程淑清 陳安兒

[摘要] 目的 探討血小板糖蛋白受體Ⅲa（GPⅢa）基因PLA1/A2多態(tài)性與子癇前期（PE）遺傳易感性的相關(guān)性。方法 選取2016年9月～2018年9月于本院住院分娩的PE患者120例為PE組，對(duì)照組為120例正常妊娠婦女。采用常規(guī)檢測(cè)收集普通風(fēng)險(xiǎn)指標(biāo)并比較其在PE 組及對(duì)照組之間的差異。采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)檢測(cè)GPⅢa的PLA1/A2多態(tài)性，分析血小板糖蛋白受體Ⅲa（GPⅢa）的PLA1/A2多態(tài)性與子癇前期患者遺傳易感性的相關(guān)性。 結(jié)果 對(duì)照組和PE組A1/A1、A1/A2、A2/A2基因型頻率分別為75.0%（90/120）、23.3%（28/120）、1.7%（2/120）和70.0%（84/120）、26.7%（32/120）、3.3%（4/120），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;對(duì)照組和PE組的等位基因頻率A1、A2分別為76.3%（116/152）、23.7%（36/152）和79.7%（118/148）、20.3%（30/148），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與A1/A1基因型相比，A1/A2和A2/A2基因型具有較高的收縮壓和舒張壓，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。結(jié)論 中國(guó)人群PLA1/A2多態(tài)性與子癇前期風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，尚需在更大的樣本中進(jìn)行驗(yàn)證。

[關(guān)鍵詞] 子癇前期;血小板糖蛋白受體;多態(tài)性;遺傳易感性

[中圖分類號(hào)] R96? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2020）29-0020-04

[Abstract] Objective To explore the correlation between the PLA1/A2 polymorphism of the platelet glycoprotein Ⅲa receptor（GPⅢa） genes and genetic susceptibility with preeclampsia（PE）. Methods A total of 120 patients with PE hospitalized in our hospital for delivery from September 2016 to September 2018 were selected as the PE group and 120 normal pregnant women were taken as the control group. Common risk indicators were collected through conventional detection and their differences between the PE group and the control group were compared. The technology of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism（PCR-RFLP） was used to detect the PLA1/A2 polymorphism of GPⅢA， so as to analyze the correlation between PLA1/A2 polymorphism of GPⅢa and genetic susceptibility of the patients with PE. Results The genotype frequencies of A1/A1， A1/A2 and A2/A2 in the control group and the PE group were respectively 75.0%（90/120）， 23.3%（28/120）， 1.7%（2/120） and 70.0%（84/120）， 26.7%（32/120）， 3.3%（4/120）， and the differences were statistically insignificant（P>0.05）. The allele frequencies of A1 and A2 in the control group and the PE group were respectively 76.3%（116/152）， 23.7%（36/152） and 79.7%（118/148）， 20.3%（30/148）， and the differences were statistically insignificant（P>0.05）. Compared with genotype A1/A1， genotype A1/A2 and genotype A2/A2 had higher systolic and diastolic blood pressure， and the differences were statistically significant（P<0.001）. Conclusion Whether PLA1/A2 polymorphism in Chinese population is related to the risk of PE or not still needs to be verified by larger samples.

[Key words] Preeclampsia; Platelet glycoprotein receptor; Polymorphism; Genetic susceptibility

子癇前期（PE）是一種可遺傳的妊娠特有內(nèi)皮疾病，免疫不良、胎盤發(fā)育不足和滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)、胎盤缺血、氧化應(yīng)激和血栓形成是PE發(fā)展的關(guān)鍵因素[1]。多種血栓形成風(fēng)險(xiǎn)的基因變異影響PE遺傳易感性，包括纖溶酶原激活物抑制劑1型（PAI-1）基因啟動(dòng)子中的缺失/插入多態(tài)性[2]、FV Leiden突變和5、10亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）的C>T677多態(tài)性[3]。血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa是纖維蛋白原和von Willebrand因子的膜受體[4]，其介導(dǎo)的血小板聚集和血栓形成在子癇前期的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后方面具有關(guān)鍵性調(diào)節(jié)作用。GPⅢa基因PLA1/A2多態(tài)性是由第2外顯子的編碼突變（98C>T）導(dǎo)致33Leu>Pro取代，從而在血小板上產(chǎn)生兩種抗原性不同形式的成熟GPⅡb/Ⅲa抗原（PLA1和PLA2）。2001年在北歐白種人中首次報(bào)道GPⅢa 98T多態(tài)性的攜帶可能是子癇前期的未知危險(xiǎn)因素[5]。但2003年一項(xiàng)基于南非黑人的研究顯示PLA1/PLA2多態(tài)性并非子癇前期的病理病因的危險(xiǎn)因素[6]。目前尚無(wú)PLA1/PLA2多態(tài)性與中國(guó)人群PE遺傳易感性的相關(guān)性研究。因此本研究選取PE患者作為研究對(duì)象，將明確PLA1/PLA2多態(tài)性是否參與PE發(fā)病機(jī)制，為預(yù)警病情發(fā)展和基因水平治療干預(yù)提供思路，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2016年9月～2018年9月我院產(chǎn)科收治的子癇前期患者120例，診斷標(biāo)準(zhǔn)參照第8版《婦產(chǎn)科學(xué)》[7]。年齡22～39歲，平均（27.4±3.5）歲，平均孕齡（34.3±3.2）周。納入標(biāo)準(zhǔn)：妊娠20周后出現(xiàn)高血壓（收縮壓≥140 mmHg或舒張壓≥90 mmHg）并伴有蛋白尿≥300 mg/24 h或隨機(jī)尿蛋白定性≥（+）。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往有子癇前期病史者;有不良煙酒嗜好者;妊娠合并其他疾病者。選擇同期健康足月孕婦120例作為對(duì)照組，年齡23～40歲，平均（26.8±3.4）歲，均排除染色體疾病、生殖道感染性疾病、代謝內(nèi)分泌疾病及免疫系統(tǒng)性疾病等其他內(nèi)外科合并癥者。本研究經(jīng)本院臨床醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，且所有入選對(duì)象均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1風(fēng)險(xiǎn)指標(biāo)檢測(cè)? 促凝管空腹采集入組孕婦靜脈血4 mL，待血液凝固后3500 r/min離心15 min獲得相應(yīng)血清，-80℃保存待用。采用全自動(dòng)生化分析儀Backman AU5800測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、血肌酐（Scr）和尿蛋白;采用WofenTOP 700測(cè)定D-D二聚體（D-Dimer）;血小板計(jì)數(shù)（PLT）采用Mindray BC6800。

1.2.2 DNA提取及基因分型? EDTA抗凝采血管抽取PE組和對(duì)照組外周靜脈血2 mL，使用QIAamp DNA blood kit（Qiagen，Germany）提取基因組DNA，-80℃冰箱保存。采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)檢測(cè)GPⅢa的PLA1/A2多態(tài)性，擴(kuò)增引物序列分別為5'-TGCTGGACTTCTCTTTGGGC-3'（F）和5'-TCAGGTC TCTCCCCGCAAAG-3'（R），PCR循環(huán)條件：96℃變性15 s，57℃退火40 s，72℃延伸30 s，共39個(gè)循環(huán)，75℃再延長(zhǎng)5 min。使用MyCycler熱循環(huán)儀系統(tǒng)（Bio-Rad，USA）進(jìn)行擴(kuò)增。

1.3觀察指標(biāo)

收集并比較PE組和對(duì)照組患者的年齡、孕齡、體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、收縮壓（SBP）和舒張壓（DBP）等普通風(fēng)險(xiǎn)指標(biāo)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，計(jì)量資料以（x±s）表示，組間比較采用Student's t檢驗(yàn)，Hardy-Weinberg遺傳平衡分析采用擬合優(yōu)度χ2檢驗(yàn)。組間等位基因多態(tài)性的比較采用Pearson's χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PE組和對(duì)照組普通風(fēng)險(xiǎn)指標(biāo)比較

見表1。對(duì)年齡、孕齡等指標(biāo)進(jìn)行計(jì)量資料單因素分析結(jié)果顯示，所有指標(biāo)呈正態(tài)分布且方差齊性，其中PE組生產(chǎn)時(shí)的孕齡、PLT計(jì)數(shù)顯著低于對(duì)照組（P<0.05），收縮壓、舒張壓、血肌酐、尿蛋白和D-Dimer顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。而兩組孕婦的年齡、體質(zhì)量指數(shù)、ALT及AST等指標(biāo)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 PE組和對(duì)照組的GPⅢa基因型和等位基因頻率

Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)照組GPⅢa基因的PLA1/A2位點(diǎn)基因型分布和等位基因頻率均符合Hardy-Weinberg平衡定律（P>0.05），表明該研究所選樣本具有良好的群體代表性?；蚍中徒Y(jié)果顯示，GPⅢa基因的PLA1/A2多態(tài)性基因型A1/A1、A1/A2和A2/A2在對(duì)照組人群中則分別為75.0%（90/120）、23.3%（28/120）和1.7%（2/120），在PE組中的表達(dá)分別為70.0%（84/120）、26.7%（32/120）和3.3%（4/120），組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.140，P=0.565）。PE組等位基因A1和A2頻率分別為76.3%（116/152）和23.7%（36/152）;對(duì)照組分別為79.7%（118/148）和20.3%（30/148），組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.509，P=0.475）。見表2。

2.3 PLA1/A2基因多態(tài)性對(duì)臨床指標(biāo)的影響

見表3。年齡、孕齡、體質(zhì)量指數(shù)、尿蛋白、PLT、Scr、ALT、AST和D-Dimer指標(biāo)在各基因型間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;收縮壓和舒張壓在各基因型間存在顯著差異，與A1/A1基因型相比，A1/A2和A2/A2兩種基因型收縮壓和舒張壓較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與A1/A2基因型相比，A2/A2基因型收縮壓和舒張壓較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

子癇前期是妊娠常見并發(fā)癥，嚴(yán)重危及孕產(chǎn)婦和圍產(chǎn)兒的生命健康安全，其臨床癥狀主要表現(xiàn)為妊娠20周后出現(xiàn)高血壓，并伴有蛋白尿或母體出現(xiàn)重要臟器和器官的異常改變、胎兒胎盤受累等[8]。PE是一種具有家族傾向，且與人種、種族和環(huán)境因素相關(guān)的多系統(tǒng)復(fù)雜疾病，目前該疾病的發(fā)病機(jī)制尚未明確，因此探尋PE的具體發(fā)病機(jī)制，以制訂有效的臨床防治方案，已成為當(dāng)前產(chǎn)科領(lǐng)域急需解決的難題之一。本研究結(jié)果顯示，子癇前期患者顯示出高水平的收縮壓、舒張壓、血肌酐、尿蛋白和D-Dimer及低水平的孕齡、PLT計(jì)數(shù)。

GPⅡb～Ⅲa是與纖維蛋白原和von Willebrand因子（vWF）結(jié)合的血小板受體。其在血小板聚集和受損血管壁上的血栓形成中起關(guān)鍵作用[9-10]。編碼GPⅡb～Ⅲa的基因位于染色體17q21上，遺傳變異可能會(huì)影響GP復(fù)合物的激活和聚集本身[11]。正常凝血狀態(tài)下，血小板在血液中自由循環(huán)，不與血管壁或彼此相互作用。當(dāng)不同誘導(dǎo)劑促成血小板激活后，GPⅡb/Ⅲa發(fā)生膜內(nèi)側(cè)外翻的構(gòu)象改變，與纖維蛋白原親和力顯著增加，導(dǎo)致血小板聚集。國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)研究表明[12-14]，GPⅡb/Ⅲa蛋白介導(dǎo)的血小板聚集、血栓形成在子癇前期的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后方面起關(guān)鍵性調(diào)節(jié)作用。子癇前期患者GPⅢa蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯升高，血小板活性顯著增強(qiáng)，表明GPⅡb/Ⅲa在子癇前期凝血過程中起關(guān)鍵性調(diào)節(jié)作用，可以作為診斷及預(yù)測(cè)子癇前期進(jìn)展的一項(xiàng)指標(biāo)。GPⅡb/Ⅲa蛋白在子癇前期患者體內(nèi)持久存在，可能是導(dǎo)致子癇前期患者在終止妊娠后，血液持續(xù)高凝狀態(tài)，遠(yuǎn)期并發(fā)血栓、缺血性心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)顯著增高的原因[15]。迄今為止，GPⅡb/Ⅲa基因多態(tài)性與子癇前期遺傳易感性及相關(guān)并發(fā)癥患病風(fēng)險(xiǎn)的研究較少。

血小板GPⅢa的PLA1/A2多態(tài)性已在心血管疾病中得到廣泛研究，且PLA2等位基因的存在與體外血小板聚集增加有關(guān)，而與缺血性心血管疾病在體內(nèi)有關(guān)[16-18]。PLA2多態(tài)性血小板比PLA1多態(tài)性血小板更容易激活糖蛋白GPⅡb/Ⅲa，進(jìn)而易與纖維蛋白原結(jié)合，從而提示PLA2多態(tài)性血小板更傾向于促進(jìn)血栓的形成，增加心血管事件。本研究也顯示PLA1/A2多態(tài)性與收縮壓和舒張壓存在一定的聯(lián)系。一項(xiàng)基于北歐白人的研究顯示，PLA1/A2多態(tài)性與PE患病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)，攜帶PLA2的個(gè)體PE風(fēng)險(xiǎn)較高。然而，基于南非黑人的研究表明PLA1/A2多態(tài)性與PE遺傳易感性無(wú)關(guān)。本研究基于中國(guó)本土人群的結(jié)果顯示，PE組患者和正常對(duì)照組GPⅢa的PLA1/A2多態(tài)性位點(diǎn)的基因型分布和等位基因頻率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明PLA1/A2基因多態(tài)性在PE的發(fā)生發(fā)展中可能并不起關(guān)鍵性作用，尚不能認(rèn)為該位點(diǎn)與PE遺傳易感性相關(guān)。薈萃分析顯示，小劑量阿司匹林可以明顯降低早發(fā)PE及圍產(chǎn)期病死率，而PLA1等位基因純合的血小板似乎對(duì)低劑量阿司匹林的抑制作用不敏感。阿司匹林的這種敏感性可能具有潛在的臨床意義，可以根據(jù)患者的PLA基因型最佳地調(diào)整特定的抗血小板治療[19]。然而，GPⅢa PLA1/A2多態(tài)性在中國(guó)很少見，與本研究結(jié)果相一致，顯示這些候選功能多態(tài)性不太可能是中國(guó)人阿司匹林藥效學(xué)的重要貢獻(xiàn)者[20]。雖然以上證據(jù)均顯示GPⅢa基因PLA1/A2多態(tài)性與PE風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，但GPⅢa基因與PE風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系尚未徹底弄清。另外，PLA1/A2基因多態(tài)性與PE心血管相關(guān)并發(fā)癥的患病風(fēng)險(xiǎn)關(guān)系尚未了解清楚，這對(duì)PE患者的綜合治療和產(chǎn)后護(hù)理至關(guān)重要。

綜上所述，PE是一種復(fù)雜的多因素、多系統(tǒng)疾病，關(guān)于易感基因的研究正在深入開展，在PE的發(fā)生、發(fā)展過程中，每個(gè)基因的多態(tài)性在PE的危險(xiǎn)性方面均可能有一定作用。本研究首次在中國(guó)人群中證實(shí)GPⅢa基因PLA1/A2多態(tài)性與子癇前期的易感性無(wú)關(guān)，但仍需更大樣本進(jìn)行驗(yàn)證。另外，鑒于GPⅢa重要的生物學(xué)功能，需要進(jìn)一步的臨床研究明確PLA1/A2多態(tài)性與子癇前期相關(guān)并發(fā)癥的關(guān)系，完善和改進(jìn)子癇前期相關(guān)并發(fā)癥的預(yù)防和治療。

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（收稿日期：2020-05-19）