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藏茶茶褐素組分特征及其清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基活性的比較

2020-11-27 08:30陳智雄譚禮強張鈺玉胥偉趙許朋謝文鋼劉陽劉燕
關(guān)鍵詞:組分自由基多糖

陳智雄,譚禮強,張鈺玉,胥偉,趙許朋,謝文鋼,,劉陽,劉燕

(1.貴陽學院生物與環(huán)境工程學院,貴陽550005;2.四川農(nóng)業(yè)大學園藝學院,成都611130)

藏茶是黑茶類的典型產(chǎn)品,是藏族同胞的民生之茶,按歷史時期和各地風俗不同又稱大茶、馬茶、烏茶、南路邊茶等[1]。藏族同胞飲茶歷史上千年,其傳統(tǒng)飲茶體驗認為,藏茶具有消食解膩、調(diào)理腸胃、改善代謝等功效,加之湯色紅濃明亮、陳香顯著、滋味醇和回甘,藏茶近年來被越來越多的都市消費者所接受,并逐漸形成藏茶內(nèi)銷和藏茶漢飲的市場新趨勢。因此,利用現(xiàn)代研究手段圍繞藏茶的品質(zhì)成分和活性機制開展系統(tǒng)研究具有實際應(yīng)用價值和理論意義[2-3]。

茶褐素(theabrownines, TBs)是藏茶等黑茶產(chǎn)品加工過程中由多酚類物質(zhì)氧化聚合成的一類化學結(jié)構(gòu)復雜的水溶性褐色色素[4]。研究表明,茶褐素含量與黑茶品質(zhì)呈顯著正相關(guān),且對機體具有一定的生理調(diào)節(jié)作用,被譽為普洱茶中的“軟黃金”[5-6]。由于茶褐素的結(jié)構(gòu)和成分的復雜性,目前對其分離純化和活性機制的深入研究尚在起步階段[6-7],且大多集中在普洱茶方面[8-10]。然而,黑茶加工過程中的渥堆條件、微生物種群、發(fā)酵方法及原料等因素都會對茶褐素的形成及化學組成產(chǎn)生顯著影響[11-13],這不僅能解釋不同黑茶茶褐素在活性功能方面的差異[6,14],也進一步體現(xiàn)了探究藏茶茶褐素組成及活性的必要性和意義。

藏族同胞常年居住在高海拔地區(qū),強紫外線和缺氧易造成其體內(nèi)自由基增加及機體損傷。藏茶作為他們的生活必需品,其在清除自由基和抗氧化方面的研究[15-16]還不夠深入,而關(guān)于藏茶茶褐素清除自由基能力的研究尚未見報道。因此,本文通過膜分離技術(shù)對藏茶茶褐素按不同分子質(zhì)量大小進行分級制備,然后對分離得到的各組分進行光譜學特征、理化性質(zhì)和微觀結(jié)構(gòu)分析,并用清除有機自由基1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)法評價其抗氧化活性[17],以明確藏茶茶褐素的基本化學組成及其清除自由基的能力,以期為探究藏茶抗氧化功能的物質(zhì)基礎(chǔ)、作用機制及應(yīng)用潛力提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

藏茶(康磚)購自四川吉祥茶業(yè)有限公司。

氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、無水乙醇、濃硫酸、蒽酮、牛血清蛋白、考馬斯亮藍G-250、葡萄糖、磷酸、氫氧化鈉、氯化鋇、乙酸鈣、濃鹽酸等,均為國產(chǎn)分析純;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基(日本和光純藥工業(yè)株式會社);Amicon-Ultra-15(5、10、50、100 kDa MWCO)超濾管(美國Millipore公司)。

1.2 主要儀器

精密電子天平(德國Sartorius 公司);R-200 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士Büchi 公司);Gamma 1-2 真空冷凍干燥機(德國Christ公司);高速冷凍離心機(美國Beckman公司);Ultrospec6300 pro多功能紫外/可見光分光光度計(美國通用電氣公司);FTIR-8400S傅里葉變換紅外光譜儀(日本Shimadzu 公司);QUANTA-450 環(huán)境掃描電子顯微鏡(美國FEI 公司);國產(chǎn)超聲水浴恒溫箱、循環(huán)水式多用真空泵、真空干燥箱和Delta 320 pH計。

1.3 實驗方法

1.3.1 茶褐素的提取與分離制備

以康磚茶為原料,利用茶褐素溶于水,不溶于氯仿、乙酸乙酯、正丁醇等有機溶劑的特性[18],依次洗脫茶褐素水提物中的咖啡堿、茶黃素、茶紅素和皂苷后,利用超濾膜分離技術(shù)對茶褐素進行逐級分離制備,具體工藝流程見圖1。

1.3.2 茶褐素的理化性質(zhì)分析

紫外-可見光譜掃描:將不同分子質(zhì)量范圍的茶褐素按比例配成質(zhì)量濃度為18.4 μg/mL 的水溶液,在190~700 nm波長范圍內(nèi)進行掃描,掃描次數(shù)30次,最小波長0.5 nm。

圖1 藏茶茶褐素的提取分離流程圖Fig.1 Extraction and separation flow diagram of theabrownines from Tibetan tea

紅外光譜掃描:將樣品與溴化鉀按適當比例混合研磨后壓片,以溴化鉀為背景,用FTIR-8400S 傅里葉變換紅外光譜儀進行掃描,掃描次數(shù)32 次,掃描范圍400~4 000 cm-1,分辨率8 cm-1。

蛋白質(zhì)的檢測:采用考馬斯亮藍G-250 法,根據(jù)要求制作標準曲線,設(shè)置樣品管和參比管。樣品管加1 mL待測液,5 mL考馬斯亮藍試劑;參比管加1 mL 蒸餾水,5 mL 考馬斯亮藍試劑。在595 nm 波長下測定。

茶多糖的測定:采用蒽酮-硫酸法,參照文獻[19]作適當改進。標準曲線的繪制:配制一定濃度的葡萄糖溶液,分別取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL于試管中,均用蒸餾水補足至1.0 mL,分別加入4 mL蒽酮-硫酸試劑,混勻后立即置于冰水中,待所有樣品加完后一起于沸水中加熱7 min,然后在冰水中冷卻30 min,于620 nm波長處比色。由于茶褐素本身具有顏色,為了降低茶褐素顏色對多糖測定的影響,每個樣品設(shè)一個對照,由1 mL 一定質(zhì)量濃度的茶褐素、1 mL用來代替顯色劑的蒸餾水及5 mL 濃硫酸組成,將其混勻后,分別吸取相同質(zhì)量濃度的茶褐素1 mL于試管中,其余操作同標準曲線的繪制。以樣品的吸光度值減去對照的吸光度值,并通過標準曲線算得茶多糖的含量。

官能團的定量分析:參照秦誼等[20]的BaCl2和Ca(CH3COO)2沉淀法對茶褐素官能團進行定量分析。1)酸性基的測定:取樣0.02 g,加20 mL 0.1 mol/L NaOH,用0.75 mol/L BaCl2定容至50 mL,振搖30 min后過濾,濾液用0.1 mol/L HCl 標準溶液作電位滴定,以pH 8.4 為滴定終點,并做空白對照。2)羧基的測定:取樣0.05 g,加10 mL 0.1 mol/L NaOH,再加與NaOH等當量的HCl標準溶液,用1 mol/L乙酸鈣定容至50 mL,振搖20 min后過濾,濾液用0.1 mol/L NaOH標準溶液作電位滴定,以pH 8.4為滴定終點,并做空白對照。

1.3.3 茶褐素的微觀結(jié)構(gòu)分析

將導電雙面膠帶貼于鋁載物臺上,在雙面膠上涂抹茶褐素樣品,多余的樣品用洗耳球吹去,將載物臺放于掃描電子顯微鏡下進行觀察,低真空壓力為穩(wěn)定的70 Pa,電子槍加速電壓為20 kV。

1.3.4 茶褐素清除DPPH 自由基能力的測定

取茶褐素樣品,用蒸餾水配制成不同質(zhì)量濃度的樣品液。分別取2 mL 樣品液于試管中,加入2×10-4mol/L DPPH 自由基溶液(用無水乙醇配制)2 mL,混合均勻,避光反應(yīng)30 min 后在517 nm 波長處測定其吸光度值(D1);以2 mL水代替茶褐素樣品,測定其吸光度值(D0);為消除樣品本身的影響,以2 mL 樣品與2 mL 無水乙醇混合,測定其吸光度值(D2);以2 mL水與2 mL無水乙醇的混合液調(diào)零[17]。

DPPH自由基清除率/%=[1-(D1-D2)/D0]×100.

1.3.5 數(shù)據(jù)分析

使用Excel 2010、Origin 7.5和SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,使用鄧肯法進行顯著性檢驗。

2 結(jié)果

2.1 不同分子質(zhì)量范圍茶褐素組分的得率

按照圖1 所示的制備流程,采用膜分離技術(shù)對藏茶茶褐素提取物進行逐級分離,結(jié)果如表1所示:從藏茶茶褐素提取物中,未分離出分子質(zhì)量小于5 kDa的色素物質(zhì);得到的4個不同分子質(zhì)量范圍的茶褐素組分中,TBFs1、TBFs2、TBFs3 的得率相近,所占比例分別為17.70%、13.55%、18.76%,而占比最高的是TBFs4 組分(49.99%)。說明藏茶茶褐素的組成以分子質(zhì)量大于100 kDa的物質(zhì)居多。

表1 不同分子質(zhì)量范圍茶褐素的得率Table 1 Yield of theabrownines with different molecular mass distribution

2.2 藏茶茶褐素各組分的光譜學分析

2.2.1 紫外-可見光譜分析

將相同質(zhì)量濃度的茶褐素各組分在190~700 nm波長范圍內(nèi)進行掃描,各樣品在可見光區(qū)無明顯吸收峰,在500 nm附近吸光度值已趨近于0,各組分的紫外-可見光譜經(jīng)等比例重疊后如圖2所示。藏茶茶褐素各組分的譜圖具有相似性,均在202 nm附近有最大吸收峰,在269 nm附近有較弱肩峰。而相同質(zhì)量濃度的各茶褐素組分在波峰處的吸光度值存在差異,其吸光度強弱表現(xiàn)為:TBFs4>TBFs2>TBFs3>TBFs1,說明不同分子質(zhì)量范圍茶褐素的化學組成有所不同。此外,圖2 中的2 處吸收峰剛好位于苯的紫外吸收光譜的E2 帶(204 nm)和B 帶(230~270 nm)處,其相應(yīng)的吸收強度也與苯環(huán)相似。因此,推測藏茶茶褐素在此處的吸收峰是由其中的芳香環(huán)結(jié)構(gòu)引起的,該結(jié)構(gòu)是茶褐素酚類聚合物的基本組成部分。而不同茶褐素組分由于芳香環(huán)結(jié)構(gòu)或取代基的差異,其最大吸收波長會有不同程度的移動。

圖2 不同分子質(zhì)量范圍茶褐素的紫外-可見光譜圖Fig.2 Ultraviolet-visible spectrogram of theabrownines with different molecular mass distribution

2.2.2 紅外光譜分析

從圖3 可看出,藏茶茶褐素各組分的化合物組成較復雜,紅外吸收峰重疊較嚴重,無論是官能團區(qū)(4 000~1 300 cm-1)還是指紋區(qū)(1 300~600 cm-1),不同分子質(zhì)量范圍茶褐素的譜峰形態(tài)無明顯差異,可識別的峰型基本一致。如圖3所示:3 334 cm-1附近的強寬吸收峰為羥基O—H 或氨基N—H 的伸縮振動峰,峰寬顯示存在分子內(nèi)和分子間氫鍵,是判斷酚類物質(zhì)或蛋白質(zhì)存在的依據(jù);2 933 cm-1附近為烷基C—H 的反、對稱伸縮振動峰;1 618 cm-1附近為C=C 骨架伸縮振動或氨基N—H 變角振動引起的強吸收峰;1 402 cm-1附近為O—H面內(nèi)彎曲振動峰;1 053 cm-1附近為C—O—C的伸縮振動峰,可能是由苯并吡喃環(huán)結(jié)構(gòu)引起的吸收;615 cm-1附近可能為鹵代烴的伸縮振動峰。綜上所述,藏茶茶褐素為含有苯環(huán)、烷基的多羥基酚類物質(zhì),可能還含有糖蛋白綴合物,與普洱茶[21]、茯磚茶[22]茶褐素的紅外光譜分析結(jié)果存在相似性,說明黑茶茶褐素的官能團組成具有相似性,而其具體基團情況尚需借助其他相關(guān)手段做進一步分析。

圖3 不同分子質(zhì)量范圍茶褐素的紅外光譜圖Fig.3 Infrared spectrogram of theabrownines with different molecular mass distribution

2.3 藏茶茶褐素各組分的化學性質(zhì)及成分分析

由表2可知:藏茶茶褐素各組分均呈酸性,隨著分子質(zhì)量逐級增大,各組分的pH 變化不大,僅TBFs2 與TBFs4 的pH 存在差異。酸性官能團定量結(jié)果顯示:總酸性基和羧基的含量隨著茶褐素分子質(zhì)量的增大而呈現(xiàn)一定的增加趨勢,尤其以TBFs4的增幅最顯著;而酚羥基含量的變化并未呈現(xiàn)類似的趨勢,但含量最高的仍是分子質(zhì)量最大的TBFs4。此外,茶褐素各組分的酚羥基含量均為羧基含量的2 倍以上,且酚羥基在不同組分的含量差異最為顯著,說明酚羥基是藏茶茶褐素中的主要酸性官能團。

鑒于光譜學分析認為藏茶茶褐素提取物可能含有蛋白質(zhì)和多糖等絡(luò)合物,我們對蛋白質(zhì)和多糖的相對含量進行了測定,結(jié)果如表2 所示。隨著茶褐素分子質(zhì)量的逐級增大,蛋白質(zhì)的相對含量總體呈增加趨勢;而多糖含量的變化并無此規(guī)律,其相對含量最高和最低的組分分別為TBFs1 和TBFs2。暗示蛋白質(zhì)、多糖對茶褐素的結(jié)合方式不同,且蛋白質(zhì)對茶褐素的結(jié)合可能與酸性基團有關(guān)。

表2 不同分子質(zhì)量范圍茶褐素的pH及各成分測定結(jié)果Table 2 Determination result on pH and compositions of theabrownines with different molecular mass distribution

2.4 藏茶茶褐素各組分的掃描電鏡分析

用掃描電鏡觀察茶褐素各組分聚集體的表面形貌特征,結(jié)果如圖4 所示。TBFs1(5~10 kDa)聚集體呈不規(guī)則塊狀結(jié)構(gòu),在1 600×視野下可見其表面較光滑但不規(guī)整,有凹陷和乳突狀大顆粒分布。暗示TBFs1各分子間交聯(lián)緊密,相互作用力較大,易形成緊密結(jié)構(gòu),可能與該組分的多糖含量高有關(guān)。TBFs2(>10~50 kDa)樣品呈片狀或碎屑狀堆積,碎片表面較平整,隨著放大倍數(shù)的增加(1 600×),可見其表面呈現(xiàn)緊密的“蜂窩狀”結(jié)構(gòu),暗示TBFs2分子質(zhì)量較大,具有長鏈或多分枝結(jié)構(gòu),分子間易交叉粘連,相互間的作用較強。TBFs3(>50~100 kDa)的聚集體呈折疊和卷曲形狀,在1 600倍鏡下,可見其表面形貌較為規(guī)則且呈絲網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),說明分子間結(jié)合緊密,相互作用較強。而TBFs4(>100 kDa)樣品則堆積成各種無規(guī)則的形貌結(jié)構(gòu),有枝葉狀、屑狀、片狀、桿柱狀和顆粒狀等,暗示該部分組分的分子特征形態(tài)多樣化,促使各類大分子物質(zhì)無規(guī)則聚集。綜合以上觀察結(jié)果,可見藏茶茶褐素各組分的天然形貌和聚集形態(tài)存在明顯差異,這與各自的分子質(zhì)量大小、分子間力、大分子的組成及微觀結(jié)構(gòu)等有關(guān)。

圖4 不同分子質(zhì)量范圍茶褐素的掃描電鏡圖Fig.4 Scanning electron microscopy of theabrownines with different molecular mass distribution

2.5 藏茶茶褐素各組分清除DPPH 自由基的活性評價

DPPH自由基在國內(nèi)外被廣泛用于清除自由基物質(zhì)性質(zhì)的研究與天然抗氧化劑的篩選。若受試物能將其清除,則表明該受試物具有降低羥基自由基、烷基自由基或過氧化自由基的有效濃度和阻斷脂質(zhì)過氧化鏈的作用[17]。由圖5可見:4種不同分子質(zhì)量范圍的藏茶茶褐素均有清除DPPH自由基的能力,但其清除率都低于對照(維生素C)。總體而言,在所示質(zhì)量濃度區(qū)間(10~80 μg/mL),隨著反應(yīng)體系中茶褐素質(zhì)量濃度的增加,其對DPPH 自由基的清除率逐漸上升,呈現(xiàn)明顯的劑量關(guān)系。

為進一步探明藏茶茶褐素各組分清除DPPH自由基活性的差異,我們計算了不同茶褐素組分的DPPH 自由基半抑制濃度(median inhibition concentration,IC50),結(jié)果如表3所示。不同組分間的IC50值差異均達到顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)水平,說明不同分子質(zhì)量范圍的4 類茶褐素清除DPPH自由基的活性差異顯著,其清除能力由高到低依次為TBFs4(>100 kDa)、TBFs2(>10~50 kDa)、TBFs3(>50~100 kDa)、TBFs1(5~10 kDa)。這也說明,盡管藏茶茶褐素各組分清除DPPH 自由基的活性有差異,但該活性的高低與分子質(zhì)量大小并無直接聯(lián)系。

圖5 不同質(zhì)量濃度茶褐素組分清除DPPH自由基的能力Fig.5 DPPH radical scavenging ability of theabrownine fractions with different concentrations

表3 不同茶褐素組分的DPPH自由基半抑制濃度(IC50)Table 3 Median inhibition concentration (IC50) of different theabrownine fractions on scavenging DPPH radicals

3 討論

3.1 藏茶茶褐素的組成及特征

本文借助膜分離技術(shù)對藏茶茶褐素進行分離,得到4 個不同分子質(zhì)量范圍的茶褐素組分TBFs1(5~10 kDa)、TBFs2(>10~50 kDa)、TBFs3(>50~100 kDa)和TBFs4(>100 kDa)。值得注意的是,藏茶茶褐素中并未分離到分子質(zhì)量小于5 kDa的色素物質(zhì),這與普洱茶[21]、青磚茶[23]等黑茶茶褐素的分子質(zhì)量范圍存在差異,也印證了王偉偉等[6]的觀點,認為不同黑茶種類提取的茶褐素在分子質(zhì)量上有較大差異。結(jié)合黑茶加工工藝和原料來看,多次高溫渥堆發(fā)酵和加濕加溫反復揉捻(餾)是藏茶生產(chǎn)較顯著的特點[1];相比青磚茶和茯磚茶,藏茶渥堆時間更長,在此環(huán)節(jié)的物質(zhì)轉(zhuǎn)化程度更深;而藏茶與普洱茶最大的區(qū)別在原料,前者多為中小葉種,后者則為大葉種,其內(nèi)含物質(zhì)基礎(chǔ)已決定了兩者的差異。這些特點和差異都有可能影響茶褐素分子質(zhì)量大小及組成,它們之間的具體關(guān)系有待進一步研究。

在藏茶茶褐素的化學組成方面,隨著茶褐素分子質(zhì)量的逐級增大,總酸性基、羧基、蛋白質(zhì)相對含量也呈相應(yīng)的增加趨勢,這一變化規(guī)律符合黑茶加工中內(nèi)含成分轉(zhuǎn)化及茶褐素形成的特征,即多酚類物質(zhì)通過氧化聚合反應(yīng)形成大分子物質(zhì),并逐漸伴隨有蛋白質(zhì)、糖類、有機酸等通過氧化、聚合、耦合作用與這些酚類大分子物質(zhì)共同形成茶褐素[4,7]。楊大鵬等[11]研究發(fā)現(xiàn),黑茶渥堆過程中,茶褐素提取物中的蛋白質(zhì)和多糖含量隨渥堆時間和翻堆次數(shù)的增加總體呈上升趨勢。本研究中,蛋白質(zhì)含量最高的是分子質(zhì)量最大(>100 kDa)的茶褐素組分TBFs4,而多糖含量最高的則是分子質(zhì)量范圍最?。?~10 kDa)的茶褐素組分TBFs1。暗示在黑茶渥堆后期不單是茶紅素等大分子高聚物在參與茶褐素形成,也存在氧化聚合度相對較低的酚類物質(zhì)與多糖結(jié)合形成茶褐素,這可能也是黑茶渥堆過程中茶褐素增加量大于茶紅素和茶黃素減少量的原因之一[3,7]。

3.2 藏茶茶褐素清除DPPH 自由基的活性及物質(zhì)基礎(chǔ)

人體內(nèi)的疾病發(fā)生與自由基的存在有著密切聯(lián)系,這也使得抗氧化劑的研究與開發(fā)成為當今的熱點[24-25]。與合成抗氧化劑相比,天然抗氧化劑在食品安全性方面更具優(yōu)勢[26]。茶葉中活性成分的抗氧化機制主要為:阻斷自由基鏈式反應(yīng),作用于自由基或與自由基有關(guān)的酶,清除活性氧使單線態(tài)的氧淬滅,螯合金屬離子使其失去活性,以及協(xié)同抗氧化等。本研究發(fā)現(xiàn),藏茶茶褐素是可以直接作用于DPPH自由基的活性物質(zhì)。

在活性成分方面,有研究認為多糖具有顯著的自由基清除活性[27],而本文中多糖含量最高的TBFs1(5~10 kDa)組分對DPPH自由基的清除率卻最低,說明藏茶茶褐素清除DPPH 自由基的活性與其多糖含量并無直接聯(lián)系。孫婭[28]在對低活性多糖的研究中也發(fā)現(xiàn),茶多糖清除自由基的能力與多糖提取率、各組分含量并無明顯的量效關(guān)系,而多糖特有的結(jié)構(gòu)特征對其活性影響更大。另有研究表明,分子質(zhì)量大小是多糖具備生物活性的必要條件[29],這可能與其保證高級結(jié)構(gòu)的構(gòu)象有關(guān)。這些都有助于我們認識茶褐素中多糖與其清除自由基之間的關(guān)系。

通過比較表2和表3的數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),茶褐素各組分的酚羥基含量與清除DPPH自由基活性的變化趨勢最為一致,均為TBFs4>TBFs2>TBFs3>TBFs1。此外,光譜學分析得出的茶褐素主要基團也是以多羥基酚類物質(zhì)為主。因此,我們推測藏茶茶褐素清除DPPH自由基的物質(zhì)基礎(chǔ)可能以酚性基團或酚類物質(zhì)為主,這與茶紅素中的抗氧化活性結(jié)構(gòu)(酚羥基、苯駢卓酚酮結(jié)構(gòu))存在相似之處[25]。說明藏茶茶褐素可能具有與其主要前體物質(zhì)(兒茶素、茶紅素、茶黃素)相似的抗氧化作用途徑,可進一步用于天然抗氧化劑的篩選及抗氧化機制研究。

4 結(jié)論

藏茶茶褐素中未分離出能透過5 kDa超濾膜的色素物質(zhì),分子質(zhì)量大于100 kDa 的茶褐素組分占49.99%,與其他黑茶茶褐素的分子質(zhì)量分布存在差異。藏茶茶褐素在202 nm附近有紫外特征吸收峰,為含有烷基、苯環(huán)和羧基的多羥基酚類物質(zhì),同時還結(jié)合有蛋白質(zhì)和多糖。蛋白質(zhì)在分子質(zhì)量大于100 kDa 的茶褐素組分中結(jié)合比例最高,而多糖則更偏向與分子質(zhì)量相對較低的茶褐素組分結(jié)合。

藏茶茶褐素具有清除DPPH 自由基的活性,在10~80 μg/mL范圍內(nèi)其質(zhì)量濃度與DPPH自由基的清除率呈線性正相關(guān),其活性物質(zhì)基礎(chǔ)可能以酚性基團或酚類物質(zhì)為主。盡管藏茶茶褐素在既定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)DPPH自由基清除率不及藥用抗氧化劑維生素C,但這不影響其用于天然抗氧化劑的篩選及抗氧化機制的研究。后續(xù)研究可借助細胞自噬模型、線蟲模型、體外化學分析手段等對藏茶茶褐素的抗氧化及抗衰老等活性進行評估;同時,還需結(jié)合現(xiàn)代分離純化技術(shù)、現(xiàn)代譜學分析技術(shù)、蛋白質(zhì)組學以及代謝組學等,來研究藏茶茶褐素的化學成分及活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)特點,并探索其活性作用的關(guān)鍵靶點和主要通路。

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