劉融 崔凱 白福恒 刁其玉

（1. 蘭州大學(xué)草地農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 蘭州大學(xué)草地農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，蘭州 730020；2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部

飼料生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100081；3. 德州市陵城區(qū)白富恒養(yǎng)殖場(chǎng)，德州 250523）

氧化應(yīng)激（Oxidative stress）是指機(jī)體受到外界刺激產(chǎn)生并積累過(guò)多自由基所導(dǎo)致的體內(nèi)氧化還原失衡狀態(tài)。在生產(chǎn)中，氧化應(yīng)激引發(fā)腹瀉等動(dòng)物性疾病、導(dǎo)致幼畜成活率下降，并對(duì)畜禽生產(chǎn)水平和畜產(chǎn)品品質(zhì)造成嚴(yán)重影響［1］。畜禽產(chǎn)生氧化應(yīng)激的主要原因包括機(jī)體的生理狀況、日糧營(yíng)養(yǎng)水平和環(huán)境因素等。

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是動(dòng)物體內(nèi)自由基產(chǎn)生的物質(zhì)基礎(chǔ)，也是動(dòng)物體內(nèi)清除自由基的物質(zhì)來(lái)源。近年來(lái)，關(guān)于營(yíng)養(yǎng)水平與機(jī)體健康的研究成為生命科學(xué)領(lǐng)域的焦點(diǎn)。2019年，Cell雜志同時(shí)發(fā)表了3篇文章詳細(xì)報(bào)道了禁食和嚴(yán)重卡路里限制對(duì)不同免疫細(xì)胞水平和定位及其機(jī)制的影響［2-4］。Nature報(bào)道密西根大學(xué)Ursula Jakob教授團(tuán)隊(duì)關(guān)于生命早期的氧化應(yīng)激會(huì)讓線蟲活得更久的最新發(fā)現(xiàn)［5］。模式動(dòng)物日糧中能量和蛋白質(zhì)攝入限制引起的細(xì)胞老化速率降低等現(xiàn)象可能是由蛋氨酸限制引起的ROS產(chǎn)生及氧化損傷的減少導(dǎo)致的［6］。

限制飲食中蛋氨酸可以迅速而有效地改變機(jī)體的代謝狀態(tài)，尤其是以蛋氨酸為中心的代謝路徑。多項(xiàng)研究證實(shí)，蛋氨酸代謝調(diào)控炎癥性巨噬細(xì)胞活化的免疫代謝，蛋氨酸限制飲食可影響腫瘤的發(fā)生和治療。蛋氨酸對(duì)于緩解機(jī)體氧化應(yīng)激，提高機(jī)體抗氧化能力具有重要影響［7-8］。MetR可以通過(guò)減少線粒體活性氧產(chǎn)生、調(diào)控Nrf2、ATF4、AP-1等轉(zhuǎn)錄因子介導(dǎo)的關(guān)鍵信號(hào)通路以及改變miRNAs表達(dá)等方式參與氧化應(yīng)激的調(diào)控，改善氧化狀態(tài)并在一定程度上促進(jìn)機(jī)體健康。本文綜述了氧化應(yīng)激的產(chǎn)生、蛋氨酸調(diào)控氧化應(yīng)激的機(jī)制及信號(hào)通路，以期為畜牧生產(chǎn)提供理論指導(dǎo)。

1 氧化應(yīng)激的產(chǎn)生及影響

1.1 氧化應(yīng)激的產(chǎn)生機(jī)理

體內(nèi)自由基產(chǎn)生過(guò)多，超出機(jī)體抗氧化系統(tǒng)的清除能力，機(jī)體氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失衡，造成細(xì)胞與機(jī)體氧化損傷，即產(chǎn)生了氧化應(yīng)激。機(jī)體自由基主要包括活性氧族（Reactiveoxygenspecies，ROS）和活性氮族（Reactivenitrogenspecies，RNS）。機(jī)體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)包括酶類和非酶類，酶類抗氧化系統(tǒng)主要是超氧化物歧化酶（Superoxidedismutase，SOD）、輔 酶Q、谷 胱 甘 肽 過(guò) 氧 化 物 酶（Glutathioneperoxidase，GSH-Px）、谷胱甘肽還原酶（GSSG-R）、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（Glutathionetransferase，GST）、過(guò)氧化氫酶（Catalase，CAT）等；非酶類抗氧化系統(tǒng)主要有谷胱甘肽、維生素A、維生素C、維生素E、β-胡蘿卜素、茶多酚等；另外，體內(nèi)高濃度的游離氨基酸也可作為活性氧的清除劑［9］。以上物質(zhì)能夠直接清除自由基或通過(guò)抵抗自由基發(fā)揮作用，進(jìn)而保護(hù)機(jī)體免受自由基的傷害。氧化還原狀態(tài)的判定是必要的，目前通過(guò)檢測(cè)機(jī)體本身的氧化還原狀態(tài)以及組織或血液中的氧化應(yīng)激代謝產(chǎn)物、抗氧化物質(zhì)（抗氧化酶和非酶抗氧化劑）可以對(duì)機(jī)體氧化應(yīng)激狀態(tài)進(jìn)行綜合判定［10］。

1.2 氧化應(yīng)激對(duì)機(jī)體以及畜禽生產(chǎn)的影響

氧化應(yīng)激會(huì)引發(fā)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)、脂類和DNA等細(xì)胞大分子的氧化損傷，造成遺傳信息的丟失或改變，也可使細(xì)胞膜上不飽和脂肪酸過(guò)氧化，改變細(xì)胞膜的通透性，破壞細(xì)胞穩(wěn)態(tài)［9］。在人類病理學(xué)研究中，氧化還原失衡被認(rèn)為與胰島素抵抗、動(dòng)脈粥樣硬化、癌癥和神經(jīng)退行性疾病的病因和進(jìn)展有關(guān)［11］。在畜禽生產(chǎn)中，氧化應(yīng)激導(dǎo)致幼齡畜禽腹瀉率上升、抗病力下降，成活率降低；降低成年畜禽的生產(chǎn)性能并對(duì)畜禽產(chǎn)品品質(zhì)造成不利影響［1］。斷奶應(yīng)激過(guò)程存在嚴(yán)重的氧化應(yīng)激并伴隨腸屏障功能受損、疾病易感性增加和內(nèi)分泌失調(diào)等問(wèn)題，Zhu等［12］的研究表明仔豬斷奶應(yīng)激刺激自由基的產(chǎn)生并抑制抗氧化能力。畜禽飼養(yǎng)中的營(yíng)養(yǎng)及理化環(huán)境等因素均是氧化應(yīng)激的誘因，溫雅俐［13］的研究表明，熱應(yīng)激可降低奶牛采食量和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率，降低產(chǎn)奶量。馬燕芬等［14］的研究表明，熱應(yīng)激破壞奶山羊瘤胃上皮組織結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致瘤胃黏膜屏障通透性增加，降低其生理機(jī)能和生產(chǎn)性能。

2 蛋氨酸對(duì)氧化應(yīng)激的影響

蛋氨酸是一種含硫必需氨基酸，是琥珀酰輔酶A、同型半胱氨酸、半胱氨酸、肌酸和肉堿的前體。蛋氨酸具有重要的生理功能，研究表明蛋氨酸除了作為蛋白質(zhì)合成過(guò)程中的起始氨基酸參與機(jī)體蛋白質(zhì)的合成外，還可以影響哺乳動(dòng)物的先天免疫系統(tǒng)和消化功能，并干預(yù)脂質(zhì)代謝、內(nèi)源性抗氧化酶（如甲硫氨酸亞砜還原酶A）的激活以及谷胱甘肽的生物合成以對(duì)抗氧化應(yīng)激［15］。

適量添加蛋氨酸可改善畜禽氧化應(yīng)激狀態(tài)，仔豬飼喂高水平含硫氨基酸（SAA）（0.85%），總抗氧化能力，超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶活性增加［16］。李亮［7］的研究表明，蛋氨酸能夠顯著提高雉雞血清及肝臟抗氧化能力。蛋氨酸過(guò)量添加導(dǎo)致蛋氨酸中毒，危害動(dòng)物健康導(dǎo)致生產(chǎn)性能的降低［17］。模式動(dòng)物研究結(jié)果多反映出MetR對(duì)氧化應(yīng)激的正面效應(yīng)，MetR后的高脂日糧小鼠肝臟與血漿中T-AOC和GSH-Px活力顯著增加，丙二醛和ROS含量極顯著降低，血脂和肝臟脂肪積累也顯著降低［8］。雖然MetR可產(chǎn)生如減少內(nèi)臟脂肪、增加胰島素敏感性和改善脂質(zhì)代謝等多種有益的生理效應(yīng)［18］，但MetR日糧會(huì)降低體重增長(zhǎng)速率，所以很明顯，MetR對(duì)大型家畜的生產(chǎn)意義不大。王杰［19］的研究表明，相對(duì)于蛋氨酸正常添加組，蛋氨酸限制組末重顯著降低，料重比顯著增加。MetR 顯著降低羔羊血清SOD活性，下調(diào)羔羊肝臟組織α型谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GSTA）、μ谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GSTM）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）等抗氧化相關(guān)基因的表達(dá)水平。Castellano等［20］的研究表明，日糧蛋氨酸缺乏時(shí)生長(zhǎng)豬肝臟GSH含量的降低和脂肪組織抗氧化酶活性的增加共同改變了細(xì)胞氧化還原狀態(tài)，該實(shí)驗(yàn)中，不同組織的抗氧化酶活性變化趨勢(shì)并不一致。目前，蛋氨酸對(duì)機(jī)體氧化應(yīng)激的影響的研究并未取得一致結(jié)果，處理效果與添加劑量以及動(dòng)物種類密切相關(guān)，仍需進(jìn)一步研究。

3 MetR調(diào)控氧化應(yīng)激的分子機(jī)制

MetR對(duì)細(xì)胞氧化應(yīng)激的調(diào)控是多種機(jī)制共同作用的結(jié)果，其中主要機(jī)制有兩種：MetR可減少線粒體中ROS（mtROS）的產(chǎn)生從而降低細(xì)胞氧化應(yīng)激狀態(tài)；MetR作用于信號(hào)通路調(diào)控肝臟組織抗氧化基因的表達(dá)，從而調(diào)控細(xì)胞氧化還原狀態(tài)。

3.1 MetR對(duì)線粒體ROS產(chǎn)生的影響

線粒體電子傳遞鏈由復(fù)合體 I、II、III、IV四個(gè)主要的氧化還原復(fù)合體酶系組成，其功能是進(jìn)行生物氧化，并與磷酸化相偶聯(lián)，共同產(chǎn)生ATP。電子在傳遞給末端氧化酶之前漏出呼吸鏈與氧反應(yīng)生成超氧自由基的過(guò)程是線粒體生成活性氧的源頭。Chance［21］的報(bào)道指出，正常生理狀態(tài)線粒體活性氧的產(chǎn)生量相當(dāng)于其耗氧的1%-2%，活性氧會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)、蛋白質(zhì)及線粒體DNA（mtDNA）等細(xì)胞大分子損傷。研究表明，活性氧在線粒體復(fù)合物 Ⅰ 和復(fù)合物 Ⅲ 中產(chǎn)生［22］，位于親水性復(fù)合物 Ⅰ 結(jié)構(gòu)域中的硫鐵簇等結(jié)構(gòu)，或位于復(fù)合物I的內(nèi)膜臂中的泛醌是導(dǎo)致復(fù)合物I ROS生成的主要電子輸運(yùn)組分；復(fù)合物 Ⅲ 的Q0位點(diǎn)的半醌自由基（UQH·）可能是O2生成O2

-·的單電子供體［23］。

大量研究表明，MetR性日糧可以降低線粒體活性氧的產(chǎn)生率，從而降低線粒體氧化損傷［6，24-27］。飼喂80% MetR日糧的大鼠肝臟、心臟線粒體的活性氧生成減少，特別是復(fù)合物I產(chǎn)生的活性氧，mtDNA氧化損傷標(biāo)記物（8-oxodg）濃度降低，線粒體糖氧化損傷標(biāo)記物（CEL和CML）、脂質(zhì)氧化損傷標(biāo)記物（MDAL和CML）、蛋白質(zhì)氧化損傷標(biāo)記物（GSA和AASA）含量降低［6，24］。飼喂40% MetR日糧7周后大鼠的心臟、肝臟、腦和腎臟組織以及30%MetR下仔豬的肝臟線粒體也獲得了類似的結(jié)果［24-26］（表1）。在上述研究中，活性氧生成的減少并不是氧通量降低引起的，因?yàn)榛钚匝跎傻臏p少時(shí)氧氣消耗量往往是不變或者增加的［6，24-26］。線粒體復(fù)合物濃度和活力的下降以及線粒體自由基泄露百分比的減少是MetR降低線粒體ROS的產(chǎn)生從而降低氧化損傷的主要原因。另外，部分研究顯示線粒體凋亡誘導(dǎo)因子（Apoptosis-inducing factor，AIF）的蛋白質(zhì)豐度降低［26］，但它的變化存在組織特異性［25］。

另外，MetR下模式動(dòng)物壽命的延長(zhǎng)支持線粒體自由基老化理論，許多研究結(jié)果認(rèn)為，長(zhǎng)壽物種中存在較低的mtROS產(chǎn)生，對(duì)內(nèi)源性抗氧化劑或蛋白質(zhì)和DNA修復(fù)系統(tǒng)的需求也較小，這樣有效降低了能量消耗［22］。研究表明MetR日糧下，線粒體中MnSOD含量不變［22-23］。對(duì)此研究者認(rèn)為，線粒體氧化應(yīng)激的減少是mtROS產(chǎn)生減少而不是抗氧化酶的增加。MetR作用于線粒體的機(jī)制有待于進(jìn)一步的研究。

3.2 MetR調(diào)控氧化應(yīng)激相關(guān)的信號(hào)通路

MetR導(dǎo)致蛋氨酸代謝途徑發(fā)生改變，其中轉(zhuǎn)硫途徑的改變導(dǎo)致肝臟GSH含量下降［28］，GSH濃度的降低可能作為信號(hào)分子調(diào)控基因表達(dá)。在氧化應(yīng)激通路中Nrf2、ATF4和AP-1/c-Jun是重要的氧化還原反應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子［29］。

3.2.1 核因子NF-E2相關(guān)因子（Nrf2） Nrf2-ARE通路是最廣泛的抗氧化應(yīng)激通路之一，是體內(nèi)最大的抗氧化應(yīng)激體系。Nrf2是細(xì)胞抗氧化反應(yīng)重要的調(diào)控因子，細(xì)胞在氧化應(yīng)激和親電子物的過(guò)量攻擊時(shí)能夠引起Nrf2/Keap1復(fù)合物解聚，游離的Nrf2迅速進(jìn)入細(xì)胞核，與小Maf等堿性亮氨酸拉鏈（bZIP）蛋白形成異二聚體與靶基因中抗氧化應(yīng)答原件（Antioxidant response element，ARE）序列結(jié)合，ARE位于半胱氨酸連接酶催化亞基（Glutamate cysteineligasecatalyticsubunit，GCLC）、血紅素氧合酶1（HO-1）和NAD（P）H醌氧化還原酶1（NQO1）以及α和π型谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（α-GST；GST-π）等許多解毒和抗氧化酶基因的啟動(dòng)子區(qū)域［11］。Nrf2與ARE結(jié)合可增強(qiáng)抗氧化酶系統(tǒng)相關(guān)基因的表達(dá)，發(fā)揮抗氧化作用，重建細(xì)胞氧化還原穩(wěn)態(tài)。研究表明，MAPKs、PI3K/Akt和蛋白激酶C均可在氧化應(yīng)激下被激活［30］。通過(guò)檢測(cè)MAPK家族中胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、絲裂原激活蛋白激酶（p38）和c-Jun氨基端激酶（JNK）等轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的磷酸化水平以及RNA干擾等手段，證實(shí)在小鼠肝臟原代細(xì)胞中，MetR通過(guò)激活ERK參與GST的表達(dá)調(diào)控［31］。

表1 MetR對(duì)動(dòng)物線粒體氧化應(yīng)激相關(guān)參數(shù)變化

二相解毒酶GST（包括A3/5、M1和P1）在肝臟組織中的誘導(dǎo)作用在喂食蛋白質(zhì)缺乏日糧或蛋氨酸缺乏日糧的大鼠中得到報(bào)道［11］。Tsai等［32］的研究表明，GSTP基因在大鼠原代肝細(xì)胞中的表達(dá)由含硫氨基酸限制特異性誘導(dǎo)上調(diào)，而不是通過(guò)亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸或賴氨酸的限制。Lin等［11］的研究發(fā)現(xiàn)，MetR通過(guò)ERK-Nrf2-GPEI信號(hào)通路上調(diào)GSTP基因轉(zhuǎn)錄。小鼠對(duì)MetR日糧肝轉(zhuǎn)錄組學(xué)反應(yīng)的分析表明，蛋氨酸限制性日糧對(duì)肝臟轉(zhuǎn)錄組的影響主要集中在對(duì)肝臟促炎信號(hào)轉(zhuǎn)錄的下調(diào)，以及抗氧化反應(yīng)上調(diào)。肝臟中促炎通路基因表達(dá)的減少可能是NFE2l2基因的激活驅(qū)動(dòng)抗氧化反應(yīng)的結(jié)果［33］。

3.2.2 活 化 轉(zhuǎn) 錄 因 子4（ATF-4） ATF-4是 一 種bZIP轉(zhuǎn)錄因子，由缺氧、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、氨基酸剝奪和氧化應(yīng)激等應(yīng)激信號(hào)誘導(dǎo)的，ATF4 與 CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白（CCAAT /enhancer-binding protein，C/EBP）形成二聚體，與 C/EBP 激活轉(zhuǎn)錄因子應(yīng)答元件（C/EBPactivating transcription factor response elements，CARE）結(jié)合，參與調(diào)控氧化應(yīng)激、氨基酸合代謝、脂質(zhì)代謝、自噬和血管生成等相關(guān)基因的表達(dá)［34］。

Kilberg等［35］綜述了調(diào)控ATF4表達(dá)的幾種途徑，其中MetR可通過(guò)PERK/eIF2α/ATF4和GCN2/eIF2α/ATF4通路誘導(dǎo) ATF4的表達(dá)。一般性調(diào)控阻遏蛋白 激 酶2（General control nonderepressible 2kinase，GCN2）是氨基酸缺乏的感受器，在維持機(jī)體氨基酸平衡相關(guān)的信號(hào)通路的調(diào)節(jié)過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，在限制必需氨基酸的細(xì)胞外供應(yīng)或阻斷其它非必需氨基酸的合成所誘導(dǎo)的氨基酸反應(yīng)（AAR）中被激活。幾乎每種氨基酸（包括蛋氨酸）氨基酸限制時(shí)，細(xì)胞內(nèi)空載tRNA增多，激活GCN2，從而引起 eIF2α 的磷酸化，上調(diào)ATF-4的表達(dá)［36］。除GCN2外PERK也參與eIF2α 的磷酸化和翻譯控制過(guò)程［37］。由理化刺激引發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（Endoplasmic reticulum stress，ERS）會(huì)觸發(fā)未折疊蛋白反應(yīng)（Unfolded protein response，UPR）的多條通路，其中包括激活eIF2α的激酶PERK，eIF2α的磷酸化可上調(diào)ATF4的合成和下游轉(zhuǎn)錄程序。GCN2或PERK的營(yíng)養(yǎng)傳感參與蛋氨酸限制期間對(duì)蛋白質(zhì)平衡長(zhǎng)期控制機(jī)制，但也有研究表明它們對(duì)MetR期間的代謝適應(yīng)是不必要的［18］。

eIF2α的激酶PERK通常在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激條件被激活，但也有研究指出，在沒(méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的情況下，MetR也 可 激 活PERK并 通 過(guò)PERK向eIF2α/ATF4和Nrf2傳遞信號(hào)。MetR的結(jié)果是通過(guò)eIF2α/ATF4激活綜合應(yīng)激反應(yīng)（ISR）并激活Nrf2敏感抗氧化反應(yīng)程序［37］。上述機(jī)制對(duì)MetR誘導(dǎo)的整體應(yīng)激反應(yīng)（ISR）具有重要意義，它有助于調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)和生理反應(yīng)實(shí)現(xiàn)MetR期間的代謝適應(yīng)（圖1）。

圖1 MetR調(diào)控Nrf2、ATF-4信號(hào)通路

3.2.3 激活蛋白1（AP-1）及其他轉(zhuǎn)錄因子 AP-1/c-Jun作為許多細(xì)胞內(nèi)信號(hào)級(jí)聯(lián)的靶點(diǎn)，這些級(jí)聯(lián)被細(xì)胞外信號(hào)分子（如細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子和激素）或各種物理化學(xué)應(yīng)激源激活。AP-1與細(xì)胞增殖、程序性死亡的調(diào)節(jié)和應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)［38］。研究發(fā)現(xiàn)，L-半胱氨酸和/或L-蛋氨酸供應(yīng)不足降低細(xì)胞GSH含量，并激活氧化還原敏感轉(zhuǎn)錄因子，包括Nrf2、AP-1和NF-kb［39］。

Tsai等［32］研究表明，限制L-蛋氨酸可能通過(guò)GSH耗竭從而激活ERK-AP-1信號(hào)通路，AP-1與GSTP增強(qiáng)子I（GPE I）的5'上游區(qū)域的TPA反應(yīng)元件（TPAResponse Element，TRE）結(jié)合，上調(diào)GSTP基因的表達(dá)。

AP-1/c-Jun和ATF4除了單獨(dú)參與細(xì)胞應(yīng)激下的反應(yīng)，還可與Nrf2共同作用于氧化還原反應(yīng)。Nrf2與其他bZIP成員形成二聚體，參與ARE的激活，除了與小Maf蛋白結(jié)合外，bZIP蛋白c-Jun（AP-1轉(zhuǎn)錄因子的主要成分）和ATF4也可能與Nrf2二聚［29］。Venugopal 和Jaiswal［40-41］的研究表明，c-Jun是Nrf2激活A(yù)RE依賴性轉(zhuǎn)錄的結(jié)合伙伴，而Fos家族的成員是抑制因子。He等［42］的研究表明，ATF4可協(xié)同 Nrf2 調(diào)控ARE依賴性的Ⅱ相解毒酶和抗氧化酶基因的表達(dá)。

3.3 MetR改變小RNA（miRNAs）表達(dá)

蛋氨酸水平除了影響DNA 甲基化這種非常普遍的基因表達(dá)調(diào)控方式，還可能通過(guò)調(diào)節(jié)miRNAs實(shí)現(xiàn)營(yíng)養(yǎng)表觀遺傳學(xué)調(diào)控。miRNAs屬于短鏈非編碼RNA，在動(dòng)物體內(nèi)通常參與轉(zhuǎn)錄后基因沉默的調(diào)節(jié)作用。氧化應(yīng)激可以改變?cè)S多miRNAs的表達(dá)水平，但是這些變化如何與氧化應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)卻知之甚少。

Engedal等［43］研究發(fā)現(xiàn)13種miRNA在人類細(xì)胞中受到氧化應(yīng)激的調(diào)節(jié)：let-7f、miR-9、miR-16、miR-21、miR-22、miR-29b、miR-99a、miR-125b、miR-128、miR-143、miR-144、miR-155和miR-200c。利用數(shù)據(jù)庫(kù)及軟件預(yù)測(cè)了以上miRNA的共同基因靶點(diǎn)和25條共同的細(xì)胞通路，并利用功能分析得出miRNA的靶基因主要作用于（蛋白）泛素化途徑。

研究表明，miRNAs受蛋氨酸可用性的調(diào)節(jié)，并可能在代謝中發(fā)揮作用［44-45］。攝入MetR日糧（0.12%）的小鼠骨髓中的miR-133a，miR-335-5p和miR-204表達(dá)增加，血漿和肝臟中的miR-31表達(dá)增加［46］。虹鱒魚攝入MetR日糧（0.775%）4周，骨骼肌中的miR-133a水平較低［47］。研究者認(rèn)為，miRNAs在細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)中起著不可或缺的作用，通過(guò)調(diào)節(jié)miRNAs的數(shù)量、miRNAs靶點(diǎn)的數(shù)量或miRNAs蛋白復(fù)合物的活性等方式介導(dǎo)應(yīng)激反應(yīng)，恢復(fù)或合成新的體內(nèi)平衡［48］。

4 結(jié)語(yǔ)

蛋氨酸作為必需氨基酸，是動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育不可以缺少的營(yíng)養(yǎng)素。大量研究證實(shí)，蛋氨酸的供給水平與機(jī)體氧化應(yīng)激狀態(tài)和健康水平息息相關(guān)。線粒體結(jié)構(gòu)和功能的變化、Nrf2、ATF4、AP-1等轉(zhuǎn)錄因子介導(dǎo)的信號(hào)通路的激活以及miRNAs的改變?cè)贛etR下氧化還原狀態(tài)的調(diào)控中起關(guān)鍵作用。MetR下線粒體以及信號(hào)通路的變化機(jī)制的探索對(duì)氨基酸營(yíng)養(yǎng)調(diào)控具有重要的理論價(jià)值，同時(shí)對(duì)畜禽健康養(yǎng)殖有重要實(shí)際意義。