王術(shù)榮，原淵，劉洋，孟俊龍

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山西 晉中030801）

白鱗傘屬（Leucopholiota）隸屬于傘菌綱（Agaricomycetes）、傘 菌 目（Agaricales）、口 蘑 科（Tricholomataceae）[1]。此屬為單系起源，最早被歸為蜜環(huán)菌屬（Armillaria）的亞屬，1996年才被提升為屬的水平[2]。該屬真菌屬于木腐真菌。野外鑒定主要依據(jù)其菌蓋和菌柄上都覆蓋有黃褐色的小鱗片，菌褶白色；微觀形態(tài)特征主要為孢子淀粉質(zhì)，無色，透明。目前，世界上該屬真菌只有2個種：木生囊環(huán)菇（Leucopholiota lignicola）和 華 美 白 麟 傘（Leucopholiota decorosa）。白鱗傘屬首次報道于美國，并且以L. decorosa為模式種建立了該屬[2]。2010年，圖力古爾等首次在吉林省長白山自然保護(hù)區(qū)內(nèi)發(fā)現(xiàn)了該屬的木生白鱗傘，并在當(dāng)時將其鑒定為木生囊環(huán)菇[Cystolepiota lignicola(P. Karst.)Nezdojm.][3]。至此，我國對該屬真菌的研究才剛剛開始。

山西省呂梁市交城縣龐泉溝國家級自然保護(hù)區(qū)位于山西省交城縣西北部和方山縣東北部交界處，地處呂梁山脈中段山區(qū)，位于37°45′—37°55′N，111°22′—111°33′E，海拔1 500～2 831 m，植被類型為寒溫性針葉混交林、針闊混交林和常溫性闊葉混交林[4]。1990 年，常明昌等[5]和趙旭等[6]對該地區(qū)的大型真菌進(jìn)行了初步調(diào)查研究。2014年，袁海生等對山西歷山和龐泉溝自然保護(hù)區(qū)的木生真菌進(jìn)行了調(diào)查研究，發(fā)現(xiàn)齒狀真菌棉毛纖刺皮菌（Fibrodontia gossypina）、鈣生棕絨毛菌（Tomentella calcicola）和孔狀真菌白褐叉絲孔菌（Dichomitus albidofuscus）為我國木生真菌新記錄種，同時記載了123種木生真菌[7]。

2017 年7 月，筆者在龐泉溝國家級自然保護(hù)區(qū)進(jìn)行大型真菌標(biāo)本資源調(diào)查時，發(fā)現(xiàn)白鱗傘屬一物種，經(jīng)形態(tài)和分子生物學(xué)鑒定為中國新記錄種華美白鱗傘。此種曾在美國被發(fā)現(xiàn)，具有一定食用價值[2]。本文對其進(jìn)行了詳細(xì)的形態(tài)描述，并將其與相近種進(jìn)行了相關(guān)比較和分析。

1 材料與方法

1.1 供試材料

在山西省呂梁市交城縣龐泉溝國家級自然保護(hù)區(qū)內(nèi)進(jìn)行調(diào)查采樣，每份標(biāo)本在采集前拍照記錄其在自然狀態(tài)下的生長情況，并記錄其生態(tài)、生境特點。采集后帶回室內(nèi)制作標(biāo)本并進(jìn)行鑒定，保存于山西農(nóng)業(yè)大學(xué)菌物標(biāo)本館。

1.2 形態(tài)學(xué)研究

對新鮮的標(biāo)本及時進(jìn)行宏觀形態(tài)的觀察記錄，包括：菌蓋顏色、大小、表面特征；菌柄長度和表面特征；菌褶顏色等。觀察完畢將標(biāo)本放入標(biāo)本烘干機(jī)中，以45～55 ℃過夜烘干，隨后放入自封袋中保存。對標(biāo)本的菌褶和菌蓋分別進(jìn)行徒手切片，在5%KOH溶液和梅氏試劑（Melzer’s reagent）中觀察并記錄其微觀形態(tài)特征（包括菌褶及菌髓結(jié)構(gòu)，擔(dān)孢子、擔(dān)子及囊狀體的形態(tài)大小等）。

1.3 DNA 提取

取12 mg 菌絲體，利用D3591-01 基因組DNA提取試劑盒（美國Omega Bio-Tek公司）提取標(biāo)本子實體的DNA。提取后的DNA經(jīng)NanoDropTM2000C超微量分光光度計（美國Nanodrop Technologies 公司）測定其濃度，并經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測，于－20 ℃條件下保存，備用。

1.4 rDNA 內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（internal transcribed spacer，ITS）擴(kuò)增

使用引物ITS1/ITS4 對標(biāo)本進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction,PCR）擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增體系：DNA 模板2 μL，10 μmol/L 上、下游引物各1 μL，10×EasyTaq 緩沖液5 μL，2.5 mmol/L dNTP 4 μL，EasyTaq DNA 聚合酶0.8 μL，ddH2O 36.2 μL。PCR 擴(kuò)增程序：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，56 ℃退火30 s，72 ℃延伸1.5 min，35 個循環(huán)；72 ℃延伸5 min[8]。將PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測，檢測后的目的條帶送至生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行正反向測序。

1.5 系統(tǒng)發(fā)育分析

將獲得的ITS 序列在MEGA 7.0 軟件中進(jìn)行復(fù)檢，經(jīng)過人工校正排除程序誤讀。然后和從GenBank數(shù)據(jù)庫中下載的與該物種相近的3個代表物種的序列一起構(gòu)成數(shù)據(jù)集，其中包括2 條尖鱗傘（Pholiota squarrosoides）、2 條金蓋鱗傘（Phaeolepiota aurea）、2 條刺毛暗皮傘（Phaeomarasmius erinaceellus）的DNA 序列和1 條華美白鱗傘（L.decorosa）的DNA 序列。數(shù)據(jù)集在MEGA 7.0 軟件中通過Clustal W 程序進(jìn)行初步校對以及序列長度處理。在系統(tǒng)發(fā)育分析中，采用軟件MEGA 7.0 以Kimura 兩參數(shù)模型構(gòu)建最大似然估計（maximum likelihood estimation,MLE）系統(tǒng)進(jìn)化樹。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)學(xué)分析

如圖1A所示：菌蓋表面干燥，直徑3.0～5.5 cm，表面覆蓋有大量銹褐色的內(nèi)彎鱗片，菌蓋中央黑褐色，初期菌蓋球形，成熟后逐漸平展，邊緣內(nèi)卷；菌肉白色，肉質(zhì)，厚5 mm；菌褶白色，密，邊緣鋸齒狀，其與菌柄交界處有一淺淺的凹陷。如圖1B～C 所示：菌柄長2.5～5.1 cm，直徑0.5～1.0 cm，從底部到菌環(huán)處表面覆蓋有與菌蓋一樣的銹褐色鱗片，菌環(huán)以上表面光滑；部分菌幕殘留形成纖維狀菌環(huán)，黃褐色，像火炬一樣托起上部，粗糙，位于菌柄上部；子實體氣味不明顯，嘗起來稍微有點牛奶的味道；子實體觸摸及受傷后顏色變化不明顯。擔(dān)子大?。?5.38～20.89）μm×（5.21～6.08）μm，擔(dān)子小梗長2.81～3.37 μm，小?；繉?.8～1.2 μm，棒狀，透明，四孢型（圖1D）；孢子大?。?.11～5.95）μm×（3.19～4.09）μm，長寬比為1.11～1.85，長寬比均值為1.41±0.16，淀粉質(zhì)，透明，橢圓形，薄壁（圖1E）；緣囊體大?。?4.70～21.30）μm×（3.52～5.38）μm，近棒狀或近紡錘形，透明，在其頂部有一尖突；菌蓋表皮細(xì)胞菌絲狀，匍匐交織排列，菌絲直徑2.0～6.8 μm，光滑，部分細(xì)胞在分隔處輕微縊縮，含有淺黃褐色細(xì)胞色素（圖1F）。

生長環(huán)境：一般在夏末或秋初，單生或散生在白樺腐木上。

研究標(biāo)本：山西省呂梁市交城縣龐泉溝國家級自然保護(hù)區(qū)六道溝，采集號G10020（館藏號HMSAU 10072），采集人王術(shù)榮和郭富寬，采樣時間2017年8月19日。

2.2 分子系統(tǒng)學(xué)分析結(jié)果

通過rDNA 的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS）特異性擴(kuò)增和人工復(fù)檢后，在NCBI 數(shù)據(jù)庫（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）中進(jìn)行比對發(fā)現(xiàn)，本研究標(biāo)本的rDNA ITS序列與華美白鱗傘（L.decorosa）（序列號：AY176449）的序列相似度高達(dá)99.2%?；谌A美白鱗傘和相近種的rDNA ITS 序列采用最大似然估計（MLE）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，數(shù)據(jù)總共由9 條序列構(gòu)成，其中有7條序列屬于鱗傘屬及其相近物種（這些物種在野外極容易與本文所描述的物種相混淆）（圖2）。從系統(tǒng)發(fā)育樹可以看出：本文所描述物種與其相近的鱗傘屬、暗環(huán)柄菇屬和暗皮傘屬物種不同，與白鱗傘屬的華美白鱗傘（L.decorosa）物種的分子數(shù)據(jù)（AY176449）聚在一起，并有100的自展支持率。白鱗傘屬（Leucopholiota）與暗環(huán)柄菇屬（Phaeolepiota）親緣關(guān)系較為接近，然而后者具有黃褐色至褐色的菌褶、銹褐色孢子而易于與前者的白色菌褶和無色透明孢子相區(qū)分，同時前者還具有膜狀的菌環(huán)。 鱗傘屬（Pholiota）和暗皮傘屬（Phaeomarasmius）也可以通過菌褶和孢子特征（鱗傘屬菌褶通常為黃褐色至銹褐色，孢子黃褐色有芽孔；暗皮傘屬菌褶淡黃至灰黃色或黃土色，孢子通常為銹色）與白鱗傘屬加以區(qū)分。同時，白鱗傘屬具有緣囊體，孢子淀粉質(zhì)，腐木生，使得此屬可以與口蘑屬很好地區(qū)分。

3 結(jié)論

圖2 基于華美白鱗傘和相近種的rDNA ITS 序列構(gòu)建的MLE系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.2 Phylogenetic tree of MLE generated for L. decorosa and related species based on rDNA ITS sequences

華美白鱗傘（L.decorosa）最早于1873年在美國紐約州作為蘑菇屬的華美蘑菇（Agaricus decorosus）被PECK[9]所描述。1947年，基于廣義的密環(huán)菌屬概念和孢子淀粉質(zhì)的特征，SMITH等將其新組合到密環(huán)菌屬（Armillaria）中[10]。MILLER等結(jié)合前人的觀點把密環(huán)菌屬的亞屬Leucophioliota提升到屬的水平[11]，并說明了該屬的主要特點為菌蓋和菌柄上具有銹色、下彎的鱗片，白色的菌褶，淀粉質(zhì)的孢子，緣囊體棍棒形，尖端鈍或有喙?fàn)钔黄??；谶@些特征再加之其生長在腐木上，使得此屬可以與口蘑科的其他白色孢子的屬相區(qū)分。本次采集的標(biāo)本菌蓋和菌柄表面覆有銹褐色的鱗片，菌褶白色，顯微觀察發(fā)現(xiàn)孢子無色透明，淀粉質(zhì)，緣囊體的特征也符合此屬的特點。結(jié)合形態(tài)學(xué)研究和系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建，確定其屬于白鱗傘屬。

白鱗傘屬（Leucopholiota）全球共有2 個種，分別是木生白鱗傘（L.lignicola）和本文所描述的華美白鱗傘（L.decorosa）[11]。這2個種形態(tài)特征的區(qū)別：前者沒有緣生囊狀體和側(cè)生囊狀體，后者具有頂端稍微帶小凸的囊狀體。HARMAJA[2]研究發(fā)現(xiàn)，木生白鱗傘主要生長在樺屬腐木上，并且多見于針葉林及伴有樺樹的原始森林中；華美白鱗傘主要腐生于非樺屬樹種的腐木上或闊葉樹樹樁上。然而，也有報道華美白鱗傘偶有生長于樺林中的[12]。本次采集的白鱗傘屬物種單生在樺樹腐木上，顯微形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)其孢子淀粉質(zhì)，無色透明，具有近似棒狀的緣囊體。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，中國發(fā)現(xiàn)的華美白鱗傘與北美已經(jīng)報道的此種在菌蓋大小、鱗片顏色、孢子大小、緣囊體大小等方面均比較接近，而其擔(dān)子略短于北美模式標(biāo)本[在北美標(biāo)本擔(dān)子描述中擔(dān)子大小（21～32）μm×（5～7）μm[11]，在中國標(biāo)本擔(dān)子描述中擔(dān)子大小（15.38～20.89）μm×（5.21～6.08）μm）]。此種主要分布在北美和中國，僅在歐洲的法國有過報道。由此可見，此種間斷分布于歐亞大陸（歐洲與東亞）和北美[11]。

此外，華美白鱗傘（L. decorosa）與尖鱗傘（P.squarrosoides）、金蓋鱗傘（P. aurea）和刺毛暗皮傘（P. erinaceellus）有些相似。除了金蓋鱗傘地生之外，其余都屬于木腐性真菌。尖鱗傘菌蓋表面覆有黃褐色鱗片，其菌環(huán)膜質(zhì)，同時，其孢子在KOH溶液下觀察呈黃褐色，非淀粉質(zhì)并且具有頂孔[13]；金蓋鱗傘表面附有金黃、橘黃色粉粒狀顆粒，菌褶初期白色，后變?yōu)辄S褐色，孢子印黃褐色，孢子淡褐色，長紡錘形，光滑或有疣[14]；刺毛暗皮傘表面黃褐色至橙褐色，具有翹起且易脫落的細(xì)鱗片，菌褶直生，淡黃至灰黃色或黃土色，褶緣具細(xì)鋸齒，具有易脫落的膜質(zhì)菌環(huán)[15]。根據(jù)上述這些形態(tài)特征可以與華美白鱗傘（L.decorosa）相區(qū)別。

此次調(diào)查研究通過對龐泉溝國家級自然保護(hù)區(qū)大型真菌多樣性的梳理，為我國白鱗傘屬研究提供了重要理論支持，同時有益于我國大型真菌種質(zhì)資源的保育和利用。