歐陽(yáng)恩鴻，劉君花，賀志明，魏海諒，羅湘軍

(1.邵陽(yáng)學(xué)院 藥學(xué)院，湖南 邵陽(yáng)，422000；2.邵陽(yáng)學(xué)院附屬二醫(yī)院藥劑科，湖南 邵陽(yáng)，422000；3.邵陽(yáng)學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，湖南 邵陽(yáng)，422000)

因動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)而導(dǎo)致的心血管疾病，已成為嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的疾病之一，預(yù)測(cè)到2030年，全球因心血管疾病而死亡的人數(shù)將達(dá)到2 500萬(wàn)[1-2]。相關(guān)研究[3]表明動(dòng)脈粥樣硬化的形成與炎性反應(yīng)和血管內(nèi)皮損傷有關(guān)。虎杖苷是我國(guó)傳統(tǒng)中藥虎杖中的一種活性物質(zhì)，對(duì)AS的發(fā)生和發(fā)展具有一定的干預(yù)作用[4-6]。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)建立SD大鼠AS模型，觀(guān)察虎杖苷對(duì)AS大鼠血脂與內(nèi)皮功能的作用，以探討虎杖苷抗AS的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性 SD大鼠，60只，體質(zhì)量200～250 g；普通SPF級(jí)大鼠飼料；高脂飼料(以上均購(gòu)自南京君科生物工程有限公司)，高脂飲料配方為普通飲料(82.3%)，豬油(10%)，白糖(5%)，膽固醇(2%)，膽酸鈉(0.5%)，丙基硫氧嘧啶(0.2%)。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑

辛伐他汀(購(gòu)自杭州默沙東制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字J20180007)；虎杖苷(購(gòu)自上海谷研實(shí)業(yè)有限公司，貨號(hào)GOY-11004含量>98%)；各試劑盒(TG測(cè)定試劑盒、HDL-C測(cè)定試劑盒、CHO測(cè)定試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇LDL-C測(cè)定試劑盒、SOD試劑盒、MDA ELISA試劑盒、NO試劑盒、AST ELISA試劑盒、AST ELISA試劑盒)均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。

1.3 AS大鼠模型的建立

60只雄性SD大鼠，隨機(jī)分為正常組、模型組、虎杖苷組和辛伐他汀組，每組15只。正常組以普通大鼠飼料喂養(yǎng)，同時(shí)以生理鹽水[2 mL/(kg·d)]灌胃，其余各組以高脂飼料喂養(yǎng)，同時(shí)腹腔注射維生素D3[2 mL/(kg·d)]，虎杖苷組以虎杖苷[160 mg/(kg·d)]灌胃，辛伐他汀組以辛伐他汀[5 mg/(kg·d)]灌胃，共12周。

1.4 樣品采集與處理

每周稱(chēng)量大鼠體質(zhì)量并記錄，第0，4和8周腹動(dòng)脈采血3 mL，離心，血清用于測(cè)定血脂；12周后測(cè)量并計(jì)算每組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)百分率，并以(體質(zhì)量×1 000)1/3/體長(zhǎng)計(jì)算Lee’s指數(shù)，其中體質(zhì)量單位為g，體長(zhǎng)單位為cm。然后以10%水合氯醛(5 mg/kg)麻醉大鼠，仰臥位固定，腹腔采血后離心分離血清，于-20 ℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)膜-中膜厚度(intima-media thickness,IMT)與頸動(dòng)脈斑塊面積的測(cè)定

在專(zhuān)業(yè)醫(yī)師指導(dǎo)下，分別于第0，4，8和12 周以彩超檢查各組大鼠頸動(dòng)脈IMT與頸動(dòng)脈斑塊面積。

1.6 血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)

取經(jīng)1.4處理后的血清，嚴(yán)格按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)指導(dǎo)操作檢測(cè)總膽固醇(CHO)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)各項(xiàng)指標(biāo)含量。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 造模前后大鼠體質(zhì)量變化與Lee’s指數(shù)

造模前，各組大鼠體質(zhì)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；造模12周以后，與正常組相比，模型組大鼠體質(zhì)量、體質(zhì)量增長(zhǎng)率和Lee’s指數(shù)均明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組相比，虎杖苷組與辛伐他汀組大鼠體質(zhì)量、體質(zhì)量增長(zhǎng)率與Lee’s指數(shù)均下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；虎杖苷組與辛伐他汀組相比，大鼠體質(zhì)量、體質(zhì)量增長(zhǎng)率和Lee’s指數(shù)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 大鼠體質(zhì)量變化與Lee’s指數(shù)Table 1 Changes of rat body weight and Lee’s index in

2.2 虎杖苷對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠IMT的影響

造模前，各組大鼠IMT水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；造模后，模型組大鼠IMT水平在第4，8和12周末顯著高于正常組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；虎杖苷組和辛伐他汀組大鼠IMT水平在第4，8和12周末顯著低于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；虎杖苷組和辛伐他汀組相比較，大鼠IMT水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)圖1。

與正常組相比，*P<0.05；與模型組相比，△P<0.05圖1 虎杖苷對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠IMT的影響Fig.1 Effects of polydatin on IMT of AS

2.3 虎杖苷對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血脂水平的影響

與正常組相比，*P<0.05；與模型組相比，△P<0.05圖2 虎杖苷對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠 CHOL水平的影響Fig.2 Effects of polydatin on CHOL of AS

造模前，各組大鼠血脂水平(TG，CHOL，LDL-C)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；造模后，模型組大鼠血脂水平(TG，CHOL，LDL-C)逐步升高，且隨時(shí)間推移升高越明顯，與正常組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；虎杖苷組和辛伐他汀組大鼠血脂水平(TG，CHOL，LDL-C)也隨時(shí)間推移而升高，但升高幅度顯著低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；虎杖苷組與辛伐他汀組相比，血脂水平(TG，CHOL，LDL-C)升高差異不大，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)圖2～4。

與正常組相比，*P<0.05；與模型組相比，△P<0.05圖3 虎杖苷對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠 TG水平的影響Fig.3 Effects of polydatin on TG of AS

與正常組相比，*P<0.05；與模型組相比，△P<0.05圖4 虎杖苷對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠 LDL-C水平的影響Fig.4 Effects of polydatin on LDL-C of AS

2.4 虎杖苷對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠SOD，NO，MDA表達(dá)的影響

造模后第12周末，對(duì)各組大鼠血清SOD，NO，MDA含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示：與正常組比較，模型組大鼠血清的SOD，NO水平降低而MDA水平升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，虎杖苷組和辛伐他汀組大鼠血清SOD，NO水平升高，MDA水平降低但未恢復(fù)到正常水平，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；虎杖苷組大鼠與辛伐他汀組大鼠比較，血清SOD，NO，MDA水平無(wú)明顯差異，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 虎杖苷對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠SOD，NO，MDA的影響Table 2 Effects of polydatin on SOD，NO and MDA in AS

2.5 虎杖苷對(duì)AS大鼠AST和ALT表達(dá)的影響

造模后第12周末檢測(cè)各組大鼠AST和ALT的含量，結(jié)果顯示：與正常組比較，模型組大鼠肝功能標(biāo)志物AST和ALT的含量明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，虎杖苷組大鼠AST和ALT的含量明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而辛伐他汀組大鼠AST和ALT的含量與模型組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，這可能與辛伐他汀具有肝臟損害不良反應(yīng)有關(guān)；虎杖苷組與辛伐他汀組比較，虎杖苷組大鼠AST和ALT的含量下降更明顯，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 虎杖苷對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠AST和AST表達(dá)的影響Table 3 Effects of polydatin on the expression of AST and ALT in AS

3 討論

AS是多種心血管疾病的病理基礎(chǔ)，其形成原因有多種，血脂異常是其發(fā)病原因之一，而肝臟是合成與代謝膽固醇、清除血漿LDL的重要場(chǎng)所[7]。已有大量研究[8-9]表明：LDL-C在血管內(nèi)皮功能受損和AS發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮了重要作用，是AS的主要致病因素之一。當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受損暴露時(shí)，LDL-C尤其是氧化型低密度脂蛋白o(hù)x-LDL會(huì)加劇內(nèi)皮細(xì)胞損傷甚至引起功能障礙，內(nèi)皮功能障礙會(huì)導(dǎo)致“纖維帽”的形成。SOD和NO是體內(nèi)具有血管保護(hù)作用的生物活性物質(zhì)，其合成與釋放的異常會(huì)引起AS等心腦血管病變的發(fā)生[10]。而MDA，血清TC和LDL是損害血管的一類(lèi)活性物質(zhì)。

虎杖苷是中藥虎杖的一個(gè)活性成分，具有保護(hù)心血管、調(diào)節(jié)血脂、抗血栓等方面的藥理作用[11-12]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)高脂飼料喂養(yǎng)，制造AS大鼠模型，檢測(cè)造模前后虎杖苷對(duì)AS大鼠IMT、體質(zhì)量和Lee’s指數(shù)，以及血清SOD，MDA，NO表達(dá)的變化情況，并通過(guò)測(cè)定AST和ALT以反映大鼠肝功能的變化情況，結(jié)果顯示虎杖苷對(duì)AS模型大鼠的治療效果與辛伐他汀基本等同，能降低IMT，TG，CHOL，LDL-C，MDA表達(dá)水平，并提高SOD，NO的表達(dá)水平，這與相關(guān)研究[4]結(jié)果一致。本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)虎杖苷有明顯強(qiáng)于辛伐他汀的抑制血清AST，ALT表達(dá)的作用，提示虎杖苷不僅能有效對(duì)抗AS病變，而且還具有明顯的保肝作用，這也與中藥虎杖的臨床應(yīng)用相吻合，但虎杖苷是否是其保肝的主要活性物質(zhì)及其保肝機(jī)制如何，值得進(jìn)一步研究。

如上所述，虎杖苷既具有抗AS形成的作用，也有較好的血管內(nèi)皮和肝臟保護(hù)作用。其具體作用機(jī)制值得進(jìn)一步研究，但其抗AS作用顯示出可能的應(yīng)用前景。