吳 東，楊家軍，吳義景，周 芬，夏倫志，江喜春，陳麗園，朱洪龍

(安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所//畜禽產(chǎn)品安全工程安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230031)

抗菌肽廣泛分布于自然界的動(dòng)物、植物和微生物當(dāng)中，是帶有正電荷的小分子多肽[1]。迄今為止，已經(jīng)分離鑒定出的抗菌肽多達(dá)2 800余種，它們通常由10～50個(gè)氨基酸組成[2]，近年來(lái)，抗菌肽因其作用機(jī)制獨(dú)特，已經(jīng)作為新型抗微生物藥物被廣泛應(yīng)用到家禽生產(chǎn)中。在肉雞養(yǎng)殖過(guò)程中，抗菌肽不僅對(duì)雞的生長(zhǎng)性能、抗病能力和免疫發(fā)育等具有較好的促進(jìn)作用[3]，還可以維護(hù)腸道內(nèi)環(huán)境的動(dòng)態(tài)平衡，調(diào)節(jié)腸道的生理機(jī)能[4]。本試驗(yàn)研究抗菌肽替代飼用抗生素對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、血清免疫指標(biāo)和腸道菌群的影響，為選擇適宜的飼用抗生素替代物提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

15%鹽霉素、50%吉他霉素預(yù)混劑由安徽某飼料有限公司提供，抗菌肽由河南某有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與分組

試驗(yàn)選用0日齡青腳麻雞360只，公母各半，隨機(jī)分為3組：對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組，每個(gè)組120只，設(shè)4個(gè)重復(fù)(圈)，每個(gè)重復(fù)30只(公母各半)；試驗(yàn)期60 d。試驗(yàn)分2個(gè)階段：0～21d階段和22～60 d階段；0～21 d階段，對(duì)照組在基礎(chǔ)日糧中添加15%鹽霉素450 g/t+50%吉他霉素100 g/t，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組分別在基礎(chǔ)日糧中添加抗菌肽100 g/t、抗菌肽200 g/t；22～60 d階段，對(duì)照組在基礎(chǔ)日糧中添加50%吉他霉素20 g/t，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組分別在基礎(chǔ)日糧中添加抗菌肽100 g/t、抗菌肽200 g/t。

1.3 試驗(yàn)日糧及飼養(yǎng)管理

本試驗(yàn)于2019-05-07在安徽省農(nóng)科院畜牧所東山試驗(yàn)?zāi)翀?chǎng)進(jìn)行。試驗(yàn)每個(gè)重復(fù)單圈飼養(yǎng)，試驗(yàn)期間自由采食粉料，自由飲水,按常規(guī)程序進(jìn)行免疫和雞舍消毒。試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1生長(zhǎng)性能指標(biāo)測(cè)定

試驗(yàn)雞在0日齡、21日齡和試驗(yàn)結(jié)束時(shí)進(jìn)行空腹稱量各重復(fù)雞體重和各重復(fù)飼料消耗量，統(tǒng)計(jì)各組平均日增重、日采食量和料增重比。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.4.2血清免疫指標(biāo)測(cè)定

測(cè)定于試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每重復(fù)選取2只(1公1母)體重相近的雞，翅靜脈采血，3 000 r/min離心15 min，分裝血清，于-20℃保存?zhèn)溆?；進(jìn)行血清中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量測(cè)定。

1.4.3腸道菌群的測(cè)定

每重復(fù)選取2只雞(1公1母)，于無(wú)菌操作臺(tái)中取腸道內(nèi)容物0.5 g于10 ml的滅菌離心管中，加入無(wú)菌生理鹽水4.5 ml，用漩渦混合儀混勻后進(jìn)行10-5～10-9倍比稀釋，每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)，乳酸桿菌和大腸桿菌分別在MRS瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)基購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司。細(xì)菌計(jì)數(shù)采用平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，最終以每克腸道內(nèi)容物中細(xì)菌個(gè)數(shù)的對(duì)數(shù)lg(CFU/g)表示。

1.5 數(shù)據(jù)分析處理

利用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，Duncan氏法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知,與抗生素組相比，0～21日齡,肉雞日增重和料增重比試驗(yàn)各組間差異都不顯著(P>0.05)。22～60日齡，與對(duì)照組相比，日增重試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組分別增加了10.88%(P<0.05)、7.22%(P<0.05);料增重比試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組分別降低了2.60%(P>0.05)、8.18%(P<0.05)。試驗(yàn)全期，與對(duì)照組相比，日增重差異不顯著(P>0.05)；料增重比試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組分別降低了1.66%(P>0.05)、7.05%(P<0.05)。

表2 不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

2.2 不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對(duì)肉雞血清免疫指標(biāo)的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，肉雞血清中IgA含量試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組分別提高了72.15%(P<0.01)、70.25%(P<0.01)；肉雞血清中IgG含量試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組分別提高了168.25%(P<0.05)、114.56%(P<0.05)；肉雞血清中IgM含量試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組和對(duì)照組之間差異不顯著(P>0.05)。

表3 不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對(duì)肉雞血清免疫指標(biāo)的影響

2.3 不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對(duì)肉雞腸道菌群的影響

由表4可知，肉雞腸道中大腸桿菌含量試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)；肉雞腸道中乳酸桿菌含量試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組比對(duì)照組分別增加9.11%(P<0.05)、0.22%(P>0.05)。

表4 不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對(duì)肉雞腸道菌群的影響

3 討論

3.1 不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

穆洋等[5]將昆蟲(chóng)源桑蠶抗菌肽、昆蟲(chóng)源天蠶抗菌肽和動(dòng)物源與昆蟲(chóng)源雜合抗菌肽3種不同的抗菌肽添加到1日齡AA肉雞的日糧中，結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組和抗生素組相比，添加3種抗菌肽的試驗(yàn)組肉雞的平均日增重顯著提高、料重比顯著降低。孫全友等[6]研究結(jié)果表明,飼糧中添加200 mg/kg抗菌肽，與對(duì)照組相比42日齡肉仔雞平均日增重提高7.96%(P<0.05)，料肉比降低5.85%(P<0.05)。劉莉如等[7]研究表明，飼糧中添加350 mg/kg抗菌肽可以顯著提高海蘭褐蛋用仔公雞的生產(chǎn)性能。Bao等[8]，李波等[9]，姚遠(yuǎn)等[10]研究表明，抗菌肽可以提高肉雞生長(zhǎng)性能。本試驗(yàn)中,與抗生素組相比，添加100～200 g/t抗菌肽組22～60 d肉雞日增重都顯著增加，料增重比都有一定程度的降低；0～60 d日增重、料增重比都有一定程度的改善，這與上述報(bào)道基本一致。說(shuō)明抗菌肽可以提高肉雞生長(zhǎng)性能。

3.2 不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對(duì)肉雞血清免疫指標(biāo)的影響

Bao等[11]在羅曼褐雞的飲用水中添加雞腸道抗菌肽CIAMP(1 μg/ml)，結(jié)果顯示，試驗(yàn)組雞的血漿中IgG和IgM的含量顯著升高。呂尊周等[12]將480只30周齡海賽克斯褐殼蛋雞隨機(jī)分為4組，在3組試驗(yàn)組日糧中分別添加200、400、600 mg/kg枯草芽孢桿菌天然抗菌肽，為期4周，發(fā)現(xiàn)3組試驗(yàn)組血清中的免疫球蛋白IgA、IgG和IgM以及補(bǔ)體C3的含量均有不同程度的提高。本試驗(yàn)中,與抗生素組相比，添加抗菌肽使肉雞血清中IgA含量極顯著提高，IgG含量顯著提高。這與上述報(bào)道基本一致。說(shuō)明在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)，抗菌肽不僅可以促進(jìn)免疫器官的發(fā)育，還可通過(guò)激活免疫細(xì)胞、招募免疫因子和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)等多種方式增強(qiáng)機(jī)體先天性免疫和獲得性免疫，增強(qiáng)機(jī)體抵御病原感染的能力[13-15]。

3.3 不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對(duì)肉雞腸道菌群的影響

腸道微生物菌群是禽類消化系統(tǒng)的一個(gè)重要組成部分，大腸桿菌是動(dòng)物腸道的正常菌群，但其中有一些菌株是致病菌，含量過(guò)高時(shí)往往引起動(dòng)物疾病。而乳酸桿菌能夠增強(qiáng)動(dòng)物體內(nèi)的免疫力，是動(dòng)物體內(nèi)的有益菌，它們的生長(zhǎng)對(duì)有害菌在空間、營(yíng)養(yǎng)上又有屏蔽競(jìng)爭(zhēng)作用，同樣抑制有害菌在腸道的定植和生長(zhǎng)。動(dòng)物腸道內(nèi)充滿正常菌群和致病菌群，它們之間的動(dòng)態(tài)平衡影響著宿主免疫系統(tǒng)活動(dòng)及生長(zhǎng)發(fā)育等正常生理功能[16]。姚遠(yuǎn)等[10]給固始雞飼喂添加了天蠶素抗菌肽的飼料，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼料中添加500 mg/kg的天蠶素能夠有效降低雞腸道內(nèi)大腸桿菌和沙門(mén)菌數(shù)量，并提高乳酸菌數(shù)量。劉莉如等[17]在海蘭褐蛋用仔公雞的日糧中添加不同劑量的天蠶素抗菌肽，42 d后發(fā)現(xiàn)，不同水平的抗菌肽均能有效降低腸道致病菌的數(shù)量，同時(shí)高劑量抗菌肽組能顯著增加腸道益生菌雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量，以350 mg/kg劑量為佳。Choi等[4]的研究結(jié)果表明,飼糧中添加60 mg/kg抗菌肽可以顯著抑制肉仔雞腸道中的有害腸道微生物數(shù)量。孫全友等[18]研究表明,抗菌肽能顯著降低肉雞盲腸中大腸桿菌和沙門(mén)菌的含量和極顯著提高乳酸桿菌和雙歧桿菌的含量；本試驗(yàn)中肉雞腸道中大腸桿菌含量添加100～200 g/t抗菌肽與抗生素組相比差異不顯著，與上述報(bào)道不一致，這可能與添加的種類和劑量不同有關(guān)；添加100 g/t抗菌肽肉雞腸道中乳酸桿菌含量比添加抗生素組顯著增加，這與上述報(bào)道基本一致。腸道內(nèi)的乳酸桿菌能夠增強(qiáng)宿主的免疫能力，產(chǎn)生的乳酸可以降低腸道內(nèi)的pH值，阻止有害菌對(duì)腸道的入侵，進(jìn)一步改善雞腸道的微生態(tài)環(huán)境，有益于雞的健康，進(jìn)而提高肉雞的生長(zhǎng)性能。

4 結(jié)論

肉雞日糧中添加100 g/t或200 g/t抗菌肽替代抗生素后，其生長(zhǎng)性能、血清免疫指標(biāo)及腸道菌群等性能指標(biāo)都要一定程度的改善。