羅杰，劉維佳

肺動(dòng)脈高壓（pulmonary arterial hypertension，PAH）是由多種病因引起的以肺動(dòng)脈壓力和肺血管阻力進(jìn)行性增高為特征的疾病［1］。肺血管重構(gòu)是PAH重要的病理學(xué)改變，導(dǎo)致肺血管重構(gòu)的關(guān)鍵在于肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（pulmonary arterial smooth muscle cells，PASMCs）的異常增殖［2］。研究表明，炎癥因子白細(xì)胞介素（IL）-6在促血管重構(gòu)方面發(fā)揮重要作用［3］。此外，GATA6是唯一表達(dá)于血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells，VSMC）的GATA家族轉(zhuǎn)錄因子，在細(xì)胞的增殖和分化中發(fā)揮調(diào)控作用。本研究通過血小板源性生長(zhǎng)因子（platelet derived growth factor，PDGF）-BB誘 導(dǎo) 原 代 大 鼠PASMCs增殖，檢測(cè)IL-6及GATA6表達(dá)水平變化，初探兩者在PASMCs增殖中的作用及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物8周齡SPF級(jí)雄性SD大鼠2只，體質(zhì)量250～300 g，購自第三軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

1.1.2 主要試劑DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基、胎牛血清購自美國GIBCO公司；青-鏈霉素、胰蛋白酶購自美國Hyclone公司；Ⅰ型膠原酶粉購自美國Sigma公司；PDGF-BB為美國Peprotech產(chǎn)品；CCK8試劑為日本Dojindo產(chǎn)品；細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒、BCA試劑盒為碧云天產(chǎn)品；IL-6、GATA6、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）單克隆抗體，山羊抗小鼠IgG（Cy3）二抗為美國Abcam產(chǎn)品；GAPDH抗體、山羊抗兔二抗為武漢三鷹產(chǎn)品；反轉(zhuǎn)錄試劑盒為美國Thermo產(chǎn)品；RNA提取試劑盒、熒光Mix為日本TaKaRa產(chǎn)品。

1.1.3 主要儀器CO2培養(yǎng)箱、超微量紫外可見分光光度儀、酶標(biāo)檢測(cè)儀（美國Thermo公司），熒光倒置顯微鏡（日本Nikon公司），熒光定量PCR儀（美國Bio-Rad公司），臺(tái)式冷凍離心機(jī)（美國Beckman公司），超凈工作臺(tái)（蘇凈安泰公司）。

1.2 方法

1.2.1 PASMCs原代培養(yǎng)將大鼠麻醉后，取出心肺組織，仔細(xì)剝離出主動(dòng)脈干和左右肺動(dòng)脈，于體視顯微鏡下去除動(dòng)脈外膜結(jié)締組織，用顯微剪縱向剪開肺動(dòng)脈，使內(nèi)膜朝上，用眼科彎鑷刮除內(nèi)膜，將中膜剪成1 mm2細(xì)小組織塊，轉(zhuǎn)移至預(yù)先盛有0.2%Ⅰ型膠原酶的離心管中，將離心管放入CO2培養(yǎng)箱，每20 min搖動(dòng)一次，關(guān)注消化狀態(tài)，消化2～3 h肺動(dòng)脈組織碎塊消化成為透明絮狀物，1 000 r/min離心5 min，棄上清，加入5 mL含20%FBS的DMEM培養(yǎng)基，吹打混勻移入25 mm2培養(yǎng)瓶，于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3 d后可見少量細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，6 d細(xì)胞大量增殖，9 d細(xì)胞呈“峰谷狀”生長(zhǎng)達(dá)到90%融合可進(jìn)行細(xì)胞傳代，每3 d換一次培養(yǎng)基，傳至3～10代可用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 臺(tái)盼藍(lán)檢測(cè)PASMCs活力消化后收集細(xì)胞，細(xì)胞懸液與0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液以9∶1混勻，取1滴用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)存活率?；罴?xì)胞無色透明、形態(tài)正常，死細(xì)胞被染成藍(lán)色、體積脹大。細(xì)胞存活率（%）=活細(xì)胞總數(shù)/觀察的細(xì)胞總數(shù)×100%。

1.2.3 培養(yǎng)細(xì)胞的鑒定采用倒置顯微鏡進(jìn)行活細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察。α-SMA免疫熒光染色鑒定：將原代細(xì)胞消化后接種于24孔板，待細(xì)胞融合到60%～70%時(shí)進(jìn)行免疫熒光染色，PBS漂洗3次，室溫下4%多聚甲醛固定細(xì)胞15 min，PBS漂洗，0.25%TritonX-100透化處理15 min，PBS漂洗3次，加入1%BSA常溫孵育30 min，用小鼠α-SMA單克隆抗體，稀釋比例為1∶200，室溫孵育1 h，PBS漂洗5次，每次5 min，Cy3標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG抗體，稀釋比例為1∶100，室溫避光孵育2 h（產(chǎn)生紅色熒光），PBS漂洗5次，每次5 min，DAPI室溫下染色5 min（產(chǎn)生藍(lán)色熒光），于倒置熒光顯微鏡下觀察染色情況，以不加一抗孵育的細(xì)胞為對(duì)照。

1.2.4 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖將體外分離培養(yǎng)的PASMCs分為6組：0μg/L組，含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基孵育細(xì)胞及15、30、45、60、75μg/L組，分別使用15、30、45、60、75μg/L PDGF-BB孵育細(xì)胞。將細(xì)胞按2×103/孔接種于96孔板，待細(xì)胞貼壁，加無血清DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h同步化，棄培養(yǎng)液，PBS洗2次，按分組要求處理細(xì)胞12、24、48 h，棄培養(yǎng)液，每孔加入100μL培養(yǎng)液、10 mL CCK-8溶液，置于CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)2 h，用酶標(biāo)儀輕柔振蕩1 min，測(cè)定在450 nm處的光密度（OD）值，參照波長(zhǎng)為650 nm，每組設(shè)6復(fù)孔、3空白孔。

1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PDGF-BB對(duì)PASMCs細(xì)胞周期的影響誘導(dǎo)細(xì)胞增殖12、24、48 h后將細(xì)胞分為2組：對(duì)照組（含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基）；PDGF-BB組（30μg/L PDGFBB）。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞培養(yǎng)于6孔板，待貼壁，用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h同步化后，加入30μg/L PDGF-BB處理48 h收集細(xì)胞，按試劑盒說明書操作。

1.2.6 Western blot檢測(cè)IL-6、GATA6的蛋白表達(dá)用RIPA裂解細(xì)胞提取蛋白，用BCA定量試劑盒檢測(cè)蛋白濃度，SDSPAGE后轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，用5%脫脂奶粉封閉1 h，分別加入IL-6（1∶1 000）、GATA6（1∶1 000）、GAPDH（1∶10 000）一抗，4℃孵育過夜，TBST洗膜后加二抗，室溫孵育1 h，洗膜后ECL發(fā)光液顯影，用Image J軟件分析條帶灰度值，以IL-6/GAPDH、GATA6/GAPDH的比值表示蛋白表達(dá)水平。

1.2.7 qPCR檢測(cè)IL-6、GATA6mRNA的表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞增殖12、24、48 h后取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期PASMCs細(xì)胞，按照試劑盒說明書提取細(xì)胞總RNA，應(yīng)用分光光度計(jì)分別測(cè)定RNA樣品的濃度和純度。按ReverAid First Strand cDNA Synthesis Kit說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。按TB Green Premix Ex TaqTMⅡ說明書進(jìn)行qPCR。引物序列見表1。

Tab.1 Primers used in this study表1本研究中所用引物序列

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。2組間比較用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，多重比較采用LSD法，相關(guān)性行Pearson分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PASMCs形態(tài)觀察培養(yǎng)3 d可見少量細(xì)胞分散貼壁生長(zhǎng)（圖1a）；6 d貼壁細(xì)胞胞質(zhì)延伸，透明度增高，細(xì)胞邊界不清，生長(zhǎng)旺盛，少數(shù)細(xì)胞密集處形成團(tuán)簇（圖1b）；9 d細(xì)胞呈“峰谷狀”生長(zhǎng)，即部分細(xì)胞多層重疊生長(zhǎng)呈“峰”狀，細(xì)胞層數(shù)少的部分呈“谷”狀（圖1c）。

Fig.1 Image of rat PASMCs under inverted phase contrast microscope(×100)圖1大鼠PASMCs在倒置相差顯微鏡下圖像（×100）

標(biāo)準(zhǔn)去骨瓣減壓聯(lián)合內(nèi)減壓術(shù)對(duì)大面積腦梗死患者血流動(dòng)力學(xué)及預(yù)后的影響

2.2 臺(tái)盼藍(lán)染色結(jié)果共計(jì)約1 220個(gè)細(xì)胞，其中43個(gè)為陽性細(xì)胞（藍(lán)色），細(xì)胞存活率＞96%。

2.3 細(xì)胞免疫熒光染色培養(yǎng)的細(xì)胞強(qiáng)染α-SMA呈紅色熒光，原代細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中充滿紅色的線狀纖維，纖維多為直線呈束狀排列（圖2），在只加Cy3標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG抗體的細(xì)胞中未見紅色熒光，證實(shí)所培養(yǎng)細(xì)胞為平滑肌細(xì)胞。

Fig.2 Image of PASMCs immunofluorescence under inverted fluorescence microscope(×100)圖2 PASMCs免疫熒光在倒置熒光顯微鏡下圖像（×100）

2.4 PDGF-BB誘 導(dǎo)PASMCs增 殖CCK-8細(xì) 胞 增殖檢測(cè)結(jié)果表明，同一水平PDGF-BB刺激PASMCs后，隨著誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞增殖加快，具有一定時(shí)間依賴性。15～60μg/L的PDGF-BB誘導(dǎo)PASMCs 24 h、48 h增殖顯著，其中以30μg/L誘導(dǎo)48 h效果最佳（P＜0.05），見表2。

Tab.2 Effects of different PDGF-BB concentrations on the proliferation at different time points of PASMCs表2不同PDGF-BB水平組對(duì)不同時(shí)點(diǎn)PASMCs增殖的影響 （n=6，OD值，±s）

Tab.2 Effects of different PDGF-BB concentrations on the proliferation at different time points of PASMCs表2不同PDGF-BB水平組對(duì)不同時(shí)點(diǎn)PASMCs增殖的影響 （n=6，OD值，±s）

＊＊P＜0.01；a與0μg/L組比較，b與15μg/L組比較，c與30μg/L組比較，d與45μg/L組比較，e與60μg/L組比較，P＜0.05

組別0μg/L組15μg/L組30μg/L組45μg/L組60μg/L組75μg/L組F 12 h 0.117±0.008 0.123±0.013 0.134±0.006ab 0.129±0.005a 0.126±0.004a 0.121±0.004c 4.039＊＊24 h 0.157±0.014 0.224±0.021a 0.220±0.024a 0.228±0.028a 0.199±0.014ad 0.194±0.034abd 7.721＊＊48 h 0.434±0.031 0.619±0.041a 0.631±0.020a 0.568±0.073ac 0.559±0.040abc 0.466±0.076bcde 14.818＊＊

2.5 PDGF-BB對(duì)PASMCs細(xì)胞周期的影響 流式結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，PDGF-BB組細(xì)胞G1期百分比顯著下降，而S期和G2期百分比明顯增加（均P＜0.01），見表3、圖3。

Tab.3 Effects of 30μg/L PDGF-BB on cell cycles of PASMCs表3對(duì)照組與PDGF-BB組對(duì)PASMCs細(xì)胞周期的影響（n=3，%，±s）

Tab.3 Effects of 30μg/L PDGF-BB on cell cycles of PASMCs表3對(duì)照組與PDGF-BB組對(duì)PASMCs細(xì)胞周期的影響（n=3，%，±s）

＊＊P＜0.01

組別對(duì)照組PDGF-BB組t G1期82.17±0.77 67.58±0.61 25.873＊＊S期11.10±0.64 21.50±0.75 18.269＊＊G2期6.73±0.14 10.92±0.27 24.273＊＊

Fig.3 Proportion of cell cycle after 30μg/L PDGF-BB stimulation of PASMCs for 48 h圖3 30μg/L PDGF-BB刺激PASMCs 48 h后細(xì)胞周期比例情況

2.6 IL-6與GATA6蛋白表達(dá)情況Western blot結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，PDGF-BB組24 h、48 h后IL-6水平明顯增高（P＜0.01），且隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸上升，見圖4、表4。與對(duì)照組相比，PDGFBB組12 h的GATA6水平降低（P＜0.05），且隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)在24 h、48 h表達(dá)進(jìn)一步降低（P＜0.01），見圖4、表5。

2.7IL-6與GATA6mRNA在PDGF-BB誘導(dǎo)PASMCs增殖中的表達(dá)qPCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，在30μg/L PDGF-BB刺激細(xì)胞24 h、48 h后IL-6mRNA的表達(dá)增高，且呈上升趨勢(shì)；GATA6mRNA的表達(dá)降低，且呈下降趨勢(shì)，見表6、7。

Fig.4 IL-6 and GATA6 protein expressions at various time points圖4各時(shí)間點(diǎn)IL-6與GATA6蛋白表達(dá)情況

Tab.4 Expression of IL-6 protein at different time points in control group and PDGF-BB group表4對(duì)照組與PDGF-BB組不同時(shí)點(diǎn)IL-6蛋白的表達(dá)情況 （n=3，±s）

Tab.4 Expression of IL-6 protein at different time points in control group and PDGF-BB group表4對(duì)照組與PDGF-BB組不同時(shí)點(diǎn)IL-6蛋白的表達(dá)情況 （n=3，±s）

＊＊P＜0.01；a與12 h PDGF-BB組比較，b與24 h PDGF-BB組比較，P＜0.05

組別對(duì)照組PDGF-BB組t 12 h 0.10±0.01 0.13±0.02 2.139 24 h 0.11±0.01 0.21±0.02a 8.097＊＊48 h 0.22±0.01 0.27±0.01ab 7.092＊＊F-52.876＊＊

Tab.5 Expression of GATA6 protein at different time points in control group and PDGF-BB group表5對(duì)照組與PDGF-BB組不同時(shí)點(diǎn)GATA6蛋白的表達(dá)情況 （n=3，±s）

Tab.5 Expression of GATA6 protein at different time points in control group and PDGF-BB group表5對(duì)照組與PDGF-BB組不同時(shí)點(diǎn)GATA6蛋白的表達(dá)情況 （n=3，±s）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；a與12 h PDGF-BB組 比 較，b與24 h PDGF-BB組比較，P＜0.05

組別對(duì)照組PDGF-BB組t 12 h 0.44±0.01 0.40±0.01 3.813＊24 h 0.37±0.01 0.13±0.02a 15.424＊＊48 h 0.12±0.01 0.05±0.01ab 7.996＊＊F-514.028＊＊

Tab.6 The IL-6 mRNA expression at different time points in control group and PDGF-BB group表6對(duì)照組與PDGF-BB組不同時(shí)點(diǎn)IL-6 mRNA的表達(dá)情況 （n=3，±s）

Tab.6 The IL-6 mRNA expression at different time points in control group and PDGF-BB group表6對(duì)照組與PDGF-BB組不同時(shí)點(diǎn)IL-6 mRNA的表達(dá)情況 （n=3，±s）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；a與24 h PDGF-BB組比較，P＜0.05

組別對(duì)照組PDGF-BB組t 12 h 1.00±0.09 1.14±0.10 1.776 24 h 1.00±0.07 1.33±0.13 3.853＊48 h 1.00±0.01 1.45±0.12a 6.427＊＊F-5.194＊

Tab.7 Expression of GATA6 mRNA at different time points in control group and PDGF-BB group表7對(duì)照組與PDGF-BB組不同時(shí)點(diǎn)GATA6 mRNA的表達(dá)情況 （n=3，±s）

Tab.7 Expression of GATA6 mRNA at different time points in control group and PDGF-BB group表7對(duì)照組與PDGF-BB組不同時(shí)點(diǎn)GATA6 mRNA的表達(dá)情況 （n=3，±s）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；a與12 h PDGF-BB組比較，P＜0.05

組別對(duì)照組PDGF-BB組t 12 h 1.01±0.14 1.04±0.09 0.297 24 h 1.00±0.04 0.81±0.10a 2.874＊48 h 1.00±0.11 0.67±0.04a 5.006＊＊F-15.466＊＊

2.8IL-6、GATA6表達(dá)與PDGF-BB誘導(dǎo)PASMCs增殖的相關(guān)性分析30μg/L PDGF-BB誘導(dǎo)的PASMCs增殖與IL-6mRNA表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.538，P＜0.05），與GATA6mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.647，P＜0.01）。IL-6與GATA6的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.705，P＜0.01）。

3 討論

3.1 PDGF-BB體外誘導(dǎo)大鼠PASMCs增殖肺動(dòng)脈高壓是一組由多種病因引起的以肺小動(dòng)脈重構(gòu)、肺血管阻力持續(xù)增加為特征的臨床-病理生理綜合征。PASMCs異常增殖是PAH肺小動(dòng)脈重構(gòu)的中心環(huán)節(jié)［4］。PASMCs存在2種表型，即收縮表型（靜止表型）和合成表型（增殖表型），在正常生理?xiàng)l件下PASMCs處于靜止表型，當(dāng)外界因素發(fā)生變化時(shí)，平滑肌細(xì)胞不同表型之間可以相互轉(zhuǎn)化。PDGF是VSMC的最有效促有絲分裂因子，其中最有效的亞型為PDGF-BB，通過與PDGF受體（PDGFR）結(jié)合使PASMCs由靜止表型轉(zhuǎn)化為增殖表型［5］。吳珊珊等［6］通過研究PDGF-BB誘導(dǎo)大鼠PASMCs表型轉(zhuǎn)化中的細(xì)胞骨架變化來探討PASMCs表型轉(zhuǎn)化的機(jī)制。Zhang等［7］以PDGF-BB誘導(dǎo)大鼠PASMCs增殖為模型，研究異槲皮素通過抑制PASMCs增殖對(duì)肺動(dòng)脈高壓的保護(hù)作用。本研究分別采用15、30、45、60、75 μg/L PDGF-BB刺激體外培養(yǎng)的原代大鼠PASMCs，觀察到15～60μg/L的PDGF-BB誘導(dǎo)24 h、48 h后PASMCs增殖顯著，其中以30μg/L誘導(dǎo)48 h增殖最明顯，且能加快G1期向S期的過渡，提示PDGF-BB能在體外誘導(dǎo)大鼠PASMCs增殖。

3.2 IL-6與PASMCs異常增殖的關(guān)系近年來，越來越多的證據(jù)表明細(xì)胞因子驅(qū)動(dòng)的炎癥過程和免疫失衡在PASMCs異常增殖引起的肺血管重構(gòu)中具有重要作用。IL-6是一種多效細(xì)胞因子，由多種細(xì)胞分泌，包括淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞。PASMCs在正壓或高氧條件下培養(yǎng)24 h，其炎癥介質(zhì)IL-6分泌增高［8］。低氧誘導(dǎo)的衰老PASMCs可通過旁分泌IL-6促進(jìn)PASMCs增殖，進(jìn)而促進(jìn)PAH肺血管重構(gòu)。Ramakrishnan等［9］發(fā)現(xiàn)IL-6會(huì)增加鐵調(diào)素（hepcidin，一種抗菌肽激素）的轉(zhuǎn)錄和釋放，從而介導(dǎo)細(xì)胞鐵積累，促進(jìn)人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（hPASMCs）增殖。在骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體2（BMPR2）信號(hào)通路中，IL-6下調(diào)BMPR2的表達(dá)，促進(jìn)PASMCs增殖［10］。本研究中，IL-6隨著PDGF-BB誘導(dǎo)細(xì)胞增殖時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)量逐步上升，表達(dá)量的改變呈現(xiàn)出一定的時(shí)間依賴性，相關(guān)性分析也顯示PASMCs的增殖與IL-6mRNA表達(dá)呈正相關(guān)，提示IL-6參與了PASMCs異常增殖的發(fā)生和發(fā)展。有研究表明，除IL-6外，IL-8、IL-1β等因子也參與了PAH過程［11］，但是否通過促進(jìn)PASMCs增殖來誘導(dǎo)這一過程本文未進(jìn)行研究，因此在研究因子的選擇上較為局限。

3.3 GATA6與PASMCs異常增殖的關(guān)系GATA轉(zhuǎn)錄因子家族在細(xì)胞的增殖和分化調(diào)控中起著重要作用，其中GATA6主要表達(dá)于血管平滑肌，也是唯一表達(dá)于血管平滑肌的GATA家族轉(zhuǎn)錄因子。在VSMC中GATA6缺失可促進(jìn)損傷誘導(dǎo)的VSMC從收縮向增殖合成表型的轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致新生內(nèi)膜的形成和增加［12］。GATA6在體內(nèi)外均對(duì)VSMC具有較強(qiáng)的抗增殖、促分化作用，GATA6基因敲除可使平滑肌細(xì)胞保持收縮表型的能力降低［13］。GATA6通過使PASMCs進(jìn)入靜止?fàn)顟B(tài)來調(diào)節(jié)有絲分裂的發(fā)生，血清素可下調(diào)GATA6的表達(dá)，誘導(dǎo)PASMCs增殖。在本研究中GATA6隨著PDGF-BB誘導(dǎo)細(xì)胞增殖時(shí)間的延長(zhǎng)，表達(dá)量呈下降趨勢(shì)，且相關(guān)性分析顯示PASMCs的增殖與GATA6mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示GATA6參與了PDGF-BB誘導(dǎo)PASMCs異常增殖的發(fā)生和發(fā)展。

3.4 IL-6與GATA6可能的潛在關(guān)系Wang等［14］刺激小鼠卵巢顆粒細(xì)胞Notch信號(hào)后，上游轉(zhuǎn)錄因子（SF1、Wt1、GATA4、GATA6）的表達(dá)受到抑制，IL-6的表達(dá)與Notch信號(hào)的激活或抑制呈正相關(guān)，與上述轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。IL-6能選擇性地誘導(dǎo)基因的啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化，伴隨靶基因的低表達(dá)，導(dǎo)致靶基因沉默［15］。GATA6啟動(dòng)子CpG島甲基化可導(dǎo)致GATA6失去對(duì)下游靶基因的調(diào)控，引起細(xì)胞增殖/凋亡異常［16］。本研究觀察到在PASMCs異常增殖的過程中，IL-6與GATA6的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與本課題組在大鼠肺組織中的研究［17］結(jié)果一致。然而本文在設(shè)計(jì)上尚有不足，未通過IL-6過表達(dá)或轉(zhuǎn)染IL-6 siRNA等方法來進(jìn)一步檢測(cè)細(xì)胞增殖及GATA6的表達(dá)變化。另外，IL-6與GATA6之間是通過何種信號(hào)傳導(dǎo)途徑來調(diào)控PASMCs的異常增殖有待深入研究。

綜上，IL-6、GATA6參與了PDGF-BB誘導(dǎo)的PASMCs增殖過程；且PASMCs的增殖與IL-6mRNA表達(dá)上調(diào)及GATA6 mRNA表達(dá)下調(diào)相關(guān)。