30 min 動力學(xué)溶解度較高，隨后開始持續(xù)下降，推測是SLS 用量過大對載體Soluplus 產(chǎn)生致孔作用，并在一定程度占據(jù)“疏水內(nèi)核”，影響CHMFL-KIT-110 被載體分散與包裹。質(zhì)量比為1∶4∶0.5 的處方動力學(xué)溶解度波動較小。該用量的SLS 在提高原料藥溶解度的同時又能較好地維持溶液過飽和狀態(tài)，因此選擇此處方用于后續(xù)研究。

2.2.6 動力學(xué)溶解度分析方法專屬性 根據(jù)上述確定的固體分散體處方，配制空白輔料溶液。分別精密量取pH 6.8 磷酸鹽緩沖液、空白輔料溶液、供試品溶液和對照品溶液20 μL注入液相色譜儀，結(jié)果見圖6。

如圖6所示，CHMFL-KIT-110在6.8 min出峰，峰形良好，理論塔板數(shù)大于3000，符合測定要求。pH 6.8 磷酸鹽緩沖液、Soluplus 和SLS 對CHMFLKIT-110的測定均無干擾。

Figure 6 Specificity chromatograms of dynamic solubility methodology:pH 6.8 PBS buffer (a)；blank excipients (b)；sample (c)；STD (d)

2.3 固體分散體理化性質(zhì)研究

2.3.1 供試品制備 按質(zhì)量比1∶4∶0.5 稱取CHMFL-KIT-110、Soluplus 和SLS，于研缽中研磨混勻，置干燥器內(nèi)保存?zhèn)溆茫鳛槲锢砘旌衔?。同法稱取適量的Soluplus 和SLS，制得空白輔料。另外單獨稱取適量的Soluplus、CHMFL-KIT-110備用。

2.3.2 傅里葉變換紅外光譜 分別稱取2 mg 空白輔料、CHMFL-KIT-110、物理混合物、固體分散體，與干燥溴化鉀200 mg混勻，壓片。掃描范圍為400 ～4 000 cm-1，結(jié)果見圖7。

Figure 7 FT-IR spectra of blank excipients (a)；CHMFL-KIT-110 (b)；physical mixture (c)；solid dispersions (d)

圖7 顯示，CHMFL-KIT-110 在高波段3 200 ～3 000 cm-1有N-H 伸縮振動的特征峰，與空白輔料物理混合后特征峰減弱，制備成固體分散體后特征峰消失，低波段1 600 ～400 cm-1鋸齒狀吸收峰也大幅消失，推測CHMFL-KIT-110與Soluplus發(fā)生氫鍵結(jié)合，高度分散于載體中。

2.3.3 差熱分析 分別稱取空白輔料、CHMFLKIT-110、物理混合物、固體分散體適量，置于鋁坩堝中進(jìn)行DTA 分析，升溫速度為10 ℃/min，升溫范圍為0 ～350 ℃，結(jié)果見圖8。

圖8 顯示，CHMFL-KIT-110 在172.20 ℃處有明顯吸熱峰，單純的物理混合物在170.61 ℃仍有吸熱峰，吸熱峰輕微左移?？瞻纵o料和固體分散體均無吸熱峰，側(cè)面佐證CHMFL-KIT-110 以無定形態(tài)分散于載體中。

2.3.4 X 射線粉末衍射 分別稱取適量SLS、CHMFL-KIT-110、Soluplus、物理混合物和固體分散體，研磨成細(xì)粉后進(jìn)行XRPD 掃描分析。工作條件：銅靶，管電壓35 kV，管電流15 mA，掃描速度為2（°）/min，掃描范圍為4 ～40 °，結(jié)果見圖9。

Figure 8 DTA curves of CHMFL-KIT-110 (a)；blank excipients (b)；physical mixture (c)；solid dispersions (d)

Figure 9 XRPD images of SLS (a)；CHMFL-KIT-110 (b)；Soluplus(c)；physical mixture (d)；solid dispersions (e)

圖9 顯示，SLS 在6.140 °有特征衍射峰，CHMFL-KIT-110在8.360 ～38.938 °顯現(xiàn)出一系列特征衍射峰，而Soluplus 為無定形材料，無衍射峰。在物理混合物中仍可見CHMFL-KIT-110 的部分衍射峰，但在固體分散體中CHMFL-KIT-110 的衍射峰完全消失，說明CHMFL-KIT-110 以無定形態(tài)分散于載體中。

2.3.5 穩(wěn)定性考察 取適量CHMFL-KIT-110 固體分散體，敞口條件下放置在加速條件（40 ℃，75% 相對濕度），于第0、30 天取樣。通過XRPD 判斷樣品是否發(fā)生轉(zhuǎn)晶，并檢測其動力學(xué)溶解度。結(jié)果見圖10和圖11。

如圖10 所示，固體分散體在加速條件下放置30 d 后，在5 ～8 °可見SLS 的特征衍射峰，但未出現(xiàn)CHMFL-KIT-110 的特征衍射峰，表明CHMFLKIT-110 仍以無定形態(tài)存在于載體中。圖11 顯示動力學(xué)溶解度曲線也無明顯變化，表明此處方制備的固體分散體穩(wěn)定性良好。

Figure 10 XRPD images of fresh solid dispersions (a)；aged solid dispersions after 30 days stability testing in 40 °C，75% RH (b)

Figure 11 Solubility profiles of fresh solid dispersions and aged solid dispersions after 30 days stability testing in 40 °C，75% RH (xˉ± s, n = 3)

2.4 大鼠體內(nèi)動物學(xué)研究

2.4.1 色譜條件 Phenomenex Fusion-RP-80A 色譜柱（150 mm×2.0 mm，4 μm）；柱溫：35 ℃；流動相A 相：0.1% 甲酸水溶液，流動相B 相：甲醇；流速：0.5 mL/min；檢測波長：220 nm；進(jìn)樣體積：10 μL。洗脫程序見表2。

Table 2 Gradient elute program of CHMFL-KIT-110 plasma

2.4.2 質(zhì)譜條件 ESI 源，離子化電壓3.5 kV；毛細(xì)管溫度350 ℃；鞘氣、輔助氣、吹掃氣壓力分別為40、15、15 psi（1 psi ≈6.9 kPa）。

CHMFL-KIT-110 m/z：母離子484.0，子離子189.0，碰撞能28 eV，管透鏡電壓120 V。

厄貝沙坦m/z：母離子429.2，子離子207.1，碰撞能31 eV，管透鏡電壓120 V。

2.4.3 溶液配制 精密稱取厄貝沙坦標(biāo)準(zhǔn)品10.02 mg 于10 mL 量瓶中，乙腈溶解并定容至刻度，得質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL的內(nèi)標(biāo)儲備液。取適量內(nèi)標(biāo)儲備液，用乙腈稀釋成質(zhì)量濃度為20 ng/mL的內(nèi)標(biāo)工作溶液。

精密稱取CHMFL-KIT-110原料藥10.08 mg置10 mL 量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，得質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL 的儲備液。取適量儲備液用甲醇稀釋，配制成質(zhì)量濃度為40、100、200、1 000、2 000、10 000、20 000、40 000 ng/mL 的一系列線性標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.4.4 血漿樣品處理方法 取血漿樣品100 μL于96 孔深孔板中，加入厄貝沙坦內(nèi)標(biāo)工作溶液300 μL，渦旋5 min，4 000 r/min 離心10 min，取上層澄清液100 μL 于另一個96 孔深孔板中，加入水100 μL，混勻后4 000 r/min 離心10 min，取上清液20 μL進(jìn)樣分析。

2.4.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量范圍 精密量取CHMFLKIT-110 系列標(biāo)準(zhǔn)溶液各10 μL，加入空白大鼠血漿90 μL。按“2.4.4”項處理樣本，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，血樣質(zhì)量濃度分別為2、5、10、50、100、500、1 000、2 000 ng/mL，每個濃度為雙樣本。隨機(jī)指定10、100、1 000 ng/mL 為質(zhì)控低、中、高標(biāo)準(zhǔn)溶液。質(zhì)控樣品測定結(jié)果要求相對偏差（RE）小于15%，每一濃度水平至少50%樣品應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)。

通過對標(biāo)準(zhǔn)曲線定量范圍內(nèi)一系列濃度生物樣品測定，得到濃度對應(yīng)的響應(yīng)值。以樣品質(zhì)量濃度（X，ng/mL）為橫坐標(biāo)，不同樣品濃度的峰面積（As）與內(nèi)標(biāo)峰面積（Ai）的比值（Y，As/ Ai）為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸運(yùn)算，得回歸方程Y = 0.003 125 8 X +0.017 089 3（r = 0.996 7，n = 2）。質(zhì)控低、中、高標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對偏差分別為2.715%、13.261% 和-8.015%，均小于15%，同時各質(zhì)量濃度水平滿足至少50%樣品符合標(biāo)準(zhǔn)的要求。

2.4.6 藥代動力學(xué)試驗 選擇健康的雄性SD 大鼠9 只，隨機(jī)分成3 組，每組3 只。試驗前禁食整夜，自由飲水。組1 按5 mg/kg 靜脈注射CHMFLKIT-110 原料藥溶液（含20% DMSO 的泊洛沙姆葡萄糖注射液，0.22 μm 濾膜除菌過濾），組2 按50 mg/kg 灌胃CHMFL-KIT-110 原料藥溶液（含5%HPMC 的飽和碳酸氫鈉溶液，充分混勻），組3 按50 mg/kg 灌胃CHMFL-KIT-110 固體分散體水溶液。30 s內(nèi)完成給藥操作。

灌胃組分別于給藥前0 min 及給藥后15、30、60、120、240、360、480、600、1 440 min 眼眶后靜脈叢采血0.3 mL，靜脈注射組除上述時間點外還需在給藥后1和5 min采血。血樣置EDTA-K2抗凝管中，3 000 r/min 離心15 min，分離血漿，-20 ℃保存待用。

2.4.7 試驗結(jié)果 應(yīng)用DAS 3.0軟件按非房室模型分析血漿總藥物濃度數(shù)據(jù)，通過SPSS 22.0 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，藥代動力學(xué)參數(shù)見表3。CHMFL-KIT-110 原料藥靜脈注射，CHMFL-KIT-110 原料藥和固體分散體灌胃給藥后在大鼠體內(nèi)的血藥濃度-時間曲線見圖12。

圖12 顯示，采樣時間內(nèi)口服固體分散體組的血藥濃度都高于口服原料藥組。由表3 可知，CHMFL-KIT-110制成固體分散體后，tmax稍有提前，絕對生物利用度從0.18% 增加到64.17%。t 檢驗結(jié)果顯示，與原料藥相比，cmax和AUC0→t的P分別為0.017 和0.004，具有顯著性差異。綜上，CHMFLKIT-110的吸收效果得到極大改善。

Table 3 Pharmacokinetic parameters of CHMFL-KIT-110 in plasma after intravenous administration at a dose of 5 mg/kg and oral administration at a dose of 50 mg/kg (xˉ± s, n = 3)

Figure 12 Plasma concentration-time profiles of CHMFL-KIT-110 after intravenous administration of free APIs in rats at a dose of 5 mg/kg，oral administration of free APIs and solid dispersions to rats at a dose of 50 mg/kg (xˉ± s, n = 3)

3 討 論

CHMFL-KIT-110 作為新型c-KIT 激酶抑制劑具有較高的臨床價值，但平衡溶解度研究結(jié)果顯示在pH 4.5 以上環(huán)境中溶解度很低（＜1 μg/mL），因此藥物進(jìn)入十二指腸后易受溶解度限制而影響其生物利用度。

固體分散體技術(shù)是目前增加難溶性藥物水溶性和口服吸收的有效方法之一。動力學(xué)溶解度結(jié)果表明，以Soluplus 為載體制備的固體分散體對CHMFL-KIT-110 同時具有增溶和抑制結(jié)晶的能力，效果優(yōu)于Poloxamer 407、PEG 6000 和Kollidon VA64 等載體。SLS 相比于Tween 80 和Cremophor RH40，對Soluplus 制備的固體分散體有更好的增溶效果。優(yōu)化處方后，CHMFL-KIT-110、Soluplus、SLS的質(zhì)量比為1∶4∶0.5。

按上述處方制備的固體分散體，經(jīng)FT-IR、DTA、XRPD 等手段聯(lián)合確證表明，CHMFL-KIT-110 以無定形態(tài)高度分散于載體材料中。其在40 ℃，75% 相對濕度條件下敞口放置30 d 后，CHMFL-KIT-110 仍能維持無定形狀態(tài)，表明此固體分散體的穩(wěn)定性良好。

大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)研究結(jié)果顯示，口服CHMFL-KIT-110 原料藥的生物利用度僅為0.18%。口服固體分散體后，吸收加快，生物利用度顯著提高至64.17%，cmax和AUC0→t較原料藥分別提高373.1 倍和358.7 倍。與原料藥相比，固體分散體的相對生物利用度為35 868.47%。

總之，本項固體分散體工藝大大提高了CHMFL-KIT-110 的成藥性，為后續(xù)臨床研究、上市申請和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供了基礎(chǔ)。但由于動力學(xué)溶解度研究方法未能滿足漏槽條件，忽略了濃度梯度等因素，不易評估制劑的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，仍需設(shè)計合理的溶出方法探索制劑的體內(nèi)外相關(guān)性。