劉小妹 楊媛媛 胡靜 任慧 崔小敏 陶宏迅 陳志永

摘 要 目的：鑒定馮了性風濕跌打藥酒的化學成分。方法：采用超高效液相色譜-四極桿-靜電場軌道阱高分辨質譜聯(lián)用技術（UPLC-Q-Exactive-MS）。色譜柱為Thermo Accucore aQ RP18，流動相為0.1%甲酸水溶液-甲醇（梯度洗脫），流速為0.3 mL/min，柱溫為30 ℃，進樣量為2 μL。離子源為加熱電噴霧離子源;離子模式為正、負離子模式;鞘氣、輔助氣為氮氣;正離子模式的噴霧電壓為3.5 kV，毛細管加熱溫度為350 ℃，鞘氣壓力為35 psi，輔氣壓力為15 arb，離子源加熱溫度為320 ℃;負離子模式的噴霧電壓為3.2 kV，毛細管加熱溫度為350 ℃，鞘氣壓力為35 psi，輔氣壓力為15 arb，離子源加熱溫度為300 ℃。質量軸校準為外標法（質量誤差小于5 ppm），一級質譜掃描范圍為m/z 80.0～1 200.0（分辨率為70 000），二級質譜掃描范圍為m/z 80.0～1 200.0（分辨率為17 500），碰撞電壓為20、40、60 eV。檢索中國知網(wǎng)、維普、PubMed等數(shù)據(jù)庫，收集馮了性風濕跌打藥酒中各味中藥材的化學成分信息，建立化學成分數(shù)據(jù)庫;結合上述成分數(shù)據(jù)庫、相關文獻以及對照品的保留時間和質譜裂解規(guī)律對化合物結構進行鑒定。結果與結論：從馮了性風濕跌打藥酒中共鑒定出59種化合物，包括12種黃酮類（如圣草枸櫞苷、橙皮苷）、8種生物堿（如包公藤丙素或凹脈丁公藤堿、麻黃堿、偽麻黃堿）、9種有機酸類（如綠原酸、隱綠原酸、新綠原酸）、7種香豆素類（如花椒毒酚）、4種酯類、4種氨基酸類和15種其他類（如揮發(fā)油、萜類、酰胺類等）。UPLC-Q-Exactive-MS技術可快速、準確地鑒別馮了性風濕跌打藥酒中的化學成分。

關鍵詞 馮了性風濕跌打藥酒;超高效液相色譜-四極桿-靜電場軌道阱高分辨質譜聯(lián)用技術;化學成分;鑒定

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To identify the chemical constituents of Fengliaoxing fengshi dieda wine.? METHODS： An ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole-electrostatic field orbital trap high-resolution mass spectrometry （UPLC-Q-Exactive- MS） technique was used for identifying chemical constituents of Fengliaoxing fengshi dieda wine. The determination was performed on Thermo Accucore aQ RP18 column with mobile phase consisted of 0.1% formic acid-methanol （gradient elution） at the flow rate of 0.3 mL/min. The column temperature was 30 ℃， and the sample size was 2 μL. HESI source was adopted， ion mode was positive and negative ion mode， nitrogen as sheath gas and auxiliary gas. The positive ion mode had spray voltage of 3.5 kV， capillary heating temperature of 350 ℃， sheath gas pressure of 35 psi， auxiliary gas pressure of 15 arb， and ion source heating temperature of 320 ℃. The negative ion mode had spray voltage of 3.2 kV， capillary heating temperature of 350 ℃，? sheath gas pressure of 35 psi， auxiliary gas pressure of 15 arb， and ion source heating temperature of 300 ℃. The mass axis was calibrated by external standard method （mass error less than 5 ppm）. The scanning range of the first mass spectrometry was m/z 80.0-1 200.0 （the resolution was 70 000）， the scanning range of secondary mass spectrometry was m/z 80.0-1 200.0 （the resolution was 17 500）， and the collision voltage was 20， 40， 60 eV. Retrieved from CNKI， VIP， PubMed and other database， the chemical constituents information of each Chinese traditional medicine in Fengliaoxing fengshi dieda wine were collected to establish chemical constituents database. The structure of the compounds was identified on the basis of above constituents database， the relevant literature， retention time of reference substance and MS fragmentation regularity. RESULTS & CONCLUSIONS： Fifty-nine compounds were identified in Fengliaoxing fengshi dieda wine， including 12 flavones （e.g. neoeriocitrin， hesperidin.）， 8 alkaloids （e.g. baogongteng C or erycibellin， ephedrine，pseudoephedrine）， 9 organic acids （e.g. chlorogenic acid， cryptochlorogenic acid， neochlorogenic acid）， 7 coumarins （e.g. xanthotoxol）， 4 esters， 4 amino acids， and 15 other categories （including volatile oils， terpenes， amides）. UPLC- Q-Exactive-MS technology can quickly and accurately identify the chemical constituents in Fengliaoxing fengshi dieda wine.

KEYWORDS? ?Fengliaoxing fengshi dieda wine; UPLC-Q- Exactive-MS; Chemical constituents; Identification

馮了性風濕跌打藥酒是傳承400余年的傳世名方[1]，該藥原方僅有丁公藤、麻黃、桂枝、陳皮、黃精等5味中藥材，經(jīng)多次修改后，方中添加了具有祛風活絡功效的中藥，現(xiàn)已演變成含有27味中藥材的復方，但仍以丁公藤、麻黃、桂枝為主[2]。馮了性風濕跌打藥酒被收載于2015年版《中國藥典》（一部），方中丁公藤祛風濕為方中君藥，配以桂枝、麻黃、羌活、蠶沙、白芷發(fā)散風寒、祛風濕、舒筋絡，香附、木香、厚樸、枳殼、陳皮、蒼術、苦杏仁、豬牙皂行氣、燥濕、化痰，茴香、當歸、川芎、乳香、沒藥、五靈脂、牡丹皮溫經(jīng)、活血、祛瘀，白術、山藥、補骨脂、黃精、菟絲子、澤瀉補肝腎、強腰膝[3-4]，主要用于臨床治療風寒濕痹、手足麻木、跌撲損傷、瘀滯腫痛等癥[5]。現(xiàn)代藥理研究表明，馮了性風濕跌打藥酒具有改善微循環(huán)、抗炎消腫等作用[6]。

目前，對于馮了性風濕跌打藥酒的研究主要集中在含量測定方面[7]。但由于其組方構成復雜、化學成分眾多、分析方法單一，且尚未有關于該藥化學成分分析的報道。近年來，液質聯(lián)用技術在中藥化學成分系統(tǒng)分析、快速辨識領域中得到了越來越廣泛的應用，具有選擇性強、靈敏度高、分離能力好等優(yōu)點，適用于復雜體系的成分分析，并能夠提供化合物的大量結構信息，可彌補紫外檢測的定量靈敏度不高以及高效液相色譜無法對“全成分”定性分析的不足[8]。為此，本研究采用超高效液相色譜-四極桿-靜電場軌道阱高分辨質譜聯(lián)用技術（UPLC-Q-Exactive-MS）對馮了性風濕跌打藥酒的化學成分進行鑒別，旨在為其藥效物質辨識、質量控制、作用機制研究提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Q-Exactive-Focus型靜電場軌道阱高分辨質譜系統(tǒng)（包括離子源、離子透鏡系統(tǒng)、質量分析器、高能碰撞池、檢測器）和UltiMate 3000型UPLC系統(tǒng)（包括分離單元、檢測器、Chromeleon 7色譜工作站）均由美國Thermo Fisher Scientific公司提供;KQ-400DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;HH-S6A型電熱恒溫水浴鍋（北京科偉永興儀器有限公司）;BS210S型、Max210g型萬分之一電子分析天平，BT25S、Max21g型十萬分之一電子分析天平[賽多利斯科學儀器（北京）有限公司]。

1.2 藥品與試劑

東莨菪苷對照品（批號：16040805）、東莨菪內酯對照品（批號：161208）、傘形花內酯對照品（批號：18010202）、秦皮乙素對照品（批號：18092803）、咖啡酸對照品（批號：17122804）、綠原酸對照品（批號：1701904）、新綠原酸對照品（批號：17062003）、隱綠原酸對照品（批號：17061401）、異綠原酸A對照品（批號：19061201）、異綠原酸B對照品（批號：17121201）、異綠原酸C對照品（批號：18070401）均購自上海圻明生物科技有限公司，純度均大于98%;馮了性風濕跌打藥酒（批號：170114，規(guī)格：500 mL）購自國藥集團馮了性（佛山）藥業(yè)有限公司;甲酸[LC-MS級，批號：182088，賽默飛世爾科技（中國）有限公司];甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純凈水。

2 方法與結果

2.1 試驗條件

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Thermo Accucore aQ RP18（150 mm×2.1 mm，2.6 μm）;流動相：0.1%甲酸水溶液（A）-甲醇（B），梯度洗脫 （0～5 min，5%A;5～60 min，5%A→95%A）;流速：0.3 mL/min;柱溫：30 ℃;進樣量：2 μL。

2.1.2 質譜條件 離子源：加熱電噴霧離子源（HESI）;離子模式：正、負離子模式;鞘氣、輔助氣：氮氣。正離子模式——噴霧電壓：3.5 kV，毛細管加熱溫度：350 ℃，鞘氣壓力：35 psi，輔氣壓力：15 arb，離子源加熱溫度：320 ℃;負離子模式——噴霧電壓：3.2 kV，毛細管加熱溫度：350 ℃，鞘氣壓力：35 psi，輔氣壓力：15 arb，離子源加熱溫度：300 ℃。質量軸校準：外標法（質量誤差小于5 ppm）;一級質譜掃描范圍：m/z 80.0～1 200.0，分辨率：70 000;二級質譜掃描范圍：m/z 80.0～1 200.0，分辨率：17 500;碰撞電壓：20、40、60 eV。

2.2 溶液的制備

2.2.1 單一對照品溶液 精密稱取東莨菪苷、東莨菪內酯、傘形花內酯、秦皮乙素、咖啡酸、綠原酸、新綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C對照品適量，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，混勻，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得適宜質量濃度的單一對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取馮了性風濕跌打藥酒5 mL，置于蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘渣加80%甲醇溶解，稀釋并用80%甲醇定容至50 mL量瓶中，混勻;精密量取5 mL，置于25 mL量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，混勻，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 化學成分數(shù)據(jù)庫的建立

檢索中國知網(wǎng)、維普網(wǎng)、PubMed等數(shù)據(jù)庫，收集馮了性風濕跌打藥酒中組方藥材的化學成分信息。以麻黃[9-11]、枳殼[12-14]、桂枝[15-16]、丁公藤[17-20]、陳皮[21-23]等（由于其余藥材用量比例極少，且前期預試驗發(fā)現(xiàn)這些藥材相應的一級質譜信號響應不強，故僅檢索上述5味主要藥材）為主，建立包括化合物名稱、分子式、相對分子量的化學成分數(shù)據(jù)庫。采用Xcalibur 2.0軟件計算相關化合物的[M+H]+、[M-H]-準分子離子荷質比。

2.4 化合物成分的鑒定

取“2.2.1”項下各單一對照品溶液適量，按“2.1”項下試驗條件進樣測定，記錄其質譜信息（圖略）。取“2.2.2”項下供試品溶液適量，同法進樣測定，得馮了性風濕跌打藥酒化學成分的總離子流圖（見圖1）。選擇分子量實測值與理論值誤差小于5 ppm的分子與Xcalibur 2.0軟件中的數(shù)據(jù)庫進行匹配[24]，對所得化合物的二級質譜碎片離子信息進行分析，同時結合對照品的質譜裂解規(guī)律，參考“2.3”項下化學成分數(shù)據(jù)庫和相關文獻對化合物進行推測和結構鑒定。結果，馮了性風濕跌打藥酒共推測和鑒定出59種化合物，其中生物堿類成分8種、黃酮類成分12種、有機酸類成分9種、香豆素類成分7種、酯類成分4種、氨基酸類成分4種，其他類成分15種，詳見表1（表中，“*”表示與對照品對比，其余均為與所建數(shù)據(jù)庫及文獻對比;Glc表示葡萄糖基，Rha表示鼠李糖基）。

2.5 化合物裂解規(guī)律及特征

2.5.1 生物堿類 生物堿類成分是一類含氮的堿性有機化合物，大多數(shù)含有復雜的環(huán)狀結構[25]。本研究共鑒別出8種生物堿類成分，其中化合物11、13、14、15來源于麻黃;化合物8來源于丁公藤;化合物4、5、6來源于枳殼。

以化合物8為例，在正離子檢測模式下其準分子離子為m/z 144.101 8[M+H]+，推測可能的分子式為C7H13NO2。高能量通道下產(chǎn)生二級離子碎片，其中環(huán)取代基上脫去1分子H2O后形成碎片離子m/z 126.090 9 [M-H2O+H]+，再脫去1分子H2O形成碎片離子m/z 108.080 6[M-2H2O+H]+;碎片離子m/z 81.100 6推斷由m/z 144.101 9的仲胺基α斷裂脫去C2H7O2所得。根據(jù)該裂解規(guī)律并參考化學成分數(shù)據(jù)庫及相關文獻[26]，推測化合物8為包公藤丙素或凹脈丁公藤堿，其可能的裂解途徑見圖2。

以化合物13、14為例，在正離子檢測模式下其準分子離子均為m/z 166.122 5[M+H]+，推測可能的分子式為C10H15NO。高能量通道下產(chǎn)生二級離子碎片，其中m/z 148.111 8[M-H2O+H]+為母離子脫去H2O后產(chǎn)生的碎片，m/z 133.088 4[M-H2O-CH3+H]+為脫去H2O后再脫去CH3產(chǎn)生的碎片離子，m/z 117.069 8[M-H2O-CH3-NH2+H]+為脫去H2O后再脫去CH3NH2產(chǎn)生的碎片離子。根據(jù)該裂解規(guī)律并參考化學成分數(shù)據(jù)庫，并鑒于麻黃堿的出峰時間早于偽麻黃堿[27]，由此推測化合物13為麻黃堿，化合物14為偽麻黃堿。麻黃堿裂解途徑見圖3。

根據(jù)生物堿類化合物裂解的碎片信息，推測該類成分在質譜中發(fā)生高能碰撞時，可能會斷裂羥基取代基，脫去H2O，或脫去CH3、CH3NH2等中性碎片離子或發(fā)生重排。

2.5.2 黃酮類 黃酮類成分常與糖結合成苷或以游離態(tài)（苷元）的形式存在，其母核為2-苯基色原酮[14]。本研究共鑒別出12種黃酮類成分，分別為化合物30～31、34～35、37～40、52、54、56～57，麻黃、枳殼、陳皮為上述成分的主要來源藥材。

以化合物31為例，在負離子檢測模式下其準分子離子為m/z 595.166 6[M-H]-，推測可能的分子式為C27H32O15。高能量通道下產(chǎn)生二級離子碎片，其中碎片離子m/z 287.056 4[M-Rha-Glc-H]-比準分子離子質荷比小308，推測是丟失了糖基碎片（-Rha和-Glc）;碎片離子m/z 151.003 5[M-Rha-Glc-C8H8O2-H]-推測由母離子丟失糖基片段后，發(fā)生C環(huán)的逆狄爾斯-阿爾德反應（RDA）裂解丟失C8H8O2所得的殘余碎片離子。根據(jù)該裂解規(guī)律并參考化學成分數(shù)據(jù)庫及相關文獻[28]，推測化合物31為圣草枸櫞苷，其可能的裂解途徑見圖4。

以化合物38為例，其在正、負離子模式下響應均較好。正離子模式下一級質譜結果顯示，其準分子離子為m/z 611.196 8[M+H]+;二級質譜結果顯示，碎片離子m/z 303.085 9[M-Rha-Glc+H]+的豐度為100%，推測是丟失了糖基碎片（-Rha和-Glc）;碎片離子m/z 195.028 6[M-Rha-Glc-C6H4O2+H]+推測由m/z 303.085 9碎片離子發(fā)生C環(huán)的RDA裂解丟失C6H4O2碎片所得;碎片離子m/z 177.054 4[M-Rha-Glc-C6H6O3+H]+由m/z 303.085 9在發(fā)生C環(huán)RDA裂解的同時，B環(huán)的支鏈取代基發(fā)生聚合，丟失C6H6O3碎片所得;碎片離子m/z 153.018 1[M-Rha-Glc-C9H10O2+H]+為m/z 303.085 9發(fā)生C環(huán)裂解后殘余的A環(huán)結構。負離子模式下一級質譜結果顯示，其準分子離子為m/z 609.182 5[M-H]-;二級質譜結果顯示，碎片離子m/z 301.071 6[M-Rha-Glc-H]-的豐度為100%，推測為丟失糖基碎片所得。根據(jù)該裂解規(guī)律，結合其相對分子量及一、二級質譜結果推測化合物38為橙皮苷，其可能的裂解途徑見圖5。

根據(jù)黃酮類化合物裂解的碎片信息，推測該類成分在質譜條件下主要的斷裂方式包括CH3、H2O、CO2、CO等中性離子的丟失、糖基（-Rha和-Glc）鍵的斷裂及C環(huán)的RDA裂解。

2.5.3 有機酸類 有機酸類成分是丁公藤、麻黃、桂枝中的主要化合物。該類成分在負離子模式下能產(chǎn)生較高豐度的準分子離子峰;在二級質譜中，由于結構中含有羥基、羧基和特征基團，因此能產(chǎn)生豐度較高的[M-H2O-H]-、[M-CO-H]-、[M-CO2-H]-、[M-COOH-H]-等碎片離子峰[29]。馮了性風濕跌打藥酒中的有機酸類化學成分主要包括單咖啡酰奎尼酸類化合物和雙咖啡?？崴犷惢衔颷30]。本研究共鑒別出9種有機酸類化合物，分別為化合物12、16、24～25、33、36、43、45、53，麻黃、丁公藤、桂枝為上述成分的主要來源藥材。

單咖啡酰奎尼酸類化合物主要由1分子的咖啡酸和1分子的奎尼酸通過酯化縮合生成，其一級質譜中可見較高豐度的準分子離子峰;二級質譜結果顯示，在酯鍵斷裂后，單咖啡?？崴犷惢衔锸タХ弱；玫娇崴岬碾x子峰m/z 191.056 0[M-C9H6O3-H]-、咖啡酸的離子峰m/z 179.034 8[M-C7H10O5-H]-;奎尼酸脫水后得到 m/z 173.045 2[M-C9H6O3-H2O-H]-;此外，咖啡酸脫羧后得到m/z 135.045 0[M-C7H10O5-CO2-H]-的特征碎片。綠原酸、隱綠原酸、新綠原酸均屬于單咖啡酰奎尼酸類化合物，二級質譜裂解規(guī)律與上述相同，不同之處在于取代基的位置可能會影響碎片離子的相對豐度。據(jù)文獻報道，綠原酸二級裂解碎片強度以m/z 191最強，m/z 179、135強度相當，且極弱;新綠原酸裂解強度為m/z 191>m/z 179>m/z 135;隱綠原酸裂解強度以m/z 191最強，m/z 173、179次之且強度相當，m/z 135較弱小[30]。參考上述文獻及單咖啡?？崴犷惢衔锏囊患墶⒍壻|譜裂解規(guī)律，結合對照品初步鑒定化合物24、25、16分別為綠原酸、隱綠原酸、新綠原酸。

以化合物25為例，該化合物由1分子的咖啡酸和1分子的奎尼酸酯化生成的縮酚酸[26]，在質譜條件下易出現(xiàn)酯鍵的斷裂。一級質譜結果顯示，在負離子模式下響應較好，得準分子離子m/z 353.087 6[M-H]-，推測其可能的分子式為C16H18O9。該化合物的二級離子碎片信息為m/z 191.056 0、173.045 2、179.034 8、135.045 0，裂解途徑為化合物在酯鍵斷裂后，得到奎尼酸的離子峰m/z 191.056 0[M-C9H6O3-H ]-;奎尼酸繼續(xù)脫去H2O生成m/z 173.045 2[M-C9H6O3-H2O-H]-;m/z 179.034 8[M-C7H10O5-H ]-為斷裂后所得咖啡酸的碎片離子，m/z 135.045 0[M-C7H10O5-CO2-H ]-為咖啡酸繼續(xù)脫去CO2生成的碎片離子。根據(jù)化合物精確相對分子量、斷裂途徑并與對照品比對，鑒定化合物25為隱綠原酸，其可能的裂解途徑見圖6。

雙咖啡?？崴犷惢衔锸怯?分子的咖啡酸和1分子的奎尼酸通過酯化縮合生成[26]。異綠原酸A、B、C均屬于雙咖啡酰奎尼酸類化合物，其結構比單咖啡酰奎尼酸類多1分子的咖啡?；?，因此具有相似的結構碎片。在負離子模式下，異綠原酸A、B、C的一級質譜準分子離子均為m/z 515.119 3[M-H]-;二級質譜結果顯示，3個化合物均有失去1分子肉桂酸酯的碎片離子m/z 353.086 5[M-C9H6O3-H]-，該碎片具有和單咖啡酰奎尼酸類化合物相似的裂解途徑，碎片離子m/z 191或m/z 173表明存在奎尼酸基團，碎片離子m/z 179或m/z 135表明存在咖啡酸基團，提示內部取代基位置的不同可能是區(qū)別的關鍵點。根據(jù)該裂解規(guī)律，經(jīng)與對照品比對后推測化合物36、33、43分別為異綠原酸A、B、C（其裂解途徑圖略）。

2.5.4 香豆素類 本研究共鑒別出7種香豆素類化合物，其結構簡單，取代基均在苯環(huán)上，屬于簡單香豆素類化合物，分別為化合物21、23、28～29、48、51、58，丁公藤、枳殼為上述成分的主要來源藥材。其中，化合物21秦皮乙素和5，7-二羥基香豆素互為同分異構體，秦皮乙素來源于丁公藤，5，7-二羥基香豆素來源于枳殼。

以化合物29為例，在正離子模式下準分子離子為m/z 193.049 5[M+H]+，推測可能的分子式為 C10H8O4。二級質譜結果顯示，苯環(huán)上的甲氧基丟失甲基后形成碎片離子m/z 178.025 8[M-CH3+H]+，內酯位置處失去CO形成m/z 165.054 5[M-CO+H]+碎片，碎片離子m/z 133.028 2[M-CO-CH3OH+H]+推斷由m/z 193.049 5[M+H]+內酯環(huán)上丟失CO，苯環(huán)上甲氧基上丟失CH3并脫去鄰位的OH形成的特征碎片。根據(jù)該裂解規(guī)律，經(jīng)與對照品比對后確定化合物29為東莨菪內酯，其可能的裂解途徑見圖7。

以化合物51為例，在正離子模式下其準分子離子為m/z 203.033 7[M+H]+，推測可能的分子式為 C11H6O4。二級質譜結果顯示，分子離子峰丟失1分子CO得到碎片離子m/z 175.039 0[M-CO+H]+，丟失2分子CO、3分子CO分別得到碎片離子m/z 147.043 8[M-2CO+H]+、m/z 119.085 6[M-3CO+H]+，丟失1分子CO2得到碎片離子m/z 159.044 0[M-CO2+H]+，丟失1分子CO2和1分子CO得到碎片離子m/z 131.048 4[M-CO2-CO+H]+。根據(jù)該裂解規(guī)律并參考化合物成分數(shù)據(jù)庫及相關文獻[12]，推測化合物51為花椒毒酚（其裂解途徑圖略）。

在香豆素類成分的二級裂解碎片中發(fā)現(xiàn)，其母核上的內酯位置有相似的中性基因丟失，主要為丟失CO或CO2至氧失盡;同時，母核苯環(huán)上的取代基，烷基先丟失，有甲氧基取代時易丟失甲基產(chǎn)生碎片，有較大基團時易發(fā)生氫重排而產(chǎn)生中性基因丟失。

2.5.5 其他 （1）酯類成分。本研究共鑒別出4種酯類成分，分別為化合物20、44、50、59，丁公藤、枳殼、陳皮為上述成分的主要來源藥材。（2）氨基酸類成分。本研究共鑒別出4種氨基酸類成分，分別為化合物1～3、7，枳殼為上述成分的主要來源藥材。（3）其他類化合物。本研究共鑒別出15種其他類化合物，包括4種揮發(fā)油類（化合物10、18～19、26），2種萜類（化合物47、49），2種酰胺類（化合物41～42），1種酚類（化合物46），6種不確定分類的成分（化合物9、17、22、27、32、55），桂枝、枳殼、丁公藤、陳皮、麻黃為上述成分的主要來源藥材（裂解途徑略）。

3 討論

本研究前期分別考察了60%甲醇、70%甲醇、80%甲醇、無水甲醇等不同溶劑的溶解效果。結果發(fā)現(xiàn)，以80%甲醇為溶劑時，儀器響應較高，圖譜基線較為平穩(wěn)，得到峰數(shù)較多，故選擇80%甲醇為溶劑。同時，又考察了水-甲醇、0.1%甲酸水溶液-甲醇和0.1%甲酸水溶液-乙腈等不同流動相系統(tǒng)。結果發(fā)現(xiàn)，流動相中加入少量的酸，能有效改善峰形，提高分離度，且甲醇、乙腈均未影響色譜峰峰形，故選擇0.1%甲酸水溶液-甲醇為流動相進行梯度洗脫。

UPLC-Q-Exactive-MS技術能通過正負離子切換和全掃描模式進行測定，根據(jù)精確質量進行定性研究，再根據(jù)二級質譜數(shù)據(jù)提高研究的準確性[31]。為更好地檢測與解析樣品成分和低豐度的化合物，鑒別更多的分子離子峰，本研究采用正、負離子模式進行監(jiān)測，該方法不僅可系統(tǒng)、全面地對馮了性風濕跌打藥酒中的主要活性成分進行快速識別，還可對有效成分化學譜進行探索，為其藥效物質、質量控制及作用機制研究奠定了基礎。

本研究共鑒別出59種化合物，包括12種黃酮類、8種生物堿、9種有機酸類、7種香豆素類、4種酯類、4種氨基酸類、15種其他類（揮發(fā)油、萜類、酰胺類等）。有部分文獻報道的化合物（如綠原酸甲酯、綠原酸乙酯）[18-19]在正負離子模式下均未被發(fā)現(xiàn)，筆者推測這可能與供試品的處理方法以及試驗條件不同有關，后續(xù)有待進一步驗證。此外，筆者在分析樣品的總離子流圖發(fā)現(xiàn)，一些響應較強的色譜峰也未在已有數(shù)據(jù)庫中找到對應的化合物，提示馮了性風濕跌打藥酒還有一些未知的成分需后續(xù)研究開發(fā)。

綜上所述，所建方法快速、準確，可用于鑒別馮了性風濕跌打藥酒的化學成分。

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（收稿日期：2020-06-02 修回日期：2020-09-09）

（編輯：陳 宏）