王 沖 邱衛(wèi)強(qiáng)

強(qiáng)直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是以慢性炎癥為主要臨床表現(xiàn)的全身性免疫性疾病，且具不可逆性，當(dāng)前無特異性治療方案，致殘率極高[1]。14-3-3η是14-3-3蛋白的一種，作為高度保守的酸性蛋白家族，可參與多種生命活動(dòng)的調(diào)節(jié)，功能涉及免疫炎癥、細(xì)胞周期凋亡等。曾婷婷等[2]報(bào)道，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)患者14-3-3η明顯高于健康人群。dickkopf相關(guān)蛋白1(dickkopf-1，DKK-1)是Wnt信號(hào)通路的負(fù)性調(diào)節(jié)因子，有研究[3]指出，DKK-1可通過抑制Wnt信號(hào)途徑參與骨重塑，同時(shí)還可影響核因子kB受體活化因子、骨保護(hù)素的表達(dá)，對(duì)破骨細(xì)胞產(chǎn)生及骨吸收過程亦存在一定影響。而轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)作為強(qiáng)效致纖維化因子，對(duì)各類結(jié)締組織有極復(fù)雜的生物學(xué)作用，許紅飛等[4]報(bào)道，TGF-β1在AS患者黃韌帶、椎旁肌中呈明顯高表達(dá)。但血清14-3-3η、DKK-1蛋白及TGF-β1與AS患者Bath強(qiáng)直性脊柱炎病情活動(dòng)指數(shù)(Bath ankylosing spondylitis disease activity index,BASDAI)、Bath強(qiáng)直性脊柱炎功能指數(shù)(Bath ankylosing spondylitis functional index,BASFI)等病情指標(biāo)的相關(guān)性研究較少。鑒于此，本研究采集資料分析AS患者血清14-3-3η、DKK-1及TGF-β1水平變化情況，并探究其與AS患者預(yù)后的相關(guān)性，為AS的臨床干預(yù)提供參考，具體報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年2月至2016年1月駐馬店市中心醫(yī)院收治的AS患者60例為研究對(duì)象，作為AS組。其中男性49例，女性11例，年齡29～57歲，平均(40.12±5.69)歲；平均體質(zhì)量指數(shù)(body mass index,BMI)(25.19±0.37)kg/m2，29例有吸煙史。另按1∶1比例在本院同期接受健康體檢的健康志愿者中篩選60例設(shè)為對(duì)照組，其中男性45例，女性15例，年齡32～60歲，平均(40.87±6.14)歲，BMI(25.20±0.68)kg/m2，27例有吸煙史。兩組研究對(duì)象性別構(gòu)成、年齡、BMI及吸煙史等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具可比性。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①AS組符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)分會(huì)《強(qiáng)直性脊柱炎診斷及治療指南》中AS診斷要求[5]；②入組前肝腎功能正常；③無重要器官器質(zhì)性病變；④對(duì)照組均為健康人，無任何內(nèi)、外科疾病；⑤所有研究對(duì)象均知曉研究內(nèi)容并自愿簽署研究知情同意書；⑥研究通過醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①入組前接受過抗腫瘤壞死因子藥物治療；②入組前半年內(nèi)有糖皮質(zhì)激素類藥物、非類固醇類藥物使用史；③大劑量使用抗風(fēng)濕藥物。

1.3 方法 ①血清14-3-3η、DKK-1、TGF-β1檢測(cè)：所有研究對(duì)象均于入組后即刻采集血清樣本，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢驗(yàn)，試劑盒購自武漢博士德，均嚴(yán)格參照試劑盒說明書操作。② BASDAI[6]評(píng)估：主要對(duì)AS組患者的疲勞程度 、頸背髖部疼痛程度、除頸背髖部以外的關(guān)節(jié)腫痛程度、區(qū)域觸壓后的不適程度、晨僵程度等進(jìn)行評(píng)價(jià)，單個(gè)維度分值按0～10分對(duì)應(yīng)無癥狀～非常嚴(yán)重。③BASFI[7]評(píng)估：主要評(píng)價(jià)AS組患者過去1周內(nèi)完成穿襪、彎腰撿鋼筆、仰臥位站起等行為的難易程度，總計(jì)10個(gè)條目，單個(gè)條目按0～10分對(duì)應(yīng)容易～無法完成。2種評(píng)分分值越高，病情越嚴(yán)重，評(píng)價(jià)時(shí)間均為患者入院時(shí)。

1.4 觀察指標(biāo) 記錄并比較兩組研究對(duì)象血清14-3-3η、DKK-1蛋白、TGF-β1水平；并分析血清14-3-3η、DKK-1蛋白、TGF-β1與病情評(píng)價(jià)指標(biāo)的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對(duì)象血清14-3-3η、DKK-1、TGF-β1 比較 AS組14-3-3η、TGF-β1高于對(duì)照組，DKK-1低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組研究對(duì)象血清14-3-3η、DKK-1、TGF-β1 比較

2.2 AS組血清14-3-3η、DKK-1、TGF-β1與BASDAI評(píng)分、BASFI評(píng)分的相關(guān)性分析 AS組患者60例，平均BASDAI評(píng)分(40.12±2.63)分，BASFI評(píng)分(42.67±5.22)分。經(jīng)Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，AS組患者血清14-3-3η、TGF-β1與BASDAI評(píng)分、BASFI評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.556、0.533、0.459、0.433，P<0.001)；DKK-1則與BASDAI評(píng)分(r=-0.285，P<0.05)、BASFI評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.464，P<0.001)。見圖1。

圖1 AS患者血清14-3-3η、DKK-1蛋白、TGF-β1與病情的相關(guān)性分析

3 討論

AS的病因至今尚未完全闡明，AS早期無特異性癥狀，起病隱匿，多數(shù)患者以頸、腰背部及外周關(guān)節(jié)疼痛等為起病癥狀，可累及骶髂關(guān)節(jié)、椎體、椎間盤等，引起功能喪失甚至致殘，且當(dāng)前無特效治療方法[8]。14-3-3η作為高度保守酸性蛋白家族成員，因其具備兩性凹槽，故可與多種配體蛋白結(jié)合，在真核生物中表達(dá)廣泛，也是細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白之一，參與多種疾病的發(fā)生及進(jìn)展。Maksymowych等[9]報(bào)道，14-3-3η在AS患者中存在異常表達(dá)，診斷AS的曲線下面積值高達(dá)0.86。而 BASDAI、BASFI評(píng)分是AS臨床診療中常用的評(píng)分指標(biāo)，前者主要評(píng)價(jià)疾病相關(guān)癥狀、后者則主要評(píng)價(jià)活動(dòng)能力等，均是反映AS病情嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，AS患者血清14-3-3η明顯高于對(duì)照組，并與BASDAI評(píng)分、BASFI評(píng)分呈正相關(guān)，與吳穎等[10]報(bào)道類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、脊柱關(guān)節(jié)炎患者血清14-3-3η存在明顯高表達(dá)的結(jié)果相似。

同時(shí)，以新骨形成為骨重塑形式是AS最典型的病理特征之一，新骨形成也是AS患者脊柱活動(dòng)受限、僵硬、融合甚至殘廢的重要原因，且至今仍無特異性手段逆轉(zhuǎn)AS骨贅形成[11]。近年來研究[12]證實(shí)，Wnt信號(hào)通路在AS新骨形成中有重要作用，其可通過干預(yù)骨細(xì)胞分化程度促進(jìn)新骨形成。DKK-1則是Wnt信號(hào)通路的重要抑制因子。本研究結(jié)果顯示，AS組血清DDK-1蛋白表達(dá)顯著低于對(duì)照組，這與扶忠超等[13]的報(bào)道結(jié)論一致。另一項(xiàng)研究[14]有類似報(bào)道，并認(rèn)為骨形成蛋白7(bonemorphogenetic protein-7,BMP-7)/DKK-1比值與骶髂關(guān)節(jié)炎癥程度、BASDAI放射學(xué)指標(biāo)等反映病情、病程的指標(biāo)顯著相關(guān)。這與本研究結(jié)論相似，均提示AS患者血清DKK-1與病情密切相關(guān)。既往亦有研究[15]報(bào)道，DKK-1低表達(dá)可促進(jìn)骶髂關(guān)節(jié)X型膠原表達(dá)，軟骨細(xì)胞肥大,形成骨性強(qiáng)直，誘導(dǎo)骶髂關(guān)節(jié)融合；DKK-1功能的修復(fù)可增強(qiáng)其對(duì)Wnt/β-action信號(hào)通路的調(diào)節(jié)作用，從而抑制新骨形成，可在一定程度上預(yù)防關(guān)節(jié)僵硬。但也有研究持相反意見，如Daoussi等[16]報(bào)道AS患者血清DKK-1較正常人群呈異常高表達(dá)。分析造成DKK-1表達(dá)不一的原因或受Wnt信號(hào)通路激活后代償性增加、檢測(cè)方式、DKK-1無效生成等多因素影響，仍有待規(guī)范檢測(cè)方式后深入探究。

TGF-β1則是TGF-β超家族的核心成員。TGF-β1可通過誘導(dǎo)結(jié)締組織生長因子 (connectivetissuegrowthfactor,CTGF)分泌，參與軟骨細(xì)胞增殖、血管形成等軟骨形成過程，在炎癥、纖維化過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[17]。本研究結(jié)果顯示，AS組血清TGF-β1顯著高于對(duì)照組，且與BASDAI評(píng)分、BASFI評(píng)分呈正相關(guān)，與王慶文等[18]報(bào)道結(jié)論存在差異，其報(bào)道AS患者骶髂關(guān)節(jié)存在TGF-β1異常高表達(dá)，但血清TGF-β1與正常人群差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，分析或與樣本量較小有關(guān)。

綜上所述，AS患者血清14-3-3η、DKK-1蛋白、TGF-β1存在異常表達(dá)現(xiàn)象，并與BASDAI評(píng)分、BASFI評(píng)分等反映病情的指標(biāo)存在相關(guān)性，14-3-3η、DKK-1蛋白、TGF-β1在AS患者血清中呈異常表達(dá)，或可成為反映病情嚴(yán)重程度的敏感指標(biāo)。本研究存在一定局限性，如樣本狹窄、存在一定混雜因素影響，尤其是血清DKK-1蛋白、TGF-β1與在AS患者中的表達(dá)與既往報(bào)道存在一定差異。因此，AS患者血清14-3-3η、DKK-1蛋白、TGF-β1的表達(dá)仍有極大深入探究空間，擬采集大樣本量后設(shè)計(jì)更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯窟M(jìn)一步深入探究。