靳彩玲，趙樹鵬，姬穎華，王犖楠，楊 軍，張清琴，牛紅蕊

肺癌包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)，其中NSCLC是肺癌最常見的類型，占所有肺癌的80%～85%[1]。NSCLC治療主要通過手術(shù)、化療和放療，約75%的NSCLC患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于中晚期，5年生存率很低。OIP5-AS1屬于腫瘤相關(guān)長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long-chain non-coding RNA, lncRNA)，在惡性腫瘤的演變中參與復(fù)雜的細(xì)胞機(jī)制[2]。OIP5-AS1已被證實(shí)是多種惡性腫瘤發(fā)生的重要調(diào)控因子[3]。然而，OIP5-AS1與miR-7-5p在肺癌中的相互作用尚未被提及和研究。因此，本實(shí)驗(yàn)探討OIP5-AS1與miR-7-5p相互作用對(duì)NSCLC細(xì)胞化學(xué)敏感性的作用及分子機(jī)制，旨在為NSCLC的發(fā)病機(jī)制和治療策略提供新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料正常肺細(xì)胞系BEAS-2B、肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和順鉑耐藥肺癌細(xì)胞A549/DDP購(gòu)自美國(guó)ATCC公司；Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑購(gòu)自賽默飛世兒科技公司；Dual-Luciferase Reporter Assay System購(gòu)自美國(guó)普洛麥格公司；牛血清白蛋白、20×TBS、RT-qPCR/TaqMan One Step RT-qPCR Kit、PARP1抗體均購(gòu)自北京索萊寶公司；RIPA裂解液購(gòu)自上海源葉生物公司；Ki-67抗體購(gòu)自武漢菲恩公司；PCNA鼠單抗、MDR1兔單抗、BCL-2鼠單抗、Bax兔單抗均購(gòu)自美國(guó)CST公司；生物安全柜購(gòu)自濟(jì)南鑫貝西生物公司；生物顯微鏡購(gòu)自日本奧林巴斯株式會(huì)社；恒溫培養(yǎng)箱購(gòu)自韓國(guó)DAIHAN公司；倒置熒光顯微鏡購(gòu)自日本尼康株式會(huì)社；流式細(xì)胞儀購(gòu)自常州必達(dá)科生物公司；凝膠成像系統(tǒng)購(gòu)自美國(guó)Axygen公司。

1.2 方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染 A549和A549/DDP細(xì)胞培養(yǎng)在(含10%FBS、1%青霉素鏈霉素和1 mmol/L丙酮酸鈉)RPMI 1640培養(yǎng)基中。BEAS-2B細(xì)胞培養(yǎng)在(含10%FBS、1%青霉素鏈霉素和1 mmol/L丙酮酸鈉)DMEM(高糖)培養(yǎng)基中。此外，將A549/DDP細(xì)胞培養(yǎng)在含2 mg/L順鉑的培養(yǎng)基中，以保留耐藥表型[4]。將BEAS-2B、A549和A549/DDP細(xì)胞置入37 ℃、5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。100 mm培養(yǎng)皿中細(xì)胞密度為1 107個(gè)細(xì)胞時(shí)最佳。48～72 h后換液，進(jìn)行細(xì)胞的傳代，取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)的試驗(yàn)。轉(zhuǎn)染時(shí)，A549/DDP細(xì)胞密度融合70%～80%時(shí)效果最佳。根據(jù)Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑說明書進(jìn)行A549/DDP細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。

1.2.2CCK-8 檢測(cè)正常肺細(xì)胞系BEAS-2B、肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和順鉑耐藥肺癌細(xì)胞A549/DDP的IC50值將BEAS-2B、A549和A549/DDP細(xì)胞分別接種于96孔板(1×105/孔)，每組至少設(shè)置6個(gè)復(fù)孔。37 ℃恒溫培養(yǎng)箱孵育，每孔加入10 μL CCK-8(0.5 mg/mL)，培養(yǎng)4 h。培養(yǎng)結(jié)束后，在酶標(biāo)儀上測(cè)定波長(zhǎng)在450 nm處各孔細(xì)胞的光密度值。

1.2.3RT-qPCR檢測(cè)OIP5-AS1、miR-7-5p和PARP1的表達(dá)水平 轉(zhuǎn)染后24 h內(nèi)收集細(xì)胞，加入Trizol試劑提取正常肺細(xì)胞系BEAS-2B，肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和順鉑耐藥肺癌細(xì)胞A549/DDP中的總RNA。按照TaqMan One Step RT-qPCR Kit說明書將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，再進(jìn)行qPCR。檢測(cè)OIP5-AS1和miR-7-5p、PARP1表達(dá)水平的RNA。根據(jù)每個(gè)基因序列利用Primer Premier 6.0設(shè)計(jì)引物。根據(jù)熒光定量，計(jì)算所有樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的循環(huán)閾值(cycle threshold, Ct)?；谠摌?biāo)準(zhǔn)的Ct值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后使用2-ΔΔCt方法進(jìn)行定量計(jì)算。

1.2.4雙熒光素酶報(bào)告分析 使用生物信息學(xué)軟件StarBase和TargetScan對(duì)OIP5-AS1、miR-7-5p和PARP1的靶向關(guān)系進(jìn)行預(yù)測(cè)。用Dual-Luciferase Reporter Assay System進(jìn)一步驗(yàn)證靶向關(guān)系。用PCR擴(kuò)增含有miR-7-5p結(jié)合位點(diǎn)的OIP5-AS1基因的3′UTR序列。將OIP5-AS1的3′UTR克隆到pMIR-REPORT熒光素酶載體pMIR-OIP5-AS1-wild type中。通過PCR擴(kuò)增OIP5-AS1 3′UTR結(jié)合位點(diǎn)的突變，克隆到pMIR-OIP5-AS1-mutant質(zhì)粒中。根據(jù)Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑說明書將miR模擬物(miR-7 mimic)和熒光素酶質(zhì)粒pMIR-OIP5-AS1(野生型/突變型，WT/MUT)轉(zhuǎn)染到A549/DDP細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染48 h后，棄去舊培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞2次。隨后，在每孔細(xì)胞中加入100 μL裂解緩沖液(passive lysis buffer, PLB)，室溫下輕輕震蕩15 min，收集細(xì)胞裂解液。取20 μL PLB加入發(fā)光板中，用GloMax生物發(fā)光檢測(cè)儀讀取背景值2 s，每個(gè)樣品加入100 μL LAR Ⅱ 工作液，快速混勻，讀值2 s。讀值完畢后，每個(gè)樣品再加入100 μL Stop&Gl Reagent，快速混勻后，放入發(fā)光板中檢測(cè)，讀值2 s。熒光顯微鏡開啟或關(guān)閉30 min以內(nèi)不可關(guān)閉或開啟。

1.2.5克隆形成檢測(cè) A549/DDP細(xì)胞的生長(zhǎng)轉(zhuǎn)染pLenti-CMV-PARP1于A549/DDP細(xì)胞，用克隆形成分別檢測(cè)敲除OIP5-AS1和PARP1過表達(dá)后A549/DDP細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。以200個(gè)細(xì)胞/皿的速度接種于60 mm培養(yǎng)皿中。敲除OIP5-AS1后將A549/DDP細(xì)胞分為4組：對(duì)照組(Control組)、sh-OIP5-AS1組、miR-7-5p inhibitor組、sh-OIP5-AS+inhibitor組。PARP1過表達(dá)后將A549/DDP細(xì)胞分為4組：對(duì)照組(A549/DDP)、sh-OIP5-AS1組、pLenti-CMV-PARP1組、sh-OIP5-AS1+PARP1組。處理24 h后，用新鮮培養(yǎng)基代替舊培養(yǎng)基。細(xì)胞經(jīng)Giemsa染色后培養(yǎng)14天，計(jì)數(shù)含>50個(gè)細(xì)胞的菌落。確定細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

1.2.6Western blot法 采用Western blot法檢測(cè)A549/DDP細(xì)胞中Ki-67、PCNA、MDR1、BCL-2、Bax和PARP1的表達(dá)水平。用預(yù)冷的PBS洗滌A549/DDP細(xì)胞2次，在RIPA裂解液中裂解。細(xì)胞裂解液以12 000g離心15 min。通過Bradford法測(cè)定蛋白質(zhì)含量。用由1%聚丙烯酰胺溶解凝膠和8%堆積凝膠組成的不連續(xù)系統(tǒng)電泳分級(jí)分離蛋白質(zhì)樣品(100 g)，然后轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜(KALANG)。以100 V和250 mA(電流常數(shù))通電70 min。洗膜，用5%BSA在TBS中封膜1 h。加入一抗Ki-67(1 ∶2 000)、PCNA(1 ∶2 000)、MDR1(1 ∶3 000)、BCL-2(1 ∶1 000)、Bax(1 ∶1 000)和PARP1(1 ∶1 000)4 ℃孵育過夜。加入二抗室溫下孵育2 h。用化學(xué)發(fā)光劑觀察條帶。通過酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)圖像分析儀分析在硝酸纖維素膜上捕獲的信號(hào)來確定各蛋白的表達(dá)水平。試驗(yàn)中的蛋白表達(dá)水平相對(duì)于GAPDH表示。

1.2.7流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況 收集對(duì)照組(A549/DDP)、sh-OIP5-AS1、pLenti-CMV-PARP1和sh-OIP5-AS1+PARP1組中A549/DDP細(xì)胞，在500 μL結(jié)合緩沖液中重懸復(fù)蘇。每個(gè)樣品中分別加入200 μL的Annexin V-FITC和PI(10 μg/mL)，在室溫中避光孵育15 min。通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)A549/DDP細(xì)胞凋亡情況。

2 結(jié)果

2.1 A549/DDP細(xì)胞中OIP5-AS1、miR-7-5p、PARP1的表達(dá)CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與BEAS-2B細(xì)胞相比，A549細(xì)胞IC50值明顯增加(P<0.05，圖1)，A549/DDP細(xì)胞IC50值顯著增加(P<0.01)。RT-qPCR檢測(cè)顯示，與BEAS-2B細(xì)胞相比，A549細(xì)胞OIP5-AS1、PARP1表達(dá)顯著升高(P<0.05，圖2)，miR-7-5p表達(dá)顯著降低(P<0.05)；A549/DDP細(xì)胞OIP5-AS1、PARP1表達(dá)極顯著升高(P<0.01)，miR-7-5p表達(dá)極顯著降低(P<0.01)。本實(shí)驗(yàn)選擇A549/DDP細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

圖1 BEAS-2B、A549和A549/DDP細(xì)胞中IC50值：與BEAS-2B細(xì)胞相比，*P<0.05，**P<0.01

圖2 RT-qPCR檢測(cè)BEAS-2B、A549和A549/DDP細(xì)胞中OIP5-AS1、miR-7-5p、PARP1的表達(dá)：與BEAS-2B細(xì)胞相比，*P<0.05，**P<0.01

2.2 OIP5-AS1和miR-7-5p的靶向關(guān)系通過生物信息學(xué)軟件StarBase對(duì)OIP5-AS1和miR-7-5p的靶向關(guān)系進(jìn)行預(yù)測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在has-miR-7-5p區(qū)域存在lncRNA OIP5-AS1的潛在結(jié)合位點(diǎn)(圖3)，說明miR-7-5p是OIP5-AS1的靶向調(diào)節(jié)基因之一。RT-qPCR檢測(cè)敲除OIP5-AS1后A549/DDP細(xì)胞中miR-7-5p的表達(dá)水平：與對(duì)照組相比，sh-OIP5-AS1組miR-7-5p表達(dá)顯著增加(P<0.01，圖4)，miR-7-5p inhibitor組miR-7-5p表達(dá)顯著降低(P<0.05)；與miR-7-5p inhibitor組相比，sh-OIP5-AS1+inhibitor組miR-7-5p表達(dá)明顯增加(P<0.05)。用RT-qPCR檢測(cè)過表達(dá)OIP5-AS1后A549/DDP細(xì)胞中miR-7-5p的表達(dá)水平：與對(duì)照組相比，Ad-OIP5-AS1組miR-7-5p表達(dá)明顯降低(P<0.05，圖5)，miR-7-5p mimic組miR-7-5p表達(dá)顯著增加(P<0.01)；與miR-7-5p mimic組相比，Ad-OIP5-AS1+mimic組miR-7-5p表達(dá)顯著降低(P<0.05)。雙熒光素酶報(bào)告驗(yàn)證OIP5-AS1和miR-7-5p的靶向關(guān)系，過表達(dá)miR-7-5p后OIP5-AS1-WT組的熒光素酶活性明顯低于OIP5-AS1-MUT組(圖6)，證明OIP5-AS1和miR-7-5p之間確實(shí)存在著靶向關(guān)系，且miR-7-5p受OIP5-AS1的負(fù)調(diào)控作用。

圖3 OIP5-AS1與miR-7-5p結(jié)合區(qū)域及突變區(qū)域

圖4 RT-qPCR檢測(cè)敲除OIP5-AS1后A549/DDP細(xì)胞中miR-7-5p的表達(dá)水平：與Control組相比，*P<0.05，**P<0.01；與miR-7-5p inhibitor組相比，#P<0.05

圖5 RT-qPCR檢測(cè)過表達(dá)OIP5-AS1后A549/DDP細(xì)胞中miR-7-5p的表達(dá)水平：與Control組相比，*P<0.05，**P<0.01；與miR-7-5p mimic組相比，#P<0.05

圖6 雙熒光素酶報(bào)告驗(yàn)證OIP5-AS1和miR-7-5p的靶向關(guān)系

2.3 敲除OIP5-AS1對(duì)A549/DDP細(xì)胞IC50值的影響CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與Control組相比，sh-OIP5-AS1組A549/DDP細(xì)胞IC50值明顯降低(P<0.05，圖7)，miR-7-5p inhibitor組A549/DDP細(xì)胞IC50值明顯增加(P<0.05)。與miR-7-5p inhibitor組相比，sh-OIP5-AS1+inhibitor組A549/DDP細(xì)胞IC50值顯著降低(P<0.05)。

圖7 CCK-8法檢測(cè)敲除OIP5-AS1后A549/DDP細(xì)胞IC50值：與Control組相比，*P<0.05，**P<0.01；與miR-7-5p inhibitor組相比，#P<0.05

2.4 敲除OIP5-AS1對(duì)A549/DDP細(xì)胞生長(zhǎng)的影響克隆形成分析實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與Control組相比，sh-OIP5-AS1組A549/DDP細(xì)胞生長(zhǎng)明顯減少(P<0.05，圖8)，miR-7-5p inhibitor組A549/DDP細(xì)胞生長(zhǎng)明顯增加(P<0.05)。與miR-7-5p inhibitor組相比，sh-OIP5-AS1+inhibitor組A549/DDP細(xì)胞生長(zhǎng)明顯減少(P<0.05)。

圖8 克隆形成檢測(cè)敲除OIP5-AS1后A549/DDP細(xì)胞生長(zhǎng)：A.Control組；B.sh-OIP5-AS1組；C.miR-7-5p inhibitor組；D.sh-OIP5-AS1+inhibitor組

2.5 敲除OIP5-AS1后Ki-67、PCNA、MDR1蛋白表達(dá)Western blot分析顯示，與Control組相比，sh-OIP5-AS1組Ki-67、PCNA、MDR1表達(dá)明顯降低(P<0.05，圖9)，miR-7-5p inhibitor組Ki-67、PCNA、MDR1表達(dá)明顯增加(P<0.05)。與miR-7-5p inhibitor組相比，sh-OIP5-AS1+inhibitor組Ki-67、PCNA、MDR1表達(dá)明顯降低(P<0.05)。

圖9 Western blot法檢測(cè)敲除OIP5-AS1后A549/DDP細(xì)胞Ki-67、PCNA、MDR1蛋白表達(dá)

2.6 敲除OIP5-AS1對(duì)A549/DDP細(xì)胞凋亡的影響利用流式細(xì)胞術(shù)分析顯示，與Control組相比，sh-OIP5-AS1組細(xì)胞凋亡率明顯升高(P<0.05，圖10)，miR-7-5p inhibitor組細(xì)胞凋亡率明顯降低(P<0.05)。與miR-7-5p inhibitor組相比，sh-OIP5-AS1+inhibitor組細(xì)胞凋亡率明顯升高(P<0.05)。

圖10 敲除OIP5-AS1促進(jìn)A549/DDP細(xì)胞凋亡：A.Control組；B.sh-OIP5-AS1組；C.miR-7-5p inhibitor組；D.sh-OIP5-AS1+inhibitor組

2.7 敲除OIP5-AS1后Bax、BCL-2蛋白表達(dá)Western blot分析顯示，與Control組相比，sh-OIP5-AS1組BCL-2表達(dá)明顯降低(P<0.05，圖11)，Bax表達(dá)明顯增加(P<0.05)，miR-7-5p inhibitor組A549/DDP細(xì)胞中BCL-2表達(dá)明顯增加(P<0.05)，Bax表達(dá)明顯降低(P<0.05)。與miR-7-5p inhibitor組相比，sh-OIP5-AS1+inhibitor組BCL-2表達(dá)明顯降低(P<0.05)，Bax表達(dá)明顯增加(P<0.05)。

圖11 Western blot法檢測(cè)敲除OIP5-AS1后A549/DDP細(xì)胞Bax、BCL-2蛋白表達(dá)

2.8 敲除OIP5-AS1調(diào)節(jié)miR-7-5p/PARP1軸增強(qiáng)A549/DDP細(xì)胞的化學(xué)敏感性通過生物信息學(xué)軟件TargetScan分析預(yù)測(cè)結(jié)果顯示，PARP1 3′UTR的685～692 bp區(qū)域存在has-miR-7-5p的潛在結(jié)合位點(diǎn)，故PARP1是miR-7-5p的靶向調(diào)節(jié)基因之一(圖12)；轉(zhuǎn)染pLenti-CMV-PARP1于A549/DDP細(xì)胞，利用Western blot檢測(cè)Control組、sh-OIP5-AS1組、pLenti-CMV-PARP1組和sh-OIP5-AS1+PARP1組中PARP1、Ki-67、MDR1和BCL-2的表達(dá)水平。與Control組相比，sh-OIP5-AS1組中PARP1、Ki-67、MDR1、BCL-2表達(dá)明顯降低(P<0.05，圖13)，pLenti-CMV-PARP1組PARP1、Ki-67、MDR1、BCL-2表達(dá)明顯增加(P<0.05)；與pLenti-CMV-PARP1組相比，sh-OIP5-AS1+PARP1組PARP1、Ki-67、MDR1、BCL-2表達(dá)明顯降低(P<0.05)。用克隆形成分析檢測(cè)A549/DDP細(xì)胞的生長(zhǎng)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡。與Control組相比，sh-OIP5-AS1組中細(xì)胞凋亡率明顯升高(P<0.05，圖14)，細(xì)胞生長(zhǎng)明顯減少(P<0.05，圖15)；pLenti-CMV-PARP1組細(xì)胞凋亡率明顯降低(P<0.05)，細(xì)胞生長(zhǎng)明顯增加(P<0.05)。與pLenti-CMV-PARP1組相比，sh-OIP5-AS1+PARP1組細(xì)胞凋亡率明顯升高(P<0.05)，細(xì)胞生長(zhǎng)明顯減少(P<0.05)。

圖12 PARP1與miR-7-5p結(jié)合區(qū)域及突變區(qū)域

圖13 Western blot法檢測(cè)PARP1、Ki-67、MDR1、BCL-2蛋白表達(dá)

圖14 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡：A.Control組；B.sh-OIP5-AS1組；C.pLenti-CMV-PARP1組；D.sh-OIP5-AS1+PARP1組

圖15 克隆形成檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)：A.Control組；B.sh-OIP5-AS1組；C.pLenti-CMV-PARP1組；D.sh-OIP5-AS1+PARP1組

3 討論

肺癌是男性預(yù)后較差的癌癥之一[4]，以腺癌和鱗癌為主要亞型，NSCLC為主要的組織病理學(xué)亞型。研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXD2-AS1/miR185-5p通過增強(qiáng)順鉑耐藥癌細(xì)胞的化學(xué)敏感性，抑制NSCLC[5]。lncRNA TUG1通過削弱miR-221依賴的PTEN，增強(qiáng)NSCLC的化學(xué)敏感性[6]。本實(shí)驗(yàn)通過增強(qiáng)化學(xué)敏感性來探究lncRNA和miRNA相互作用對(duì)NSCLC的作用和分子機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了順鉑對(duì)正常肺細(xì)胞系BEAS-2B、肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和順鉑耐藥肺癌細(xì)胞A549/DDP的IC50值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，順鉑對(duì)A549/DDP細(xì)胞的毒性作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于BEAS-2B和A549。因此，本實(shí)驗(yàn)利用A549/DDP細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。此外，A549/DDP細(xì)胞中OIP5-AS1高表達(dá)，miR-7-5p低表達(dá)。表明OIP5-AS1和miR-7-5p可能參與A549/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性。

lcnRNA調(diào)控基因表達(dá)程序，影響特定的細(xì)胞過程。lcnRNA形成一組核酸，參與多種不同的細(xì)胞機(jī)制，包括增殖、分化、凋亡和衰老[2]。lcnRNA OIP5-AS1抑制GAK表達(dá)控制有絲分裂。lcnRNA OIP5-AS1為NSCLC的生物標(biāo)志物。OIP5-AS1可靶向多種miRNA來調(diào)節(jié)肺癌的發(fā)生。Wang等[7]發(fā)現(xiàn)，OIP5-AS1通過靶向miR-378a-3p促進(jìn)肺癌細(xì)胞增殖，導(dǎo)致預(yù)后不良。本實(shí)驗(yàn)利用RT-qPCR檢測(cè)BEAS-2B、A549和A549/DDP細(xì)胞中OIP5-AS1的表達(dá)水平，結(jié)果顯示，A549/DDP細(xì)胞中OIP5-AS1高表達(dá)；且敲除OIP5-AS1后，A549/DDP細(xì)胞生長(zhǎng)被抑制，化學(xué)敏感性增強(qiáng)，A549/DDP細(xì)胞凋亡增加。

microRNAs(miRNAs)是單鏈非編碼、長(zhǎng)度在20～25個(gè)核苷酸之間的RNA，在真核生物中廣泛表達(dá)。不同的miRNA根據(jù)其特定的表達(dá)模式、靶基因表達(dá)或細(xì)胞環(huán)境，能夠同時(shí)作為癌基因和抑癌基因發(fā)揮作用[8]。miRNA是腫瘤進(jìn)展的關(guān)鍵調(diào)控因子，研究發(fā)現(xiàn)，miR-7-5p通過靶向PAK2，誘導(dǎo)NSCLC細(xì)胞生長(zhǎng)抑制、細(xì)胞周期阻滯和凋亡[9]。miR-7-5p可以有效治療NSCLC產(chǎn)生的細(xì)胞學(xué)效應(yīng)[10]。本實(shí)驗(yàn)利用RT-qPCR檢測(cè)BEAS-2B、A549和A549/DDP細(xì)胞中miR-7-5p的表達(dá)水平，并通過生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)了miR-7-5p的潛在靶標(biāo)。結(jié)果顯示，A549/DDP細(xì)胞中miR-7-5p低表達(dá)。miR-7-5p是OIP5-AS1的靶向調(diào)節(jié)基因之一，且兩者之間為負(fù)相關(guān)調(diào)控。

PARP1在癌癥的臨床治療中，被認(rèn)為是通過抑制PARP1聚合酶和捕獲PARP1-DNA來發(fā)揮其細(xì)胞毒性[11]。PARP1在軟組織肉瘤中被認(rèn)為是潛在的治療靶點(diǎn)[12]。研究發(fā)現(xiàn)，通過抑制PARP1表達(dá)可以緩解順鉑抗癌治療的副作用[13]?；ㄉS酮作為一種強(qiáng)效高選擇性PARP1抑制劑，能夠增強(qiáng)NSCLC的抗癌作用[14]。PARP1在NSCLC組織中被微囊藻毒素上調(diào)，抑制癌細(xì)胞增殖[15]。miR-7-5p介導(dǎo)的PARP1下調(diào)影響小細(xì)胞肺癌DNA同源重組的修復(fù)和對(duì)阿霉素的耐藥性[16]。同樣地，本實(shí)驗(yàn)通過生物信息學(xué)軟件TargetScan對(duì)miR-7-5p和PARP1的靶向關(guān)系進(jìn)行預(yù)測(cè)，結(jié)果顯示，PARP1是miR-7-5p的靶向調(diào)節(jié)基因之一，且兩者之間為負(fù)向調(diào)控關(guān)系。下調(diào)PARP1可以增強(qiáng)A549/DDP細(xì)胞的化學(xué)敏感性，抑制NSCLC。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，lncRNA OIP5-AS1通過上調(diào)miR-7-5p或下調(diào)PARP1，增強(qiáng)A549/DDP細(xì)胞的化學(xué)敏感性，抑制NSCLC。