許洪杰 陳 浩 王曉鵬 徐增洪 邢 華 陳健翔

(1.中國水產(chǎn)科學研究院淡水漁業(yè)研究中心，江蘇 無錫 214081；2.江蘇盱眙龍蝦產(chǎn)業(yè)發(fā)展股份有限公司，江蘇 盱眙 211700；3.盱眙縣水產(chǎn)技術指導站，江蘇 盱眙 211700)

克氏原螯蝦(Procambarus clarkii)由于自然產(chǎn)卵量低、產(chǎn)卵孵化不同步、苗種運輸存活率低等因素，導致目前傳統(tǒng)的自然育苗模式產(chǎn)量、效率低下，也制約了規(guī)?；?、工廠化人工育苗生產(chǎn)。為了適應規(guī)?；B(yǎng)殖以及市場“養(yǎng)大蝦、養(yǎng)早蝦”或者均衡上市的需求，克氏原螯蝦蝦苗可控化、規(guī)?；a(chǎn)勢在必行。針對目前現(xiàn)有技術存在的問題，本試驗通過對克氏原螯蝦受精卵胚胎離體孵化育苗技術開發(fā)進行研究，以解決蝦苗規(guī)?；煽厣a(chǎn)的關鍵技術問題。

一、技術工藝流程

見圖1、2、3、4。

圖1 技術工藝流程

圖2 溫室繁育區(qū)

圖3 離體孵化育苗車間

圖4 成品離體苗

二、離體孵化可控胚胎發(fā)育試驗

克氏原螯蝦抱卵蝦的受精卵呈“葡萄狀”附在雌蝦腹肢剛毛上進行胚胎發(fā)育，胚胎顏色隨著胚胎的發(fā)育而發(fā)生變化。在自然條件下，抱卵蝦經(jīng)常將腹部貼近洞內(nèi)積水，以保持卵處于濕潤狀態(tài)。產(chǎn)卵結束后，尾扇彎曲至腹下并展開游泳足包被，以防卵粒散失。

克氏原螯蝦的胚胎發(fā)育過程可分為：受精卵、卵裂期、囊胚期、原腸前期、原腸后期、無節(jié)幼體、溞狀幼體和糠蝦幼體期。不同時期的受精卵胚胎顏色變化也不一樣，受精卵顏色變化分為棕色或棕黃色、黑色、褐色或粽褐色、灰色或灰白色。本研究根據(jù)所觀察到的顏色變化可將胚胎和幼體劃分為卵Ⅰ期、卵Ⅱ期、苗Ⅰ期、苗Ⅱ期4個發(fā)育時期，詳見圖5、6、7。

圖5 卵Ⅰ期

圖6 苗Ⅰ期

圖7 苗Ⅱ期

試驗于2019年10月在盱眙縣龍蝦產(chǎn)業(yè)集團龍蝦養(yǎng)殖基地進行。在“蝦公寓”(包含有循環(huán)流水、溫控設備、附著物以及投喂設施)中，觀察抱卵蝦蝦卵胚胎發(fā)育情況。按照4個不同的發(fā)育時期分為4個對照組，每個時期設置3個重復，每個重復隨機取3 尾抱卵蝦，記錄體長、體重和抱卵量，用生理鹽水沖洗處理抱卵親蝦，將抱卵親蝦放在消毒液中浸泡10 分鐘，用脫卵梳從親蝦腹部分離蝦卵至無菌的網(wǎng)格板放入“蝦公寓”中，模擬工廠化繁育，計算蝦卵出膜率和幼蝦出苗率。同樣，根據(jù)不同發(fā)育時期設置4個對照組，每組3個重復，每個重復取100 粒蝦卵放入“蝦公寓”，模擬實驗室環(huán)境，觀察統(tǒng)計蝦出膜率和幼蝦出苗率。結果詳見表1、2。

根據(jù)觀察可知，如果是未受精的蝦卵呈橙黃色，離體后會變?yōu)樗缆?，若不及時清理會引發(fā)霉菌，影響其他正常受精卵的發(fā)育。受精后的蝦卵會慢慢呈現(xiàn)紫黑色，直至全為黑色，形似“紫葡萄”，為卵Ⅰ期；受精卵胚胎經(jīng)過發(fā)育，紫黑色上出現(xiàn)透明的顏色，經(jīng)過5～8 天，受精卵上紫黑色逐漸減少，透明色逐漸增多呈灰白色，為卵Ⅱ期；經(jīng)過4～5 天，受精卵開始破膜，淡紅色幼體孵出為苗Ⅰ期；經(jīng)過3～7 天，與幼蝦形態(tài)基本相同，呈橙紅色；最后卵黃囊消失，發(fā)育為苗Ⅱ期即離體苗，體色為青灰色。

表1 不同發(fā)育時期雌蝦抱卵量抽樣統(tǒng)計

表2 不同密度、不同時期離體卵的出膜率 %

由表2 可知，在100 粒離體卵的密度下，卵Ⅰ期離體卵的出膜率顯著低于卵Ⅱ期(P＜0.05)；在3尾抱卵蝦離體卵的密度下亦是如此，卵Ⅰ期離體卵的出膜率顯著低于卵Ⅱ期(P＜0.05)；不同密度相比較，并不存在顯著差異(P＞0.05)。試驗研究表明卵Ⅰ期的離體卵存活率較低，此階段胚胎并不適合進行離體孵化操作。不同密度下不同時期離體卵的出苗率見表3。

表3 不同密度下不同時期離體卵的出苗率 %

由表3 可知，在100 粒離體卵和3 尾蝦離體卵的不同密度下，卵Ⅱ期、苗Ⅰ期、苗Ⅱ期的出苗率無明顯差異，但都顯著高于卵Ⅰ期(P＜0.05)，都有較高的出苗率，甚至苗Ⅰ期在模擬工廠化培育時出苗率達到(91.0±3.7)%，苗Ⅱ期在模擬實驗室環(huán)境下出苗率高達(94.7±0.6)%，高于自然狀態(tài)下抱卵蝦孵化的出苗率。100粒離體卵的密度下，卵Ⅰ期、卵Ⅱ期、苗Ⅰ期、苗Ⅱ期與3尾抱卵蝦離體卵的密度下的卵Ⅰ期、卵Ⅱ期、苗Ⅰ期、苗Ⅱ期，各期出苗率無顯著差異(P＞0.05)。

本試驗將克氏原螯蝦受精卵離體后孵化獲得初步成功，進一步表明甲殼類動物離體孵化的可行性，但是對于早期發(fā)育階段的受精卵胚胎，在不同密度模式下出苗率均較低，有些在孵化脫膜途中變?yōu)樗缆?，而已有研究發(fā)現(xiàn)中華絨螯蟹胚胎不同發(fā)育時期都可以離體孵化, 這與克氏原螯蝦離體育苗結果不符。

分析其主要原因：①受精卵本來是聚集在親蝦的腹肢，似“葡萄串”狀，抱卵蝦可能經(jīng)常在水底劃動，晃動游泳足，使得溶氧更加充分，或者抱卵蝦的晃動可能會對受精卵釋放某種信號傳導，從而影響胚胎的發(fā)育，這與朱玉芳的結論一致；②河蟹的胚胎發(fā)育至溞狀幼體即可向外界攝取食物，而克氏原螯蝦溞狀幼體是在膜內(nèi)形成，并未向水中攝取餌料，孵化周期從而延長，就會有更多的因素影響克氏原螯蝦受精卵的孵化。這也是卵Ⅱ期的離體卵出膜率顯著高于卵Ⅰ期(P＜0.05)的原因，說明雌蝦的抱卵行為對于受精卵胚胎早期起著至關重要的保護作用。

克氏原螯蝦抱卵蝦正常出苗率為46.7%～83.3%，而本次試驗苗Ⅰ期、苗Ⅱ期的出苗率都要高于正常的出苗率，卵Ⅱ期與正常出苗率相近，但卵Ⅰ期出苗率較低，表明克氏原螯蝦的離體孵化并不宜從受精卵胚胎開始。當蝦卵表面呈灰白色，膜內(nèi)胚胎慢慢變態(tài)成溞狀幼體即卵Ⅱ期時離體，出苗率較高并且越接近苗Ⅰ期，離體蝦卵的出苗率越高。為了降低蝦卵的掉落而帶來的損失，提高抱卵親蝦出苗率，可把抱卵蝦暫養(yǎng)在可控水溫的“蝦公寓”中，經(jīng)過7～10天蝦卵發(fā)育至接近卵Ⅱ期或苗Ⅰ期時再進行離體，這樣既減少了蝦卵損失，又增加了蝦卵出苗率，從而降低生產(chǎn)成本。