張晗 聶登云 江永偉 呂志剛

摘要?目的：研究復(fù)方511聯(lián)合電針對(duì)小鼠嗎啡條件性位置偏愛(ài)（CPP）和行為敏化的影響。方法：實(shí)驗(yàn)1，30只雄性C57BL/6J小鼠用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、復(fù)方511低、中、高劑量組，每組6只，采用CPP實(shí)驗(yàn)觀察低、中、高劑量復(fù)方511對(duì)小鼠嗎啡CPP偏愛(ài)分?jǐn)?shù)及總活動(dòng)度和伴藥箱穿梭次數(shù)的影響;實(shí)驗(yàn)2，30只雄性C57BL/6J小鼠用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、復(fù)方511組、電針組、針?biāo)幗M，每組6只，采用CPP實(shí)驗(yàn)觀察復(fù)方511、電針、復(fù)方511聯(lián)合電針對(duì)小鼠嗎啡CPP偏愛(ài)分?jǐn)?shù)及總活動(dòng)度和伴藥箱穿梭次數(shù)的影響。結(jié)果：1）實(shí)驗(yàn)1，與對(duì)照組比較，模型組小鼠的偏愛(ài)分?jǐn)?shù)顯著升高（P<0.000 1），而低、中、高劑量復(fù)方511均能降低小鼠偏愛(ài)分?jǐn)?shù)，但僅中劑量的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與對(duì)照組小鼠比較，嗎啡給藥后小鼠的總活動(dòng)路程和伴藥箱穿梭次數(shù)較訓(xùn)練前明顯減少（P<0.01），而施用中劑量復(fù)方511能顯著提高減少的總路程和伴藥箱穿梭次數(shù)（P<0.05）。2）實(shí)驗(yàn)2，與對(duì)照組比較，模型組小鼠的偏愛(ài)分?jǐn)?shù)顯著增加（P<0.000 1），復(fù)方511、電針、針?biāo)幗Y(jié)合均能有效降低偏愛(ài)分?jǐn)?shù)（P<0.05，P<0.05，P<0.000 1），且針?biāo)幗Y(jié)合的作用優(yōu)于單獨(dú)使用復(fù)方511和電針（P<0.05）。與對(duì)照組比較，訓(xùn)練后模型組小鼠的總活動(dòng)路程和伴藥箱穿梭次數(shù)較訓(xùn)練前明顯減少（P<0.000 1），而復(fù)方511、電針、針?biāo)幗Y(jié)合均能顯著提高小鼠嗎啡給藥后的總活動(dòng)度和伴藥箱穿梭次數(shù)（P<0.05）。結(jié)論：復(fù)方511聯(lián)合電針能有效改善小鼠嗎啡誘導(dǎo)的CPP和行為敏化。

關(guān)鍵詞?電針;復(fù)方511;阿片成癮;嗎啡;條件性位置偏愛(ài);偏愛(ài)分?jǐn)?shù);行為敏化;總活動(dòng)度

Abstract?Objective：To observe the effects of compound 511 combined with electro-acupuncture on morphine induced-conditioned place preference（CPP）and behavioral sensitization in mice.Methods：A total of 30 male C57BL/6J mice were randomly divided into control group，model group，compound 511 low，medium，and high dose groups by random number table method with 6 mice in each group.The CPP experiment was used to observe the effects of low，medium and high dose of compound 511 in mice on morphine CPP preference score，total movement distance and the number of shuttles in the drug-paired box; 30 male C57BL/6J mice were randomly divided into the control group，the model group，the compound 511 group，the electroacupuncture group，and compound 511 combined electro-acupuncture group by the random number table method with 6 mice in each group.The CPP experiment was used to observe the effects of compound 511，electroacupuncture，compound 511 combined with electroacupuncture in mice on morphine CPP preference score，total movement distance and the number of shuttles in the drug-paired box.Results：1）Compared with the control group，the preference score of mice in the model group increased significantly（P<0.000 1）.Low，medium and high doses of compound 511 could reduce the preference score，but only the difference of middle dose was statistically significant（P<0.05）.Compared with the control group，the total movement distance and the number of shuttles in the drug-paired box in the model group were significantly reduced than pre-training period（P<0.01）.The middle-dose compound 511 could significantly increase the total movement distance and the number of shuttles in the drug-paired box（P<0.05）.2）Compared with the control group，the preference score of mice in the model group increased significantly（P<0.000 1）.Compound 511，electroacupuncture，and compound 511 combined with electroacupuncture could significantly reduce the preference score（P<0.05，P<0.05，P<0.000 1），and the combination of electroacupuncture and compound 511 was better than using compound 511 and electroacupuncture alone（P<0.05）.Compared with the control group，the total movement distance and the number of shuttles in the drug-paired box of the model group after training were significantly reduced compared with pre-training（P<0.000 1）.Compared with the model group，the mice in the compound 511 group，electroacupuncture group，and acupuncture group had significantly more total movements and number of shuttles in the drug-paired box（P<0.05）.Conclusion：Compound 511 combined with electroacupuncture can effectively inhibit morphine-induced CPP and behavioral sensitization in mice.

Keywords?Electro-acupuncture; Compound 511; Drug addiction; Morphine; Conditioned place preference; Preference score; Behavioral sensitization; Total movements

中圖分類號(hào)：R245.31+9;R277.7文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.21.003

阿片類藥物濫用和成癮是一項(xiàng)持續(xù)且迅速發(fā)展的公共衛(wèi)生危機(jī)。尤其是美國(guó)，阿片類藥物過(guò)量死亡人數(shù)急劇增加，2018年，阿片類藥物過(guò)量導(dǎo)致超過(guò)5萬(wàn)人死亡[1]。由于阿片類藥物依賴性急劇增加，有必要制定適當(dāng)?shù)闹委煼桨?。阿片受體拮抗劑鹽酸納曲酮、阿片受體激動(dòng)劑美沙酮或丁丙諾啡等被用于治療阿片類藥物成癮[2]。盡管這些治療取得了一定效果，但在后期鞏固和康復(fù)中卻效果不佳。

近年來(lái)研究表明，中醫(yī)藥在阿片成癮干預(yù)方面有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。復(fù)方511是本課題組自主研發(fā)的用于阿片類藥物成癮的中藥制劑，由人參、黃芪、洋金花、延胡索、五加皮、麥冬、絞股藍(lán)、金牛草等組成。自上世紀(jì)70年代以來(lái)，針刺也被廣泛用于對(duì)抗成癮、防止復(fù)吸[3]。本研究觀察了復(fù)方511聯(lián)合電針對(duì)小鼠嗎啡條件性位置偏愛(ài)（CPP）和自發(fā)活動(dòng)的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?動(dòng)物?8～10周齡SPF級(jí)健康雄性C57BL/6J小鼠60只，體質(zhì)量20～22 g，購(gòu)于河南斯克貝斯生物科技股份有限公司，許可證號(hào)：SCXK（豫）2020-0005。小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，自由攝食和飲水，12 h光暗周期，環(huán)境溫度保持在（20±2）℃，濕度50%～70%。

1.1.2?藥物?鹽酸嗎啡注射液（東北制藥集團(tuán)沈陽(yáng)第一制藥有限公司，批號(hào)：181102-1）。復(fù)方511：人參12 g、黃芪25 g、洋金花15 g、延胡索20 g、五加皮15 g、麥冬15 g、絞股藍(lán)15 g、金牛草20 g（藥材購(gòu)于江蘇省中醫(yī)院）。取各藥材適量，加10倍量的水進(jìn)行煎煮，煎煮時(shí)間為30 min，過(guò)濾得到濾液和濾渣;加入藥渣總質(zhì)量8倍的水進(jìn)行2次煎煮，煎煮時(shí)間為30 min，再次過(guò)濾得到濾液和濾渣;合并濾液，60 ℃減壓濃縮;采用真空干燥法（70 ℃、真空度93.3～98.6 kPa，2～4 h）將濃縮液制備成浸膏，并放于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3?試劑與儀器?VisuTrack動(dòng)物高端行為分析軟件（上海欣軟信息科技有限公司，版本：2020），韓氏穴位神經(jīng)刺激儀（南京濟(jì)生醫(yī)療科技有限公司，型號(hào)：HANS-200），無(wú)菌針灸針（北京中研太和醫(yī)療器械有限公司，規(guī)格：0.18 mm×10 mm）。

1.2?方法

1.2.1?分組與模型制備

1.2.1.1?分組?在復(fù)方511對(duì)小鼠嗎啡CPP和行為敏化的影響的實(shí)驗(yàn)中，采用隨機(jī)數(shù)字表法將30只小鼠隨機(jī)分為5組，每組6只，分別為對(duì)照組、模型組、復(fù)方511低、中、高劑量組;在復(fù)方511聯(lián)合電針對(duì)小鼠嗎啡CPP和行為敏化的影響，采用隨機(jī)數(shù)字表法將30只小鼠隨機(jī)分5組，每組6只，分別為對(duì)照組、模型組、復(fù)方511組、電針組、針?biāo)幗M。

1.2.1.2?模型制備?三室CPP裝置參照文獻(xiàn)[4]制作，左右兩箱內(nèi)徑均為15 cm×18 cm×20 cm，一側(cè)為黑色，箱底為顆粒，一側(cè)為白色，箱底為木屑，中間箱位于黑白箱之間，內(nèi)徑為15 cm×8 cm×20 cm，箱與箱之間的通道由可提插的閘門控制開(kāi)或關(guān);實(shí)驗(yàn)分為預(yù)測(cè)試期、訓(xùn)練期、測(cè)試期3個(gè)階段。預(yù)測(cè)試期：打開(kāi)隔板，將小鼠放入中間箱，讓其自由跑動(dòng)20 min，1次/d，連續(xù)3 d。第3天記錄小鼠在黑白箱中的停留時(shí)間，確定小鼠的天然偏愛(ài)傾向，以非天然偏愛(ài)箱為伴藥箱訓(xùn)練小鼠。訓(xùn)練期：關(guān)閉隔板，各組小鼠注射2次/d，對(duì)照組2次均注射生理鹽水，其余各組上午注射生理鹽水，下午注射嗎啡（10 mg/kg），間隔6 h。經(jīng)嗎啡或生理鹽水腹腔注射后，立即放入伴藥箱或非伴藥箱停留30 min。測(cè)試期：打開(kāi)隔板，不予任何注射，將小鼠置于中間箱中，記錄其20 min內(nèi)在各箱中的停留時(shí)間、伴藥箱穿梭次數(shù)、總活動(dòng)路程等。

1.2.2?干預(yù)方法

1.2.2.1?復(fù)方511對(duì)小鼠嗎啡CPP和行為敏化的影響?取出復(fù)方511浸膏，分別加入水得到0.15、0.30、0.60 g/mL的復(fù)方511溶液，訓(xùn)練期間，各組均按體質(zhì)量灌胃給藥，復(fù)方511低、中、高劑量組于嗎啡前2 h分別灌胃復(fù)方511 3、6、12 g/kg，對(duì)照組和模型組均給予20 mL/kg的生理鹽水。

1.2.2.2?復(fù)方511聯(lián)合電針對(duì)小鼠嗎啡CPP和行為敏化的影響?參照文獻(xiàn)[5]進(jìn)行腧穴定位，電針組和針?biāo)幗M予電針“足三里”“三陰交”穴。將小鼠固定于自制的塑料套筒中，后肢及尾巴自然暴露于筒外。將針灸針?lè)謩e插入小鼠雙側(cè)足三里和三陰交穴，同側(cè)穴連接穴位神經(jīng)刺激儀進(jìn)行電針刺激，頻率為2 Hz/100 Hz，刺激強(qiáng)度以小鼠下肢輕微抖動(dòng)為度，留針30 min，訓(xùn)練期1次/d。復(fù)方511組、針?biāo)幗M選擇復(fù)方511對(duì)嗎啡CPP干預(yù)效果最好的劑量進(jìn)行給藥。針?biāo)幗M先行中藥灌胃，再行電針治療。除對(duì)照組外，各組均同電針組和針?biāo)幗M一樣束縛30 min，對(duì)照組、模型組、電針組均給予20 mL/kg的生理鹽水。

1.2.3?檢測(cè)指標(biāo)與方法?運(yùn)用VisuTrack動(dòng)物高行為分析軟件記錄預(yù)測(cè)試期和測(cè)試期小鼠在伴藥箱和非伴藥箱中的停留時(shí)間、伴藥箱穿梭次數(shù)及總活動(dòng)路程。

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（2020-09-10收稿?責(zé)任編輯：王明）