翟曉虎，張風(fēng)榮，李 玲，趙學(xué)剛，賀衛(wèi)華

(1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院，江蘇 泰州 225300；2.山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院，山東 濰坊 261061)

巴貝斯蟲(chóng)是由蜱蟲(chóng)傳播的一種血液寄生蟲(chóng)，全世界廣泛分布。筆者近期接診1例犬吉氏巴貝斯蟲(chóng)感染的病例，使用阿托伐醌(Atovaquone)和阿奇霉素聯(lián)合治療，后期使用克林霉素和強(qiáng)力霉素聯(lián)合用藥方法進(jìn)行鞏固，效果良好，診治過(guò)程介紹如下。

1 病例介紹

松獅犬，3歲，雄性未絕育，體重為26 kg，主述：該犬1周前開(kāi)始出現(xiàn)精神不好，食欲減退，2 d前食欲廢絕，喝水量較之前減少，尿液呈棕褐色，不愿運(yùn)動(dòng)，嗜睡。

2 臨床檢查

聽(tīng)診呼吸頻率為52 次/min，心率160 次/min，體溫40.1 ℃。視診可見(jiàn)該犬精神萎靡、喜臥、全身無(wú)力，鼻鏡干燥，被毛雜亂無(wú)光澤，可視黏膜蒼白、黃染。

3 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

3.1 血常規(guī)檢測(cè) 頭靜脈采集血液，EDTA-K2(乙二胺四乙酸二鉀)抗凝。采用Mindray BC-5000 Vet獸用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀檢查血常規(guī)。結(jié)果顯示，紅細(xì)胞數(shù)(RBC)2.14× 1012/L(正常值5.5× 1012～8.5× 1012/L、紅細(xì)胞壓積(HCT)9.4%(正常值37%～55%)、血紅蛋白濃度(HGB)29 gL(正常值110～190 g/L)和血小板數(shù)(PLT)46× 109/L(正常值117× 109～490× 109/L)，均嚴(yán)重低于正常范圍，說(shuō)明該犬有嚴(yán)重的貧血。其他檢測(cè)結(jié)果未見(jiàn)異常。

3.2 血涂片檢查 EDTA抗凝血制備血涂片，瑞氏吉姆薩染色鏡檢，結(jié)果見(jiàn)中插彩版圖1。在多個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)見(jiàn)淡藍(lán)色的環(huán)形蟲(chóng)體，疑似為犬吉氏巴貝斯蟲(chóng)。另外可見(jiàn)紅細(xì)胞大小不均，存在少量大紅細(xì)胞、球形紅細(xì)胞、多染性紅細(xì)胞和有核紅細(xì)胞。白細(xì)胞大小、著色良好。

3.3 血液生化檢測(cè) 頭靜脈采集血液，肝素鋰抗凝，采用斯馬特SMT-120V全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血液生化指標(biāo)。血液生化結(jié)果顯示，總膽紅素升高，其他未見(jiàn)異常，提示該犬有溶血的可能。

3.4 PCR檢測(cè) 采用蛋白酶K裂解、苯酚抽提的方法從EDTA抗凝血中提取該犬血液中的DNA，根據(jù)犬巴貝斯蟲(chóng)18S rRNA 基因設(shè)計(jì)的犬吉氏巴貝斯蟲(chóng)和犬巴貝斯蟲(chóng)通用引物，上游引物：5′-GTCTTGTAATTGGAATGATGGTGAC-3′，下游引物：5′-ATGCCCCCAACCGTTCCTATTA-3′，擴(kuò)增目的片段339 bp，引物由英濰捷基(上海)貿(mào)易有限公司合成[1]。25 μL PCR反應(yīng)體系：2×TaqPCR Master Mix 12.5 μL，10 mmol/L 上、下游引物各0.5 μL，模板DNA 2 μL，補(bǔ)水至25 μL。PCR 循環(huán)參數(shù):94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，重復(fù)10個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)退火溫度降0.5 ℃；然后94 ℃變性15 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，重復(fù)25個(gè)循環(huán)；最后72 ℃延伸5 min。PCR產(chǎn)物用1.5%的瓊脂糖凝膠電泳鑒定。鑒定結(jié)果如圖2所示，待檢樣品PCR擴(kuò)增條帶大小為339 bp，與設(shè)計(jì)的理論值相符，與陽(yáng)性對(duì)照一致，同時(shí)陰性對(duì)照沒(méi)有條帶擴(kuò)增，說(shuō)明沒(méi)有假陽(yáng)性。因此可判定該犬感染了巴貝斯蟲(chóng)。

圖2 PCR檢測(cè)電泳圖

結(jié)合臨床癥狀、血常規(guī)檢查、血涂片鏡檢可見(jiàn)紅細(xì)胞內(nèi)巴貝斯蟲(chóng)蟲(chóng)體和PCR可檢測(cè)到犬巴貝斯蟲(chóng)基因片段，診斷為犬吉氏巴貝斯蟲(chóng)感染。

4 治療與轉(zhuǎn)歸

治療犬吉氏巴貝斯蟲(chóng)病的原則為殺蟲(chóng)、補(bǔ)血、保肝、防止繼發(fā)感染。因該犬貧血情況較嚴(yán)重，危及生命，需要先給該犬輸血。采集健康犬血液進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)。根據(jù)該交叉配血結(jié)果，輸入200 mL新鮮血液[2]，肌內(nèi)注射促紅細(xì)胞生成素5.0 mL(1 000 IU/mL)和右旋糖酐鐵3.0 mL(0.1 g/mL)以促進(jìn)血液的生成。該病例使用阿托伐醌[13.3 mg/(kg·bw·d)，口服]和阿奇霉素[10 mg/(kg·bw·d)，口服]聯(lián)合治療，連用2周。

治療過(guò)程中需要不斷監(jiān)控患犬的血液學(xué)指標(biāo)，紅細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白濃度和紅細(xì)胞壓積。治療第2天患犬出現(xiàn)嘔吐，皮下注射止吐寧0.1 mL/(kg·bw)(10 mg/mL)。治療第7天，患犬恢復(fù)食欲，血常規(guī)檢查紅細(xì)胞數(shù)4.3×1012/L、紅細(xì)胞壓積22.4%、血紅蛋白濃度77 g/L。治療第14天，紅細(xì)胞參數(shù)恢復(fù)到正常范圍。為防止復(fù)發(fā)，使用克林霉素[12.5 mg/(kg·bw·d)，口服]、強(qiáng)力霉素[10 mg/(kg·bw·d)，口服]聯(lián)合用藥方法進(jìn)行鞏固治療1周。1個(gè)月后，該犬所有血液指標(biāo)正常，PCR檢測(cè)呈陰性。

5 討論

巴貝斯蟲(chóng)病在世界廣泛分布，在熱帶、亞熱帶和溫帶地區(qū)特別嚴(yán)重。犬感染吉氏巴貝斯蟲(chóng)的臨床癥狀主要表現(xiàn)為高熱、黏膜蒼白、黃染、尿液深黃色或暗褐色。發(fā)病時(shí)間主要集中在春夏之交和夏秋之交，這也正是巴貝斯蟲(chóng)的傳播者蜱蟲(chóng)的活躍期[3]。近年來(lái)由于藥物的長(zhǎng)期使用，部分巴貝斯蟲(chóng)對(duì)藥物產(chǎn)生耐藥，導(dǎo)致該病治療周期較長(zhǎng)[1]。目前在我國(guó)流行的犬巴貝斯蟲(chóng)主要為犬吉氏巴貝斯蟲(chóng)[4-5]。吉氏巴貝斯蟲(chóng)感染是一種蜱傳播疾病，感染犬可能出現(xiàn)免疫介導(dǎo)性溶血性貧血，治療不及時(shí)可能迅速死亡[6]。該病的致病機(jī)理是蟲(chóng)體會(huì)在紅細(xì)胞內(nèi)繁殖，破壞紅細(xì)胞引起溶血性貧血，并引起黃疸[7]?；既１憩F(xiàn)精神不佳、喜臥、貧血、發(fā)熱、黃疸、血紅蛋白尿、可視黏膜蒼白等癥狀。急性感染或初次感染巴貝斯蟲(chóng)的犬，血涂片不一定發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)體，但作為傳染原會(huì)使感染擴(kuò)散，只有嚴(yán)重患犬通?？赏ㄟ^(guò)血涂片鏡檢發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)體而確診。PCR技術(shù)為準(zhǔn)確地診斷感染早期的病犬和帶蟲(chóng)犬提供了敏感性高、特異性好、試劑容易獲得、檢測(cè)速度快的診斷方法[8]。18S rRNA基因常用于犬巴貝斯蟲(chóng)的PCR檢測(cè)，結(jié)合PCR產(chǎn)物限制性多態(tài)性分析(PCR-RFLP)可以鑒別不同種的犬巴貝斯蟲(chóng)[1]。因此，通過(guò)結(jié)合血涂片血液寄生蟲(chóng)檢查和PCR檢測(cè)可大大提高巴貝斯蟲(chóng)病的檢出率，并能區(qū)分所感染巴貝斯蟲(chóng)的類型。

治療犬巴貝斯蟲(chóng)病的殺蟲(chóng)藥通常使用抗梨形蟲(chóng)的藥物。貝尼爾被視為傳統(tǒng)上最為有效的治療犬巴貝斯蟲(chóng)病的藥物，過(guò)去臨床使用較多。由于貝尼爾的肝毒性較大，使用該藥物殺蟲(chóng)的同時(shí)需要使用保肝藥物，即便如此劑量掌控不好也容易導(dǎo)致患犬死亡。阿托伐醌是抗原蟲(chóng)動(dòng)物藥，用于治療人類肺孢子蟲(chóng)感染，對(duì)于抗巴貝斯蟲(chóng)感染也有一定效果，阿托伐醌聯(lián)合阿奇霉素治療吉氏巴貝斯蟲(chóng)最有效，是目前使用較多的治療犬巴貝斯蟲(chóng)病的藥物。近年來(lái)，有報(bào)道顯示，貝尼爾治療后患犬的復(fù)發(fā)率較高，阿托伐醌聯(lián)合阿奇霉素治療后為了降低復(fù)發(fā)率，最好使用克林霉素和強(qiáng)力霉素進(jìn)行鞏固治療。鑒于犬巴貝斯蟲(chóng)很難被完全清除，復(fù)發(fā)率較高，因此做好疾病的預(yù)防十分重要，尤其是生活于犬巴貝斯蟲(chóng)病流行地區(qū)或是經(jīng)常在戶外運(yùn)動(dòng)的犬一定要定期體外驅(qū)蟲(chóng)，切斷傳播途徑。