于 菲，朱凌盈，吳文俊，趙帥兵

(天邦食品股份有限公司，浙江 寧波 315475)

多年來，南美白對蝦飼料的蛋白源依賴于“明星蛋白原料”——魚粉，但近年來，面對匱乏的海洋資源，魚粉的供應(yīng)捉襟見肘，魚粉價格越來越高，養(yǎng)殖成本越來越大，所以，尋找成本較低、供給穩(wěn)定的植物蛋白源成為必然趨勢。越來越多的研究在南美白對蝦飼料中開展起來[1-2]。有研究表明,大豆?jié)饪s蛋白替代一定比例的魚粉對南美白對蝦的攝食、生長特性等沒有顯著影響，也有部分替代試驗研究表明,在替代組上出現(xiàn)了明顯的差異[3-4]。本試驗通過在南美白對蝦飼料中以一定比例的大豆?jié)饪s蛋白替代紅魚粉后對蝦體生長性能、血液指標(biāo)等的影響，進(jìn)一步驗證大豆?jié)饪s蛋白替代一定比例的紅魚粉在南美白對蝦飼料中應(yīng)用的可行性。同時為節(jié)約魚粉資源，合理開發(fā)植物蛋白源，控制、降低水產(chǎn)飼料成本提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料

本試驗以紅魚粉、大豆?jié)饪s蛋白、豆粕、雞肉粉作為主要蛋白源，小麥粉為糖源，魚油、磷脂粉作為脂肪源，添加礦物質(zhì)預(yù)混料和維生素預(yù)混料，并補充賴氨酸和蛋氨酸，配制成3種等氮等脂的飼料。大豆?jié)饪s蛋白替代紅魚粉的水平分別為0%、28.5%和57%，原料氨基酸水平見表1。

表1 原料氨基酸組成成分分析

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗用南美白對蝦購買于浙江省杭州市蕭山區(qū)某蝦苗場，增氧運輸至室內(nèi)循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)進(jìn)行養(yǎng)殖，試驗用海水購買于蕭山，購買的海水鹽度為21～24 ppt，將新鮮海水注入養(yǎng)殖試驗室的儲備水池后加自來水稀釋至養(yǎng)殖南美白對蝦所需的較適宜的鹽度要求，即約10 ppt，調(diào)節(jié)pH值至約8.5，曝氣72 h后用余氯試劑盒檢測，達(dá)標(biāo)后供養(yǎng)殖試驗蝦苗使用。試驗開始前，先使用基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)2周，選擇初始體重為(3.0±0.1)g的試驗蝦960尾，隨機分成3組，每組4個平行，每個平行選取80尾，各處理組間體重?zé)o顯著性差異(P>0.05)。養(yǎng)殖期間水溫調(diào)節(jié)范圍為25～32℃，氨氮濃度<0.2 mg/L，亞硝酸鹽<0.06 mg/L，溶氧≥6 mg/L，pH值約為8.0～8.5。每天分別使用3組試驗料進(jìn)行表觀飽食投喂3次(早上08:30、下午14:00、晚上20:00)，養(yǎng)殖試驗為期8周。

試驗編號設(shè)置為：M0、M1、M2，具體試驗配方見表2，各組飼料氨基酸構(gòu)成見表3。

表2 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì))

表3 試驗飼料氨基酸組成(干物質(zhì))

1.3 樣品采集與分析

養(yǎng)殖試驗完結(jié)，使蝦處于停食狀態(tài)并且維持24 h，以各養(yǎng)殖池為統(tǒng)計單位對試驗蝦進(jìn)行計數(shù)、稱量，用以計算存活率、增重率、特定生長率、飼料系數(shù)及蛋白質(zhì)效率。完成稱重、計數(shù)后，在每個平行試驗組隨機取出20尾試驗蝦，除去內(nèi)臟，經(jīng)粉碎后，用于分析體成分指標(biāo)。從各試驗組中選出20尾蝦，用丁香酚輕微麻醉后，從頭胸甲處取血，并逐一收集到離心管中，放于4℃冰箱中靜置過夜，3 800 r/min離心10 min，制備出血清待測液，用于血液指標(biāo)的檢測。

樣品中粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法測定，粗脂肪含量采用索氏抽提法測定，粗灰分含量采用馬福爐550℃灼燒法測定，氨基酸含量采用鹽酸進(jìn)行水解，再經(jīng)離子交換色譜法進(jìn)行測定，谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、超氧化物歧化酶和總抗氧化能力4個血液方面的指標(biāo)使用定量試劑盒進(jìn)行檢測。

1.4 計算公式

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

對試驗結(jié)果利用SPSS 17.0進(jìn)行均值比較，所用方法為一維方差分析，顯著性差異水平選取0.05，各組數(shù)據(jù)方差齊性時多重比較采用LSD法；不齊性時用Dunnett’s C。

2 結(jié)果

2.1 大豆?jié)饪s蛋白替代紅魚粉對南美白對蝦生長等指標(biāo)的影響

由表4可見，試驗組和對照組相比，成活率和特定生長率無明顯差異(P>0.05)；M1組增重率、蛋白質(zhì)效率最高，但與M0、M2組差異不顯著(P>0.05)；M0、M1、M2在飼料系數(shù)上表現(xiàn)為遞減趨勢，但3組間差異也不顯著(P>0.05)。

表4 大豆?jié)饪s蛋白替代紅魚粉對南美白對蝦生長及飼料利用率的影響

2.2 大豆?jié)饪s蛋白替代紅魚粉對南美白對蝦營養(yǎng)成分的影響

由表5可見，試驗組與對照組相比，全蝦的水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪含量均無顯著性差異(P>0.05)；M0、M1、M2在粗灰分指標(biāo)上表現(xiàn)為遞減趨勢，但3組間也沒有明顯差異(P>0.05)。

表5 大豆?jié)饪s蛋白替代部分紅魚粉對南美白對蝦營養(yǎng)成分的影響

2.3 大豆?jié)饪s蛋白替代紅魚粉對南美白對蝦血液指標(biāo)的影響

大豆?jié)饪s蛋白替代紅魚粉對南美白對蝦血液指標(biāo)的影響見表6。

表6 大豆?jié)饪s蛋白替代紅魚粉對南美白對蝦血液指標(biāo)的影響

由表6可見，試驗組與對照組相比，在谷丙轉(zhuǎn)氨酶指標(biāo)上沒有顯著差異(P>0.05)，M0、M1、M2在谷草轉(zhuǎn)氨酶指標(biāo)上表現(xiàn)為遞增趨勢，但3組間沒有顯著差異(P>0.05)；M0、M1、M2在總抗氧化能力指標(biāo)上表現(xiàn)為遞減趨勢，但3組間沒有顯著差異(P>0.05)。M0、M1、M2在超氧化物歧化酶指標(biāo)上表現(xiàn)為遞減趨勢，3組間差異顯著(P<0.05)。

3 討論

3.1 大豆?jié)饪s蛋白替代紅魚粉對南美白對蝦生長等指標(biāo)的影響

在本試驗條件下，各處理組的成活率為97.5%～98.33%，各處理組間無顯著差異。大豆?jié)饪s蛋白替代28.5%和57%的紅魚粉對南美白對蝦的成活率、增重率、特定生長率、總攝食量、飼料效率和蛋白質(zhì)效率方面影響不顯著。Manuel等[5]用小麥、大豆、玉米粉3種混合原料替代魚粉在南美白對蝦的試驗，該試驗結(jié)果表明，在小麥、大豆、玉米粉3種混合原料對魚粉的替代比例高達(dá)100%時，南美白對蝦的生長、增重、攝食等性能均未受到影響，這為在南美白對蝦飼料中以植物原料高比例替代魚粉的設(shè)想提供了一定的理論支持。在大多數(shù)蝦類飼料中，植物蛋白原料的替代率是有一定限度的。在楊景豐等[6]對羅氏沼蝦，陳佳楠[7]對南美白對蝦，鄒文超[8]對凡納濱對蝦，Chen等[9]對白對蝦，García等[10]對紅螯螯蝦，魯耀鵬等[11]對紅螯螯幼蝦，劉韜[12]對凡納濱對蝦的替代試驗中，植物蛋白原料的替代比例都是有一定限度的。魯耀鵬等[11]對紅螯螯幼蝦的試驗研究中，豆粕對魚粉的替代率在沒有超過80%的情況下，紅螯螯蝦的增重率指標(biāo)和特定生長率指標(biāo)均不會受到影響，但是當(dāng)替代率在80%以上時，紅螯螯幼蝦的增重率和特定生長率就都會呈現(xiàn)下降的走勢并且與對照組表現(xiàn)出顯著差異；楊景豐等[6]和劉韜[12]對凡納濱對蝦的研究結(jié)果比較一致，隨著發(fā)酵豆粕替代率的上升，試驗組在特定生長率指標(biāo)上表現(xiàn)為先升后降，也就是說，發(fā)酵豆粕在替代實驗中有一個最合適的替代比例；在陳佳楠[7]的試驗研究中，當(dāng)大豆?jié)饪s蛋白對魚粉的替代比率大于5%時，凡納濱對蝦的增重率就會下降，與此同時，蛋白質(zhì)效率指標(biāo)也會受到影響；在鄒文超[8]的試驗研究中，隨著大豆?jié)饪s蛋白添加量的不斷增加，凡納濱對蝦的特定生長率和增重率都沒有受到明顯影響；在Chen等[9]的試驗研究中，隨著大豆?jié)饪s蛋白替代比例的不斷提高，白對蝦的增重受到阻礙。本研究在大豆?jié)饪s蛋白對魚粉的最高替代比例設(shè)定為57%時，與對照組相比，試驗組在成活率指標(biāo)、特定生長率指標(biāo)和增重率指標(biāo)上都沒有明顯的差別，這與大部分蝦飼料中大豆蛋白替代試驗研究結(jié)果不一致。以上研究結(jié)果相互之間均有些差異，這可能與試驗所選用的養(yǎng)殖品種，飼料配方、試驗環(huán)境等有著緊密的關(guān)系。另外，本試驗的最高替代比例為57%，在本試驗條件下，過高的替代比例是否對南美白對蝦的生長有影響還有待于進(jìn)一步驗證。

3.2 大豆?jié)饪s蛋白替代紅魚粉對南美白對蝦營養(yǎng)成分的影響

水產(chǎn)動物的營養(yǎng)成分代表了水產(chǎn)動物將飼料營養(yǎng)向自身營養(yǎng)的轉(zhuǎn)化水平，反映了水產(chǎn)品質(zhì)量的差異。本研究用28.5%和57%的大豆?jié)饪s蛋白替代紅魚粉，與對照組相比，試驗組南美白對蝦的水分指標(biāo)、粗蛋白指標(biāo)、粗脂肪指標(biāo)、灰分指標(biāo)都沒有明顯的差別，這表明在本試驗條件下大豆?jié)饪s蛋白替代部分紅魚粉不會對南美白對蝦的產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生顯著影響。在陳佳楠[7]和Chen等[9]對凡納濱對蝦的實驗研究中，隨著大豆?jié)饪s蛋白替代率的增加，凡納濱對蝦的粗蛋白質(zhì)含量呈現(xiàn)逐漸下降走勢，脂肪卻出現(xiàn)升高趨勢；在劉韜[12]對凡納濱對蝦的替代試驗中，隨著發(fā)酵豆粕添加量的增加，凡納濱對蝦脂肪含量呈現(xiàn)下降趨勢。而在本試驗研究中，隨著大豆?jié)饪s蛋白替代比例的提高，南美白對蝦的水分、蛋白質(zhì)、脂肪指標(biāo)均未受到影響，灰分有下降趨勢，但3個試驗組間也沒有明顯的差異。需要說明的是，本試驗在對南美白對蝦做全蝦營養(yǎng)成分分析時，為了檢測各試驗組的實際營養(yǎng)成分，在檢測脂肪含量時沒有對全蝦樣進(jìn)行烘干，而是在高水分下檢測的脂肪含量，實測的脂肪含量較低，所以存在的檢測誤差會偏大，這也許是造成本試驗的脂肪指標(biāo)與陳佳楠[7]和Chen等[9]得出的脂肪的變化趨勢不一致的一個重要原因。

3.3 大豆?jié)饪s蛋白替代紅魚粉對南美白對蝦血液指標(biāo)的影響

生物的健康狀況可以通過該生物的血液指標(biāo)直觀地反映出來[13]。在本試驗中，用28.5%和57%的大豆?jié)饪s蛋白替代紅魚粉，試驗組與對照組相比，南美白對蝦的谷丙轉(zhuǎn)氨酶指標(biāo)沒有明顯差異。在谷草轉(zhuǎn)氨酶指標(biāo)上表現(xiàn)為遞增趨勢，但3組間也沒有明顯的差異。試驗在谷丙轉(zhuǎn)氨酶指標(biāo)上的研究結(jié)果與鄒文超[8]對凡納濱對蝦的研究結(jié)果是一致的。而且在鄒文超[8]對凡納濱對蝦的研究試驗中，即使大豆?jié)饪s蛋白對魚粉蛋白的替代比例達(dá)到了全量替代，試驗組和對照組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶指標(biāo)仍然沒有呈現(xiàn)明顯的區(qū)別。在鄒文超[8]的試驗研究中，當(dāng)大豆?jié)饪s蛋白對魚粉蛋白的替代比例達(dá)到50%時，試驗組的谷草轉(zhuǎn)氨酶值開始下降但與對照組間沒有明顯的差別，當(dāng)替代比例達(dá)到了全量替代，試驗組的谷草轉(zhuǎn)氨酶值下降到與對照組呈顯著性差異。這與本試驗結(jié)論的趨勢是完全相反的，本試驗的最高替代比例是57%，而且隨著替代比例的提高，谷草轉(zhuǎn)氨酶值呈現(xiàn)上升的走勢，根據(jù)本試驗結(jié)果的走勢，推測在本試驗條件下，更高比例的替代會使試驗蝦體的谷草轉(zhuǎn)氨酶指標(biāo)繼續(xù)升高，并且最終出現(xiàn)差異性。

超氧化物歧化酶又被大家俗稱為“肝蛋白”，在水生動物體上，其主要的職責(zé)是清除水生動物代謝產(chǎn)生的“垃圾”，其水平高低能直觀體現(xiàn)出生物體衰老的程度[14]。本研究用28.5%和57%的大豆?jié)饪s蛋白替代紅魚粉，試驗組與對照組相比，隨著替代量的增加，南美白對蝦的超氧化物歧化酶指標(biāo)表現(xiàn)為遞減趨勢，而且3組間差異顯著。說明在本試驗條件下，大豆?jié)饪s蛋白代替部分紅魚粉影響了南美白對蝦的抗衰老能力。該試驗結(jié)果與鄒文超等[8]在凡納濱對蝦和斜帶石斑魚飼料中大豆?jié)饪s蛋白替代魚粉蛋白的試驗結(jié)果不一致。在鄒文超等[8]的試驗研究中，在最高替代比例高達(dá)100%時，試驗組和對照組在超氧化物歧化酶指標(biāo)上仍無顯著性差異。但楊景豐等[6]在羅氏沼蝦飼料中用發(fā)酵豆粕替代魚粉的實驗研究中表明，隨著替代比例的不斷提高，超氧化物歧化酶指標(biāo)呈現(xiàn)出先升后降的走勢。針對以上不同的試驗結(jié)論，還需要開展更多的相關(guān)試驗來進(jìn)行驗證。

總抗氧化能力是生物體整體抑制自由基或間接消耗掉容易生成自由基物質(zhì)的總的能力?？偪寡趸芰χ笜?biāo)數(shù)值越高說明該生物體抵抗衰老的能力就會越強，與此同時也能夠側(cè)面反映出生物體的健康程度[15]。本研究用28.5%和57%的大豆?jié)饪s蛋白替代紅魚粉，試驗組與對照組相比，隨著大豆?jié)饪s蛋白替代量的增加，南美白對蝦的總抗氧化能力指標(biāo)表現(xiàn)為遞減趨勢，但是沒有表現(xiàn)出顯著性差異。從試驗結(jié)果中可以看出，盡管試驗組沒有呈現(xiàn)出明顯的差異性，但隨著大豆?jié)饪s蛋白替代比例的增加，總抗氧化能力指標(biāo)呈現(xiàn)出下降的走勢，根據(jù)本實驗結(jié)果的走勢，推測在本試驗條件下，更高比例的替代會使試驗蝦體的總抗氧化能力指標(biāo)繼續(xù)下降，并且最終出現(xiàn)差異性。

4 結(jié)論

在現(xiàn)有的試驗條件下，大豆?jié)饪s蛋白替代南美白對蝦飼料中57%以內(nèi)的紅魚粉，同時添加2%的魷魚膏作為誘食劑，對南美白對蝦的生長，飼料利用率、營養(yǎng)成分、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總抗氧化能力等均無顯著性影響，但是與對照組相比，隨著替代比例的上升，超氧化物歧化酶指標(biāo)表現(xiàn)出明顯的差異性。由此得出，在本試驗條件下，南美白對蝦的生長、營養(yǎng)成分等指標(biāo)受到的影響均不顯著，但南美白對蝦的健康水平隨著替代比例的增加而呈現(xiàn)降低趨勢。