張安榮， 劉 嬌， 陳志敏， 常文環(huán)， 鄧雪娟 ， 蔡輝益 ，， 劉國(guó)華， 鄭愛(ài)娟*

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部飼料生物技術(shù)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，北京100081；2.生物飼料開(kāi)發(fā)國(guó)家工程研究中心，北京100081）

鈣和磷是動(dòng)物體內(nèi)必需的礦物元素之一，對(duì)維持動(dòng)物骨骼發(fā)育起著重要作用。而動(dòng)物日糧中的磷主要以植酸磷的形式存在，很難被家禽等單胃動(dòng)物利用，因此通常在日糧中添加無(wú)機(jī)磷來(lái)滿足動(dòng)物對(duì)磷的需要。但無(wú)機(jī)磷不能完全被動(dòng)物吸收利用，導(dǎo)致環(huán)境的磷污染加重。自然界中細(xì)菌、酵母、霉菌均能分泌植酸酶（陳雅湘等，2019），添加益生菌可能會(huì)改善家禽對(duì)日糧中磷的利用?？莶菅挎邨U菌是芽孢桿菌屬革蘭氏陽(yáng)性菌，可形成內(nèi)生抗逆芽孢，能夠利用蛋白質(zhì)、多種糖及淀粉。具有良好的抗逆性，在含豬膽鹽的培養(yǎng)基中仍可生長(zhǎng)增殖?？莶菅挎邨U菌能競(jìng)爭(zhēng)性地排斥致病菌，促進(jìn)有益菌株在腸道內(nèi)定植 （Sokale等，2019；Park 等，2016）。 Reis等（2017）研究表明，枯草芽孢桿菌能提高禽類(lèi)生長(zhǎng)性能和表觀代謝率。蔣一秀等（2018）發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌組如皋黃雞的氮、磷表觀消化率較對(duì)照組均有提高。馮江新等（2015）研究表明，與對(duì)照組相比，枯草芽孢桿菌發(fā)酵棉籽粕組黃羽肉雞的鈣和磷表觀消化率顯著提高。但目前，關(guān)于枯草芽孢桿菌對(duì)肉雞排泄物灰分、鈣和磷含量的影響報(bào)道較少。本試驗(yàn)研究日糧中添加枯草芽孢桿菌對(duì)肉仔雞排泄物鈣、磷含量及養(yǎng)分表觀代謝率的影響，為其在肉雞生產(chǎn)應(yīng)用中提供理論參考。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料 粉狀枯草芽孢桿菌，菌粉中活菌數(shù) 1.0×1011cfu/g。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選用180只體重相近的1日齡健康A(chǔ)A肉雞，隨機(jī)分為3個(gè)處理組，分別為無(wú)抗對(duì)照組：飼喂基礎(chǔ)日糧；抗生素組：在基礎(chǔ)日糧中添加5 mg/kg黃霉素，75 mg/kg金霉素和20 mg/kg吉他霉素；枯草芽孢桿菌組：在基礎(chǔ)日糧中添加1.5×1010cfu/kg枯草芽孢桿菌，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只雞。試驗(yàn)日糧采用玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧，基礎(chǔ)日糧配方參照 《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T 33-2004），其組成和營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.3 飼養(yǎng)管理 采用立體籠養(yǎng)，四層籠，每籠飼養(yǎng)10只雞。23 h光照，1 h黑暗。乳頭式飲水器供水，自由采食試驗(yàn)日糧（粉料）。水循環(huán)式暖氣供熱，前3 d雞舍溫度維持在33℃，此后每周降低2℃，直到24℃并維持。1日齡接種馬立克疫苗，7日齡滴鼻點(diǎn)眼接種新城疫和腎傳支二聯(lián)苗。試驗(yàn)雞飼養(yǎng)管理、免疫規(guī)程和雞舍衛(wèi)生管理均按AA肉雞飼養(yǎng)規(guī)程進(jìn)行。每天進(jìn)行健康觀察，試驗(yàn)期42 d。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 肉仔雞排泄物的采集 從38～42日齡收集排泄物4 d。將其中混有的皮屑、羽毛和飼料用鑷子夾出或吹風(fēng)機(jī)吹出，其余排泄物全部收集于采樣盒中，并分次噴灑10%鹽酸溶液，-20℃保存。試驗(yàn)結(jié)束，將每個(gè)重復(fù)肉雞4 d的排泄物樣品混勻，65℃烘干至恒重，至室溫下回潮24 h后粉碎過(guò)40目篩并編號(hào)。

1.4.2 排泄物中灰分、鈣和磷含量的測(cè)定 稱取2 g左右肉仔雞排泄物樣品于已知重量坩堝內(nèi)，電爐上炭化至灰白色；轉(zhuǎn)至550℃的馬弗爐中高溫灰化5～6 h直至全部為白色，干燥器中冷卻30 min，稱量，恒重。灰分中鈣含量測(cè)定采用乙二

胺四乙酸 （EDTA）直接容量法 （GB/T 6436—1992），灰分中磷含量測(cè)定采用釩鉬酸銨法（GB/T 6437—1992）。

1.4.3 表觀代謝率的測(cè)定 采用指示劑法（TiO2法）測(cè)定肉雞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的表觀代謝率。粗蛋白質(zhì)含量采用杜馬斯蛋白質(zhì)測(cè)定儀測(cè)定，二氧化鈦采用分光光度計(jì)法測(cè)定。干物質(zhì)表觀代謝率和日糧養(yǎng)分表觀代謝率計(jì)算公式如下所示：

1.5 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 用Excel軟件整理數(shù)據(jù)，采用SPSS 21.0軟件中的獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。以P＜0.05作為差異顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)，P＜0.01作為差異極顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)，試驗(yàn)結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果

2.1 日糧中添加枯草芽孢桿菌對(duì)21日齡肉仔雞排泄物中灰分、鈣和磷含量的影響 由表2可知，與無(wú)抗對(duì)照組相比，日糧中添加枯草芽孢桿菌和抗生素均極顯著降低了肉仔雞排泄物磷含量（P＜0.01），分別降低了10.87%、10.14%；各組間肉仔雞排泄物中灰分含量和鈣含量無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

表2 日糧中添加枯草芽孢桿菌對(duì)21日齡肉仔雞排泄物中灰分、鈣和磷含量的影響

2.2 日糧中添加枯草芽孢桿菌對(duì)42日齡肉仔雞排泄物中灰分、鈣和磷含量的影響 由表3可知，與無(wú)抗對(duì)照組相比，日糧中添加枯草芽孢桿菌極顯著提高了肉仔雞排泄物灰分含量（P＜0.01），提高了8.33%；抗生素組排泄物灰分含量與無(wú)抗對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05）；與無(wú)抗對(duì)照組相比，枯草芽孢桿菌組與抗生素對(duì)照組肉仔雞排泄物鈣含量均極顯著提高（P＜0.01），分別提高了23.81%、24.26%；枯草芽孢桿菌組肉仔雞排泄物磷含量較無(wú)抗對(duì)照組顯著提高了8.94%（P＜0.05），與抗生素對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05）。

表3 日糧中添加枯草芽孢桿菌對(duì)42日齡肉仔雞排泄物中灰分、鈣和磷含量的影響

2.3 日糧中添加枯草芽孢桿菌對(duì)42日齡肉仔雞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀代謝率的影響 由表4可知，與無(wú)抗對(duì)照組相比，日糧中添加枯草芽孢桿菌顯著提高了肉雞干物質(zhì)、蛋白質(zhì)表觀代謝率（P＜0.05），抗生素組較無(wú)抗對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）；枯草芽孢桿菌組和抗生素對(duì)照組鈣表觀代謝率較無(wú)抗對(duì)照組均極顯著提高 （P＜0.01），分別提高了5.39%、5.31%；與無(wú)抗對(duì)照組相比，枯草芽孢桿菌組和抗生素組磷表觀代謝率均極顯著提高 （P＜0.01），分別提高了 16.77%、16.18%。

表4 日糧中添加枯草芽孢桿菌對(duì)42日齡肉仔雞干物質(zhì)、蛋白質(zhì)、鈣和磷表觀代謝率的影響%

3 討論

日糧中添加枯草芽孢桿菌能促進(jìn)動(dòng)物腸道環(huán)境改善，進(jìn)而增強(qiáng)動(dòng)物腸道吸收養(yǎng)分的能力（鄭建婷等，2020）。趙姝嫻等（2018）研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，日糧中添加0.5 g/kg枯草芽孢桿菌顯著降低了76周齡海蘭褐殼蛋雞的糞鈣排泄量。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加枯草芽孢桿菌和抗生素均極顯著降低了21日齡肉仔雞排泄物中磷含量。這說(shuō)明枯草芽孢桿菌可以提高1～21日齡肉仔雞對(duì)磷的吸收，減少磷排放。但42日齡枯草芽孢桿菌組肉仔雞排泄物中鈣和磷含量均顯著提高，這與前人研究結(jié)果不一致。其原因可能與試驗(yàn)動(dòng)物品種和采樣日齡不同有關(guān)。諸多試驗(yàn)表明，日糧中添加枯草芽孢桿菌能夠降低空腸、回腸隱窩深度，提高小腸絨毛高度，不同程度地改善肉雞的腸道黏膜形態(tài)（鐘光等，2020；李雪源等，2018；周勃等，2017）。雖然枯草芽孢桿菌可以改善肉雞腸道健康，間接提高肉雞對(duì)日糧的消化和吸收，但本試驗(yàn)結(jié)果顯示，21～42日齡肉仔雞對(duì)鈣、磷的吸收和利用并未得到改善，原因還有待進(jìn)一步研究。

孫蘇皖等（2018）研究表明，日糧中添加枯草芽孢桿菌發(fā)酵物等成分組成的腸道保護(hù)劑，可極顯著提高75日齡良鳳花肉雞對(duì)日糧鈣、磷的消化率。戴求仲等（2011）在日糧中添加2×1011cfu/g芽孢桿菌制劑發(fā)現(xiàn)，肉雞粗蛋白質(zhì)表觀代謝率極顯著提高了9.50%。Singh等（2019）研究亦發(fā)現(xiàn)，芽孢桿菌能夠提高飼喂低纖維和高纖維含量的日糧肉雞粗蛋白質(zhì)的回腸表觀消化率。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加枯草芽孢桿菌能顯著提高肉雞干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、鈣和磷等養(yǎng)分的表觀代謝率，這可能是因?yàn)榭莶菅挎邨U菌能夠分泌活性較強(qiáng)的蛋白酶及能降解抗?fàn)I養(yǎng)因子的非淀粉多糖酶等酶類(lèi)（張麗蘭等，2017），這些外源微生物酶類(lèi)能促進(jìn)肉仔雞內(nèi)源蛋白分解成氨基酸，有利于肉仔雞對(duì)氨基酸的吸收與利用，并能減輕日糧中抗?fàn)I養(yǎng)因子的滯育作用，提高肉雞對(duì)日糧中養(yǎng)分的利用效能。但本試驗(yàn)結(jié)果顯示，42日齡時(shí)枯草芽孢桿菌組肉仔雞排泄物鈣、磷含量顯著增加，與肉雞養(yǎng)分表觀代謝率相悖，可能是因?yàn)楸碛^代謝率并不能準(zhǔn)確顯示肉雞對(duì)養(yǎng)分真正的消化率，后續(xù)試驗(yàn)應(yīng)進(jìn)一步研究枯草芽孢桿菌對(duì)養(yǎng)分真消化率的影響。

4 結(jié)論

日糧中添加枯草芽孢桿菌能顯著提高肉雞干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、鈣和磷表觀代謝率，極顯著降低21日齡肉仔雞排泄物中磷含量，顯著提高42日齡肉仔雞排泄物中灰分、鈣和磷含量。