渠柳 楊淑 馬開 田萍 崔璨 李玲玲 崔瑛

摘要?目的：探討生姜、干姜、炮姜姜辣素部位在脾胃虛寒模型大鼠體內(nèi)組織分布與歸經(jīng)的關(guān)系。方法：將雄性SD大鼠隨機分為正常對照、生姜姜辣素、干姜姜辣素、炮姜姜辣素組;正常對照組大鼠灌胃去離子水，其余各組大鼠灌胃4 ℃米醋1 mL/100 g，連續(xù)10 d制備大鼠脾胃虛寒模型。造模第5天開始給藥，連續(xù)給藥6 d。各給藥組于末次給藥后不同時間點腹主動脈取血，并立即處死采集心、肝、脾、肺、腎、胃、大腸、小腸等組織，用UPLC-MS檢測姜辣素6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚、姜酮4種成分在大鼠各組織中的含量。采用DAS3.0軟件分析藥動學(xué)參數(shù)，對4種姜辣素成分在各組織中的AUC（0-t）值按從小到大的順序依次賦值1，2，3，4，5，6，7，8，檢測不到者賦值為0，計算各成分在各組織中AUC（0-t）的賦值總和并按大小排序，賦值總和大者表明選擇性高，以此認識姜辣素類成分在體內(nèi)的組織分布與歸經(jīng)的相關(guān)性。結(jié)果：4種成分在組織中AUC（0-t）賦值總和的排序結(jié)果為，生姜姜辣素：胃>大腸>小腸=肺>腎>肝>心>脾;干姜姜辣素：胃>小腸=大腸=肝>肺>脾>腎>心;炮姜姜辣素：胃>小腸>大腸>肝>肺>脾>心>腎。結(jié)論：生姜姜辣素組織分布與生姜歸肺、脾、胃經(jīng)基本一致;干姜姜辣素組織分布與干姜歸脾、胃、腎、心、肺的認識基本一致;炮姜姜辣素組織分布與炮姜歸脾、胃、腎經(jīng)的認識基本一致。

關(guān)鍵詞?姜辣素部位;脾胃虛寒;組織分布;歸經(jīng)

Abstract?Objective：To investigate the relationship between tissue distribution and meridian tropism of gingerols from fresh，dried and baked ginger in rats with spleen-stomach deficiency cold model rats.Methods：SD male rats were randomly divided into control group，fresh gingerols group，dried gingerols group，and baked gingerols group.Rats in control group were given deionized water，while rats in other groups were given rice vinegar 1 mL/100 g at 4 ℃ for 10 consecutive days to prepare spleen-stomach deficiency cold model.The drug was administered at the 5th day after modeling，and 6 days in a row.The abdominal aorta blood was collected at different time points after the last administration of gingerols in each group，and the heart，liver，spleen，lung，kidney，stomach，large intestine，small intestine and other tissues were executed immediately.The content of 6-gingerol，8-gingerol，10-gingerol and zingiberone in the rat tissues were detected by UPLC-MS.Pharmacokinetic parameters were analyzed by DAS3.0 software.The AUC（0-t）values of four gingerols components in different tissues were sorted.The AUC（0-t）values were assigned to 1，2，3，4，5，6，7，8 in order from small to large，and those undetected were assigned to 0.The total value of AUC（0-t）in each tissue was calculated and sorted according to size.The higher the total value of AUC（0-t）was，the higher the selectivity was，so as to understand the correlation between the tissue distribution of gingerols and meridian tropism in vivo.Results：The total AUC（0-t）values of the four components in tissues were as follows：fresh ginger：stomach> large intestine> small intestine=lung> kidney> liver> heart> spleen; dried ginger：stomach> small intestine=large intestine=liver> lung> spleen> heart; baked ginger：stomach> small intestine> large intestine> liver> lung> spleen> heart.Conclusion：The distribution of fresh gingerols in tissues is basically the same as the meridian tropism of fresh ginger：the lung，spleen and stomach; the distribution of dried gingerols in tissues is basically the same as the meridian tropism of dried ginger：the spleen，stomach，kidney，heart and lung; the distribution of baked gingerols in tissues is basically the same as the meridian tropism of baked ginger：the spleen，stomach and kidney.

Keywords?Gingerols; Spleen-stomach deficiency cold ; Tissue distribution; Meridian tropism

中圖分類號：R285.5文獻標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.21.005

姜為姜科植物Zingiber officinale Rosc的根莖，入藥又有生姜、干姜和炮姜之分，生姜味辛性溫，歸肺、脾、胃經(jīng)，具有發(fā)汗解表，溫中止嘔，溫肺止咳的功效。干姜味辛性熱，歸脾、胃、心、肺經(jīng)，具有溫中散寒，回陽通脈，溫肺化飲的功效。炮姜是干姜砂燙的炮制品，味苦澀，性溫，歸脾、胃、腎經(jīng)，具有溫經(jīng)止血，溫中散寒，止痛止瀉的功效[1]。姜的3個炮制品均具有性溫、歸脾胃經(jīng)、溫中等共同特征。研究表明姜含有一百多種化學(xué)成分，可歸屬為揮發(fā)油、姜辣素和二苯基庚烷三大類化學(xué)成分，其主要成分為姜辣素類成分[2-3]。崔瑛等[4]研究發(fā)現(xiàn)6-姜酚可能為姜溫中的功效物質(zhì)的代表性成分，因此，姜辣素部位可能為姜溫中的有效部位。

中藥歸經(jīng)不能與西醫(yī)學(xué)解刨部位等同，但從現(xiàn)有的研究結(jié)果看，與有效物質(zhì)的體內(nèi)組織分布有密切的關(guān)系。因此，通過功效物質(zhì)的體內(nèi)分布探討藥物組織分布與歸經(jīng)的關(guān)系，對于深入認識中藥的作用原理具有重要的意義。

生姜、干姜、炮姜均具有溫?zé)嵝?，歸脾胃經(jīng)，本實驗室前期研究了生姜、干姜、炮姜姜辣素部位對于脾胃虛寒模型大鼠的溫中作用，并得出6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚和姜酮為姜辣素溫中功效物質(zhì)的代表性成分[5]。在溫中有效的基礎(chǔ)上，觀察功效物質(zhì)的代表性成分組織分布與歸經(jīng)的關(guān)系，更符合中醫(yī)藥思維。因此，本研究在前期工作的基礎(chǔ)上選擇生姜、干姜、炮姜姜辣素部位作為研究對象，根據(jù)辨證施治原則，按照“病證-效應(yīng)-生物樣本分析”系統(tǒng)思路，建立脾胃虛寒病證模型，在姜辣素對脾胃虛寒模型大鼠有效性的基礎(chǔ)上，以6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚和姜酮為指標(biāo)性成分，通過UPLC-MS對生物樣品進行分析，確定指標(biāo)性成分在大鼠各組織中的含量，獲得姜溫中相關(guān)物質(zhì)體內(nèi)分布的數(shù)據(jù)，進而為認識姜的功效物質(zhì)和歸經(jīng)提供依據(jù)。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?動物?SPF級雄性大鼠，體質(zhì)量（220±10）g，購于山東省實驗動物中心，生產(chǎn)許可證號：SCXK（魯）20140007;批號：SYXK（豫）2015-0005。分籠飼養(yǎng)于大鼠IVC獨立送風(fēng)隔離籠具內(nèi)，溫度（25±2）℃，給予標(biāo)準(zhǔn)全價飼料，并由專人負責(zé)喂養(yǎng)?！秳游飳嶒瀭惱韺彶楸怼方?jīng)河南中醫(yī)學(xué)院實驗動物倫理委員會審核，符合相關(guān)規(guī)定（倫理審批號：DWLL201402012）。

1.1.2?藥物?生姜姜辣素部位（實驗室自制，批號：20170913，含量為82.76%）;干姜姜辣素部位（實驗室自制，批號：20170822，含量為87.07%）;炮姜姜辣素部位（實驗室自制，批號：20170726，含量為85.87%）;6-姜酚（批號：20171206）、8-姜酚（批號：20180408）均由河南省中醫(yī)藥研究院提供，純度均大于98%;10-姜酚（批號：wkq16072091）、姜酮（批號：wkq160820003）（純度≥98%），四川維克奇生物科技有限公司。

1.1.3?試劑與儀器?米醋（江蘇恒順醋業(yè)股份有限公司，批號：SC13132111200090）;羧甲基纖維素鈉（天津市光復(fù)精細化工研究所，美國，批號：201607280）;乙腈：色譜純（Tedia Company，美國，批號：17050840）;甲醇：色譜純（Tedia Company，美國，批號：17045124）;甲酸：色譜純（Sigma-Aldrich，美國，批號：1001003297）。大鼠獨立送風(fēng)隔離籠具（蘇州馮氏實驗動物設(shè)備有限公司，型號：IVC-Ⅱ型）;高效液相色譜儀（Thermo，美國，型號：ΜLtiMate 3000）;液質(zhì)聯(lián)用型高分辨串聯(lián)色譜儀（Thermo，美國，型號：Q-Exactive-Qibitrap-MS）;液相色譜柱[Thermo，美國，型號：Syncronis C18（100 mm×2.1 mm×1.7 μm）];電子分析天平（北京賽多利斯天平公司，型號：BS210S）;氮氣吹干儀（北京八方世紀(jì)有限公司，型號：HGC-24A）;全自動組織研磨儀（上海凈信科技有限公司，型號：JX-FSTPRP-48）。

1.2?方法

1.2.1?分組與模型制備?雄性SD大鼠不限食水適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，稱重標(biāo)記后隨機分為正常對照組、生姜姜辣素（200 mg/kg）組、干姜姜辣素（400 mg/kg）組、炮姜姜辣素（400 mg/kg）組共4組，正常對照組為10只，其余各組均為24只。正常對照組于每日上午9點灌胃去離子水，其余各組均灌胃4 ℃米醋1 mL/100 g，連續(xù)10 d制備大鼠脾胃虛寒模型[6-7]。

1.2.2?給藥方法?于造模第5天下午3點開始給藥，正常對照組灌胃1%CMC-Na混懸液，其余各給藥組灌胃相應(yīng)劑量的姜辣素混懸液給藥體積均為1 mL/100 g，連續(xù)給藥6 d。

1.2.3?檢測指標(biāo)與方法

1.2.3.1?樣品采集?生姜、干姜、炮姜姜辣素組大鼠分別于末次灌胃給藥后5、10、20、30、40、60、90、120、180、240、360、480 min時（每個時間點各2只）腹主動脈取血，處死后立即采集心、肝、脾、肺、腎、胃、大腸、小腸等組織。

1.2.3.2?UPLC-MS檢測條件?UPLC條件，色譜柱：Syncronis C18（100 mm×2.1 mm×1.7 μm）;流動相：乙腈、0.1%甲酸水;流速：0.25 mL/min;柱溫：30 ℃;進樣量：5 μL。梯度洗脫條件見表1。

1.2.3.3?質(zhì)譜條件?離子源：電噴霧離子化源（ESI）;掃描模式：Full MS/dd-MS2（+）;數(shù)據(jù)采集范圍：m/z 100～1 000;鞘氣流量：40;輔助氣流量：10;吹尾氣流量：0;噴霧電壓：2.8 kV（負離子），3.8 kV（正離子）;毛細管溫度：350 ℃;蒸發(fā)溫度：350 ℃;S-lens RF level：55.0;載氣為氮氣。

1.2.3.4?混合對照品儲備液的制備?精密稱取6-姜酚2.08 mg，8-姜酚5.52 mg，10-姜酚2.06 mg，姜酮3.75 mg，置于5 mL的容量瓶加甲醇定容，配置成6-姜酚，8-姜酚，10-姜酚，姜酮濃度分別為416 μg/mL，1 104 μg/mL，412 μg/mL，750 μg/mL的混合對照品儲備液，備用。等比稀釋為7.813、15.625、31.25、62.5、125、250、500、1 000、2 500、5 000、10 000 ng/mL等系列濃度的混合對照品溶液。

1.2.3.5?內(nèi)標(biāo)溶液的制備?精密稱取白術(shù)內(nèi)酯I 3.33 mg置于5 mL的容量瓶內(nèi)，加甲醇定容到刻度，配制成0.667 mg/mL的儲備液。精密吸取375 μL定容到25 mL稀釋到1.00 μg/mL，備用。

1.2.3.6?供試品溶液的制備?用生理鹽水清洗組織表面血漬及內(nèi)表面，吸水紙吸干，剪碎，加入2倍量生理鹽水，置于10 mL離心管中，剪碎后使用細胞破碎儀進行破碎;組織破碎液添加3倍量的甲醇和20 μL的內(nèi)標(biāo)溶液，置于快速混勻器中渦旋3 min，按12 000 r/min的速度，離心半徑9 cm，離心10 min;吸取上清液置另一10 mL離心管中，組織沉淀物再次添加2倍量甲醇，置于快速混勻器中渦旋3 min后，以12 000 r/min的速度，離心半徑9 cm，離心10 min，合并2次上清液;40 ℃氮氣吹干，精密添加甲醇0.4 mL，渦旋1 min后取上清液，經(jīng)0.22 μm有機濾膜濾過，即得組織供試品溶液，進樣量5 μL。

1.2.4?方法學(xué)考察

1.2.4.1?專屬性考察?分別取模型組心、肝、脾、肺、腎、胃、小腸、大腸等組織勻漿液400 μL，按“1.2.3.6?供試品溶液的制備”項下處理后，進樣，獲得相應(yīng)的組織樣品的色譜圖。取一定濃度的混標(biāo)溶液加入模型組織勻漿液中，按“1.2.3.6?供試品溶液的制備”項下處理后，進樣，得到相應(yīng)的組織色譜圖。取灌胃給藥后各組織樣品勻漿液按“1.2.3.6?供試品溶液的制備”項下處理后，進樣，得到相應(yīng)的樣品色譜圖。

1.2.4.2?標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制?精密吸取“1.2.3.4”項下配制的一系列混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液400 μL，氮氣吹干后加入400 μL的空白組織勻漿液，按照“1.2.3.6?供試品溶液的制備”項下進行處理，進樣，以標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)峰面積比值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，用加權(quán)最小二乘法（1/X2）進行一元線性回歸方程繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4.3?精密度和準(zhǔn)確度考察?取空白大鼠的各臟腑組織勻漿液400 μL，按照“標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制”方法配制高（500 ng/mL）、中（250 ng/mL）、低（62.5 ng/mL）3個劑量的QC樣品溶液，每個濃度進行5個樣本分析。連續(xù)測定3 d，并用當(dāng)天隨行測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度。計算該方法的精密度以及準(zhǔn)確度。精密度用相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值表示，準(zhǔn)確度用相對誤差RE值表示。

1.2.4.4?樣品提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)?取高（500 ng/mL）、中（250 ng/mL）、低（62.5 ng/mL）3個劑量的QC樣品溶液，按照“標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制”方法配制加入空白大鼠的組織勻漿液400 μL，每個濃度平行進行5樣本分析，得待測物和內(nèi)標(biāo)的峰面積比A1;取空白組織勻漿液400 μL，按照“1.2.3.6?供試品溶液的制備”項下進行處理，氮氣吹干后，加入20 μL的內(nèi)標(biāo)溶液和相應(yīng)濃度高、中、低3個劑量的標(biāo)準(zhǔn)品溶液400 μL，每個濃度進行5樣本分析，氮氣吹干，100 μL甲醇復(fù)溶，進樣，得待測物和內(nèi)標(biāo)的峰面積比A2;用甲醇400 μL，按照樣品“標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制”方法加入高、中、低3個劑量的QC樣品溶液，每個濃度進行5樣本分析，氮氣吹干，進樣，得待測物峰面積與內(nèi)標(biāo)的峰面積比A3。提取回收率計算公式為：提取回收率=A1/A2×100%?；|(zhì)效應(yīng)的計算公式為：基質(zhì)效應(yīng)=A2/A3×100%。

1.2.4.5?穩(wěn)定性考察?取高（500 ng/mL）、中（250 ng/mL）、低（62.5 ng/mL）3個劑量的QC樣品溶液，按照“標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制”方法配制加入空白大鼠的組織勻漿液400 μL，每個濃度進行5樣本分析，分別考察樣品在室溫放置24 h、-20°冰箱反復(fù)凍融3次的樣品穩(wěn)定性，按照“1.2.3.6?供試品溶液的制備”進行分析。

1.3?統(tǒng)計學(xué)方法?檢測3種姜的姜辣素部位代表性成分不同時間點分別在肝、心、脾、肺、腎、胃、小腸、大腸中的含量，采用DAS3.0軟件進行非房室模型分析，得到4種代表性成分在各組織中的藥動學(xué)參數(shù)，對各成分在各組織中的AUC（0-t）的大小進行排序，按從小到大的順序依次賦值1、2、3、4、5、6、7、8，檢測不到者賦值為0，計算4種代表性成分在各組織中AUC（0-t）的賦值總和并按大小順序排列，得到姜辣素部位在組織中的分布情況。根據(jù)組織分布情況取排名前5的組織作為認識歸經(jīng)的依據(jù)，以此探討4種姜辣素成分在體內(nèi)的組織分布與歸經(jīng)的相關(guān)性，從而認識生姜、干姜、炮姜的歸經(jīng)。

2?結(jié)果

2.1?方法學(xué)評價

按照2018年FDA生物樣品分析方法驗證指導(dǎo)原則[8]進行了方法學(xué)考察，包括專屬性、線性、精密度、準(zhǔn)確度、提取回收率、基質(zhì)效應(yīng)和穩(wěn)定性，結(jié)果表明該方法專屬性良好，在一定范圍內(nèi)線性良好，精密度、準(zhǔn)確度、提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)結(jié)果符合生物樣品的質(zhì)量控制要求，樣品穩(wěn)定性良好。

2.1.1?專屬性?比較模型組、含有內(nèi)標(biāo)的混標(biāo)溶液處理的空白模型組和待測的樣品組織色譜圖可知，所用的組織樣品處理方法合適，色譜條件適宜，其樣品的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚和姜酮以及內(nèi)標(biāo)的測定，所用方法專屬性較強。提取的分子離子峰從上到下依次為6-姜酚（質(zhì)荷比277.180 24）保留時間2.61 min、8-姜酚（質(zhì)荷比305.211 88）保留時間4.31 min、10-姜酚（質(zhì)荷比333.242 22）保留時間6.14 min、姜酮（質(zhì)荷比177.091 05）保留時間2.63 min和內(nèi)標(biāo)（白術(shù)內(nèi)酯，質(zhì)荷比231.138 47）保留時間6.19 min。見圖1（A1-H3）。

2.1.2?標(biāo)準(zhǔn)曲線?各成分在各組織中的標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果。見表2～9。

2.1.3?精密度和準(zhǔn)確度?精密度和準(zhǔn)確度結(jié)果見表10～17。

2.1.4?樣品提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)?樣品提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)結(jié)果見結(jié)果見表18～25。

2.1.5?穩(wěn)定性?穩(wěn)定性考察結(jié)果見表26～33。

2.2?生姜姜辣素部位給藥后不同時間點在各組織中的藥物濃度?生姜姜辣素給藥后4種代表性成分在各組織中均有分布。4種成分在胃、小腸、大腸中的吸收更快、更多且維持時間更長，其次是肺、肝、腎等組織，提示姜辣素對這些組織有明顯選擇性。見表34～37。

2.3?干姜姜辣素部位給藥后不同時間點在不同組織中的藥物濃度?干姜姜辣素給藥后4種代表性成分在各組織中均有分布。4種成分在胃、小腸、大腸中的吸收更快、更多且維持時間更長，其次是肝、肺等組織，提示姜辣素對這些組織有明顯選擇性。見表38～41。

2.4?炮姜姜辣素部位給藥后不同時間點在不同組織中的藥物濃度?炮姜姜辣素給藥后4種代表性成分在各組織中均有分布。4種成分在胃、小腸、大腸中的吸收更快、更多且維持時間更長，其次是肝、肺等組織，提示姜辣素對這些組織有明顯選擇性。見表42～45。

2.5?生姜姜辣素部位藥動學(xué)參數(shù)與組織分布特征?生姜姜辣素部位給藥后4種代表性成分在各組織中的藥動學(xué)參數(shù)見表46～49。由賦值總和可知，生姜姜辣素部位給藥后組織分布情況為：胃>大腸>小腸=肺>腎>肝>心>脾。結(jié)果表明生姜姜辣素在胃、大腸、小腸、肺、腎分布濃度較高。賦值結(jié)果見表50。

2.6?干姜姜辣素部位藥動學(xué)參數(shù)與組織分布特征?干姜姜辣素部位給藥后4種代表性成分在各組織中的藥動學(xué)參數(shù)見表51～54。由賦值總和可知，干姜姜辣素部位給藥后組織分布情況為：胃>小腸=大腸=肝>肺>脾>腎>心。表明干姜姜辣素在胃、小腸、大腸、肝、肺分布濃度較高。賦值結(jié)果見表55。

2.7?炮姜姜辣素部位藥動學(xué)參數(shù)與組織分布特征?炮姜姜辣素部位給藥后4種代表性成分在各組織中的藥動學(xué)參數(shù)見表56～59。由賦值總和可知，炮姜姜辣素部位給藥后組織分布情況為：胃>小腸>大腸>肝>肺>脾>心>腎。表明炮姜姜辣素在胃、小腸、大腸、肝、肺分布濃度較高。賦值結(jié)果見表60。

3?討論

3.1?脾胃虛寒模型的選擇?姜具有溫?zé)嵝?，均能歸中焦脾胃經(jīng)，具有溫中功效。因此，觀察姜的功效物質(zhì)及成分分布與歸經(jīng)，均需在相應(yīng)的脾胃虛寒模型上進行。近年來有關(guān)脾胃虛寒動物模型的造模方法有很多，主要包括中藥復(fù)制法、西藥復(fù)制法和飲食失節(jié)法[9]。如陳小野等[5]運用寒涼性藥物如石膏等水煎液灌胃的方法;西藥如利血平[10]、秋水仙堿;牛鳳云等[11]選用單日喂白菜，雙日不限量喂白菜的同時喂精煉豬油1次。本實驗室采用灌胃米醋制備大鼠脾胃虛寒模型[6]，該模型經(jīng)過多次復(fù)制，制備方法完善，造模復(fù)制結(jié)果穩(wěn)定。通過實驗觀察造模大鼠的外觀行為變化，記錄每天每只大鼠的進食量、飲水量、體質(zhì)量變化和排泄情況。與正常組比較，造模大鼠從造模第2天開始出現(xiàn)豎毛、拱背，被毛失去光澤、懶動聚堆、肛門污穢、體質(zhì)量減輕等脾胃虛寒癥狀，在一定程度上表明模型復(fù)制成功。姜辣素部位給藥后觀察到上述脾胃虛寒癥狀有明顯改善，表現(xiàn)出顯著地溫中作用，這為認識姜辣素的歸經(jīng)的內(nèi)在機制奠定了藥效學(xué)基礎(chǔ)。

3.2?姜辣素部位組織分布與歸經(jīng)的相關(guān)性研究?藥物的組織分布是指藥物從給藥部位吸收進入血液后，由循環(huán)系統(tǒng)運送到體內(nèi)各臟器、組織的過程。歸經(jīng)是藥物對機體臟腑經(jīng)絡(luò)選擇性的作用，歸經(jīng)所指的臟腑經(jīng)絡(luò)不等同于現(xiàn)代解剖學(xué)中的內(nèi)臟器官，而是整合功能和臟腑組織的綜合系統(tǒng)，但又包含相應(yīng)的解剖學(xué)實體在內(nèi)，并未脫離生理解剖基礎(chǔ)。有研究表明藥物的作用部位與歸經(jīng)關(guān)系密切，且藥物中功效成分在體內(nèi)的分布是藥物歸經(jīng)的重要依據(jù)[12-13]。因此，在中醫(yī)證候模型上，在有效的基礎(chǔ)上，結(jié)合藥代動力學(xué)方法，觀察功效部位在病癥模型動物體內(nèi)的組織分布，從而可以獲得中藥歸經(jīng)與藥物分布相關(guān)性的認識[14-16]。

6-姜酚、8姜酚、10姜酚和姜酮經(jīng)血液循環(huán)分布于肝、心、脾、肺、腎、胃、小腸、大腸等組織器官中，說明可透過血腦屏障在大鼠體內(nèi)廣泛分布。我們以藥動學(xué)方法觀察這4種功效相關(guān)成分在體內(nèi)的組織分布，采用DAS軟件計算藥動學(xué)參數(shù)，考慮藥物在體內(nèi)吸收分布的過程并結(jié)合藥動學(xué)參數(shù)的意義，選擇藥動學(xué)參數(shù)AUC（0-t）（血藥濃度曲線對時間軸所包圍的面積，該參數(shù)是評價藥物吸收程度的重要指標(biāo)，反映藥物在體內(nèi)的暴露特性）為主要評價依據(jù)，分別對4種成分在各組織中AUC（0-t）的大小進行排序，并按從小到大分別賦值1、2、3、4、5、6、7、8，檢測不到者賦值為0，計算4種成分在各組織中的賦值總和并進行排序，根據(jù)排序結(jié)果確定其對組織的選擇性，再結(jié)合相關(guān)文獻記載，進而認識其組織分布與歸經(jīng)的相關(guān)性。

生姜姜辣素部位給藥后4種成分在各組織中的賦值總和大小順序為：胃>大腸>小腸=肺>腎>肝>心>脾。賦值前5名為胃、大腸、小腸、肺、腎。2015版《中華人民共和國藥典》記載生姜歸肺、脾、胃經(jīng)。在中醫(yī)理論中，大腸、小腸在脾主運化中起著重要作用，與中醫(yī)脾有著密切的聯(lián)系，故可以將大腸、小腸中的分布認為是歸脾胃經(jīng)的現(xiàn)代表現(xiàn)形式。脾臟在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中是重要的免疫器官，與中醫(yī)脾主運化不一致，因此觀察到解剖器官脾的分布含量少與二者在2種醫(yī)學(xué)體系中，本來不是一物有關(guān)。因此可以認為《中華人民共和國藥典》記載的歸經(jīng)臟腑與生姜姜辣素成分分布基本吻合。

干姜姜辣素部位給藥后4種成分在各組織中的賦值總和大小順序為：胃>小腸=大腸=肝>肺>脾>腎>心。賦值前5名為胃、小腸、大腸、肝、肺。2015版《中華人民共和國藥典》記載干姜歸脾、胃、腎、心、肺經(jīng)。前述已說明大腸、小腸與傳統(tǒng)中醫(yī)中的脾聯(lián)系密切，可以將大腸、小腸中的分布認為是歸脾胃經(jīng)的現(xiàn)代表現(xiàn)形式。本實驗按西醫(yī)解剖器官觀察脾臟，因此脾中姜辣素部位分布較少可能是由于中醫(yī)脾“主運化、主升清”，與西醫(yī)脾臟雖同名但存在本質(zhì)差異?！侗静輦湟吩疲骸案山苋敕?，利氣;能入肝，引血藥生血，故與補陰藥同用”?！侗静萁?jīng)解》中記載“干姜氣溫，稟天春升之木氣。入足厥陰肝經(jīng)……”?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)中肝臟是人體重要的消化器官、代謝器官，通過消化道進入血液的藥物，一般首先通過肝臟進行代謝，以上為干姜姜辣素在肝中分布較多提供了依據(jù)。本實驗是基于大鼠脾胃虛寒模型來探討組織分布與歸經(jīng)的相關(guān)性，故組織分布結(jié)果顯示對胃、小腸、大腸選擇性較高，而在心、腎中分布較少，可能是與機體所處病理狀態(tài)有關(guān)。故可以認為干姜在體內(nèi)的組織分布與中醫(yī)關(guān)于干姜歸脾、胃、腎、心、肺的認識基本一致。

炮姜姜辣素部位給藥后4種成分在各組織中的賦值總和大小順序為：胃>小腸>大腸>肝>肺>脾>心>腎。賦值前5名為胃、小腸、大腸、肝、肺。2015版《中華人民共和國藥典》記載炮姜歸脾、胃、腎經(jīng)。前述已說明大腸、小腸與傳統(tǒng)中醫(yī)中的脾聯(lián)系密切，可以將大腸、小腸中的分布認為是歸脾胃經(jīng)的現(xiàn)代表現(xiàn)形式。本實驗是在姜的溫中作用基礎(chǔ)上認識其組織分布與歸經(jīng)，故組織分布結(jié)果顯示對中焦脾胃的選擇性較大，而對腎的選擇性較小。炮姜歸經(jīng)的古今文獻記載歸肺經(jīng)的有12種，歸肝經(jīng)的有10種[7]，故可以認為炮姜在體內(nèi)的組織分布與中醫(yī)關(guān)于炮姜歸脾、胃、腎的認識基本一致。

綜上所述，生姜姜辣素代表性成分在體內(nèi)的組織分布與生姜歸脾、胃、肺經(jīng)的文獻記載相吻合。干姜姜辣素代表性成分在體內(nèi)的組織分布已將其主要歸脾、胃、肺經(jīng)包含其中，故可以認為干姜在體內(nèi)的分布與中醫(yī)關(guān)于干姜歸脾、胃、腎、心、肺的認識較為一致。炮姜姜辣素代表性成分在體內(nèi)的組織分布與炮姜歸脾、胃、腎經(jīng)的文獻記載較為一致，其在肝、肺中的分布與炮姜歸肝、肺經(jīng)的部分文獻記載基本吻合。研究結(jié)果提示，采用病證模型為基礎(chǔ)的藥物體內(nèi)分布認識中藥歸經(jīng)的內(nèi)在機制具有可行性。

參考文獻

[1]高學(xué)敏.中藥學(xué)[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2011：55，239，308.

[2]盧傳堅，歐明，王寧生.姜的化學(xué)成分分析研究概述[J].中藥新藥與臨床藥理，2003，14（3）：215-217.

[3]楊宇萍，杜晶，鄧仙梅，等.姜及其不同炮制品中姜酚的含量測定[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2015，31（22）：3369-3370，3373.

[4]崔瑛，紀(jì)彬，馮志毅，等.姜的溫中功效物質(zhì)研究[J].中藥與臨床，2011，2（5）：27-29，32.

[5]楊淑.生姜、干姜、炮姜姜辣素部位溫中作用及組織分布與歸經(jīng)的相關(guān)性研究[D].鄭州：河南中醫(yī)藥大學(xué)，2018.

[6]陳小野，周永生，樊雅莉，等.大鼠虛寒證模型的研制[J].中國實驗動物學(xué)報，2001，9（3）：155-159.

[7]王桁杰，楊晶晶，崔瑛，等.基于“病證-效應(yīng)-生物樣本分析”方法的炮姜溫中功效物質(zhì)及歸經(jīng)研究[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2016，18（3）：337-343.

[8]United States Food and Drug Administration，Bioanalytical Method Validation Guidance for Industry.2018[EB/OL].[2020-02-09].Availableonline：http：//www.fda.gov/downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/UCM070107.pdf.

[9]張世珍.脾虛證動物模型的建立及其在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用[J].中國獸醫(yī)科技，1991，21（10）：16-19.

[10]黃麗萍，余日躍，李森，等.吳茱萸對利血平所致虛寒證大鼠肝臟能量代謝的影響[J].中藥藥理與臨床，2013，29（3）：111-114.

[11]牛鳳云，田慶玲，吳春萍.脾胃虛寒型胃潰瘍動物模型的初步探討[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2005，12（2）：84-86.

[12]付志玲.炮制改變苦杏仁功效與歸經(jīng)的體內(nèi)作用機制研究[D].西安：西北大學(xué)，2010.

[13]王瑾，梁茂新.中藥歸經(jīng)現(xiàn)代研究的思路與方法[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2012，14（1）：1237-1241.

[14]崔瑛，楊晶晶，郭敏娟，等.基于“病證-效應(yīng)-生物樣本分析”方法的酸棗仁“安神”藥性物質(zhì)及歸經(jīng)的研究[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2015，17（3）：569-577.

[15]郭敏娟，張廷，馬開，等.干姜中有效成分在大鼠體內(nèi)組織分布與歸經(jīng)的相關(guān)性研究[J].中草藥，2014，45（7）：965-972.

[16]李乾勝，申玲玲，馬開，等.生姜在大鼠臟腑組織分布與其歸經(jīng)相關(guān)性研究[J].中醫(yī)學(xué)報，2014，29（7）：1004-1009.

（2020-02-09收稿?責(zé)任編輯：王明）