張?zhí)m

（西寧市疾病預(yù)防控制中心 青海 西寧 810007）

目前，常用的微生物快速檢測(cè)技術(shù)有兩類，一類是由傳統(tǒng)微生物檢測(cè)技術(shù)改良而來(lái)，最具代表性的是快速測(cè)試板；另一類是運(yùn)用生物工程、熒光法等高精尖科技，可直接特異性檢測(cè)微生物及其代謝產(chǎn)物等來(lái)對(duì)微生物做出有效鑒別，最具代表性的是ATP 發(fā)光技術(shù)。前者可將樣品處理過(guò)程簡(jiǎn)化，可提高檢測(cè)靈敏度。其培養(yǎng)方法得到改良，用時(shí)和傳統(tǒng)技術(shù)相比卻未縮短，只是檢測(cè)用時(shí)縮短了一些，而檢測(cè)費(fèi)用有所提高[1]。后者優(yōu)點(diǎn)在于省略培養(yǎng)步驟或培養(yǎng)時(shí)間較短，檢測(cè)用時(shí)顯著縮短，但需配備一些精密設(shè)備，且對(duì)檢測(cè)人員有一定技術(shù)要求[2]。

1.微生物檢測(cè)技術(shù)在飲用水檢測(cè)上的應(yīng)用現(xiàn)狀

生活飲用水中微生物指標(biāo)主要有4 種，即總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌等。微生物檢測(cè)需于無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，檢測(cè)室一般用紫外線燈進(jìn)行消毒，樣品處理時(shí)所應(yīng)用的儀器、器皿等均要經(jīng)過(guò)高壓滅菌。對(duì)培養(yǎng)基的制備尤其重視，將所需藥劑混勻后需做好消毒處理[3]。就飲用水檢測(cè)的實(shí)際情況而言，應(yīng)用快速測(cè)試板更經(jīng)濟(jì)實(shí)惠、簡(jiǎn)便快速，故首選此方法對(duì)飲用水進(jìn)行生物檢測(cè)。

2.快速測(cè)試板檢測(cè)原理及具體開展步驟

2.1 快速測(cè)試板檢測(cè)原理

快速測(cè)試板為一種預(yù)先配置成的培養(yǎng)基產(chǎn)品，由營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基、吸水凝膠等兩部分組成。營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基根據(jù)特異性的酶底物反應(yīng)可于自然環(huán)境下對(duì)不同的微生物做出鑒定，還能有效檢測(cè)共存的多菌種微生物。培養(yǎng)基顯色的原理為微生物在代謝過(guò)程中可生成的一種酶，其可和顯色底物發(fā)生作用。顯色底物組分有產(chǎn)色基因、微生物的一些可代謝物質(zhì)，產(chǎn)色基因受到特異性酶的作用會(huì)有一定顏色出現(xiàn)，通過(guò)對(duì)菌落顏色進(jìn)行觀察，從而有利于鑒別菌種[4]。有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[5]，應(yīng)用顯色培養(yǎng)基對(duì)微生物進(jìn)行篩查，其反應(yīng)靈敏性高于傳統(tǒng)培養(yǎng)基，可提高菌落計(jì)數(shù)準(zhǔn)確度及效率。

2.2 具體開展步驟

應(yīng)用快速測(cè)試板，可縮減樣品處理、消毒及培養(yǎng)基制備等操作過(guò)程。在提取到水樣后，于無(wú)菌環(huán)境下將快速測(cè)試板置于操作臺(tái)上。打開上層膜后，用經(jīng)過(guò)消毒處理的吸管吸取水樣1mL并將之滴到紙片上，再蓋好上層膜，靜置至培養(yǎng)基充分凝固，一般需10s 左右。疊好測(cè)試片后放于原自封袋內(nèi)，封上袋口，透明面向上水平放于恒溫箱中。按照檢測(cè)項(xiàng)目實(shí)際情況，設(shè)定時(shí)間及溫度進(jìn)行培養(yǎng)，最后通過(guò)菌落顏色及特征加以鑒別。

3.快速測(cè)試板的運(yùn)用

將快速測(cè)試板應(yīng)用到飲用水微生物檢驗(yàn)中，取500 份水樣進(jìn)行4 種菌體的分批檢驗(yàn)，且對(duì)25 份水樣進(jìn)行了精密度試驗(yàn)，及以傳統(tǒng)方法做對(duì)照的試驗(yàn)。

3.1 菌落總數(shù)檢測(cè)

參照《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》并采用平皿計(jì)數(shù)法對(duì)菌落總數(shù)進(jìn)行測(cè)定，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上放置樣品，并于有氧條件下36 ℃培養(yǎng)48h，通過(guò)肉眼觀察獲知樣品中所含菌落數(shù)。菌落總數(shù)測(cè)試板使用原理同國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)一致，先采集水樣1mL，于測(cè)試板上涂抹營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，將四唑紅作為脫氫酶指示劑并將其添加進(jìn)去，菌落顯現(xiàn)紅色，從而可提高計(jì)數(shù)效率，并有助于提升其準(zhǔn)確度[6]。

3.2 總大腸菌群檢測(cè)

在37℃條件下培養(yǎng)24h 能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭陰性無(wú)芽孢桿菌被稱為總大腸菌群。按照生活飲用水水質(zhì)指標(biāo)檢測(cè)方法，對(duì)于此類菌群檢測(cè)方法主要有多管法、濾膜法、酵底物法等3 種。

3.3 耐熱大腸菌群檢測(cè)

在44.5℃條件下仍可生長(zhǎng)并發(fā)酵乳糖的大腸菌群則為耐熱大腸菌。故通過(guò)增加此菌群的培養(yǎng)溫度，可對(duì)來(lái)自自然環(huán)境及糞便中的大腸菌群做出有效區(qū)分。目前，耐熱大腸菌群的檢測(cè)方法主要有濾膜法、多管法等2 種。

3.4 大腸埃希氏菌檢測(cè)

此菌群又被稱為大腸桿菌，對(duì)人、動(dòng)物具有較強(qiáng)的致病性，尤其是嬰幼兒、幼畜，極易導(dǎo)致其腹瀉或患敗血癥。根據(jù)國(guó)家《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》，通過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)水樣中有總大腸菌群存在時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步檢測(cè)是否存在大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群這2 種菌群；如未發(fā)現(xiàn)有總大腸菌群存在，則無(wú)需對(duì)上述2 種菌群進(jìn)行檢測(cè)[7]。大腸埃希氏菌檢測(cè)的方法同國(guó)標(biāo)規(guī)定的檢測(cè)總大腸菌群方法一致。

4.總結(jié)

水資源污染是當(dāng)下我國(guó)面臨的重要問(wèn)題。為保證居民飲水安全，對(duì)飲用水進(jìn)行微生物檢驗(yàn)十分有必要?？焖贉y(cè)試板在飲用水微生物檢驗(yàn)中應(yīng)用，可很好地解決既往使用傳統(tǒng)方法培養(yǎng)基批次不同、制備條件不同等所帶來(lái)的問(wèn)題。同時(shí)檢測(cè)操作更加便捷，取樣更加便利。此外，還可減少檢測(cè)費(fèi)用，縮短檢測(cè)時(shí)間，并提高檢測(cè)準(zhǔn)確度。