曹 琦，李金璇，于成龍，彭 軍，吳家強(qiáng)

（1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東省動物生物工程與疾病防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東泰安 271018；2.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，山東濟(jì)南 250100）

豬圓環(huán)病毒可引起豬群多種疾病[1]，例如斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、皮炎與腎病綜合征（PNDS）等，感染后癥狀出現(xiàn)較緩慢，多在斷奶或育肥期發(fā)病，而在哺乳期較少出現(xiàn)。豬圓環(huán)病毒的重要威脅是引起豬體免疫抑制，容易引起其他病原的繼發(fā)感染而造成損失[2]。經(jīng)調(diào)查，我國7 省市不同類型豬群的圓環(huán)病毒陽性率高達(dá)42.9%[3]，說明圓環(huán)病毒在豬群中廣泛存在。葡萄球菌主要侵害哺乳仔豬，造成仔豬滲出性皮炎，引起的病死率較高。目前，養(yǎng)豬生產(chǎn)中豬圓環(huán)病毒病繼發(fā)葡萄球菌感染的病例較少報(bào)道[4]。豬圓環(huán)病毒病繼發(fā)葡萄球菌感染可嚴(yán)重影響仔豬生長發(fā)育。由于葡萄球菌對抗生素極易產(chǎn)生耐藥性[5]，臨床中的治療難點(diǎn)在于選擇何種抗生素，進(jìn)而抑制繼發(fā)感染。2020年4月，山東省威海市某豬場哺乳仔豬出現(xiàn)疑似豬圓環(huán)病毒病并繼發(fā)葡萄球菌感染的病例?，F(xiàn)就該病例的診治作詳細(xì)報(bào)道，以期為養(yǎng)豬生產(chǎn)中此類疫病的防治提供參考。

1 發(fā)病情況

同一豬舍內(nèi)3 窩哺乳仔豬共37 頭，每頭平均體質(zhì)量為9 kg，其中12 頭仔豬發(fā)病，發(fā)病率為32.43%，重癥4 頭，死亡2 頭（1 頭8日齡、1 頭9日齡），病死率為16.67%。母豬均未發(fā)病。經(jīng)調(diào)查，此前兩年內(nèi)該場母豬曾出現(xiàn)過返情和屢配不孕情況。

2 臨床癥狀

哺乳仔豬體溫升高、精神較差、食欲降低。輕癥初期表現(xiàn)為背部、頭部、四肢內(nèi)側(cè)皮膚出現(xiàn)化膿和壞死灶，后期患處干燥結(jié)痂（圖1 左），觸碰患處仔豬有疼痛表現(xiàn)；重癥表現(xiàn)為全身皮膚皸裂，多處化膿壞死，膚色黝黑，被毛豎立，如同“黑刺猬”（圖1 右）。

圖1 患處干燥結(jié)痂（左）和“黑刺猬”外觀（右）

3 剖檢病變

肝臟充血（圖2-A），淋巴結(jié)腫大（圖2-B），脾臟充血腫大（圖2-C）；胃底黏膜出血、壞死脫落（圖2-D），腸道明顯出血水腫（圖2-E）；腎臟腫大，表面凹凸不平，發(fā)生不規(guī)則形變（圖2-F），內(nèi)有黃色膿液（圖2-G），腎盂有出血性炎癥（圖2-H）。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 試驗(yàn)方法

4.1.1 細(xì)菌分離培養(yǎng) 用無菌棉簽刮取皮膚化膿部位碎屑，浸入7.5%的NaCl 肉湯中培養(yǎng)24 h，進(jìn)行增菌處理；用接種環(huán)無菌操作，從上述菌液中挑取少量，于普通平皿培養(yǎng)基表面劃線，隨后放入37 ℃恒溫箱中進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，24 h 后取出培養(yǎng)基，肉眼觀察菌落形態(tài)特征。

4.1.2 染色鏡檢 細(xì)菌分離培養(yǎng)后，挑取少量可疑菌落，均勻涂抹在潔凈的載玻片上；在酒精燈火焰上方輕輕炙烤玻片，固定菌種，接著滴加結(jié)晶紫溶液至覆蓋菌膜，保持1 min，水洗；用碘液覆蓋菌膜，保持1 min，水洗；用吸水紙吸去殘留的水，傾斜玻片，用95%的乙醇緩慢沖洗20 s 后，再用番紅染液覆蓋菌膜2 min，水洗；等待玻片干燥后，置于油鏡下觀察。

圖2 剖檢病變

4.1.3 生化試驗(yàn) 在杭州微生物試劑有限公司制作的生化鑒定管中加入可疑菌種，測定其對蔗糖、木糖、果糖、乳糖、麥芽糖、蕈糖、蜜二糖、木糖醇、甘露醇的發(fā)酵作用，同時(shí)進(jìn)行尿素酶試驗(yàn)、V-P 試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、精氨酸雙水解酶試驗(yàn)，對可疑菌種生化特性進(jìn)行鑒定。

4.1.4 藥敏試驗(yàn) 用接種環(huán)無菌挑取少許可疑菌落，均勻涂布在普通平皿培養(yǎng)基表面，再用鑷子分別無菌夾取青霉素、氨芐西林、頭孢噻呋鈉、慶大霉素、四環(huán)素、紅霉素、環(huán)丙沙星、林可霉素、磺胺甲惡唑、氯霉素等10 種藥敏紙片置于上述培養(yǎng)基，輕輕按壓，隨后置于37 ℃恒溫箱培養(yǎng)24 h，觀察抑菌圈大小。根據(jù)NCCLS 藥物敏感標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判定。

4.1.5 膠體金試紙檢測 無菌取病豬血液，用滴管分別滴加到豬圓環(huán)病毒（PCV）、豬偽狂犬病毒（PRV）、豬瘟病毒（CSFV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）膠體金試紙待檢區(qū)域，根據(jù)試紙條帶變化情況判定病毒種類。

4.2 結(jié)果與分析

4.2.1 細(xì)菌分離培養(yǎng) 菌落呈圓形，四周整齊，表面光滑濕潤；菌落隆起，不透明，呈淺黃色，直徑為2～3 mm。

4.2.2 鏡檢 在油鏡下可觀察到菌體呈藍(lán)紫色、圓形葡萄串狀，散在或成對分布，結(jié)合菌落形態(tài)特征，初步判定為葡萄球菌。

4.2.3 生化試驗(yàn) 經(jīng)測定，該可疑菌種可發(fā)酵蔗糖、果糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇，不發(fā)酵木糖、蜜二糖、木糖醇；尿素酶試驗(yàn)、V-P 試驗(yàn)均為陰性，硝酸鹽還原試驗(yàn)、精氨酸雙水解酶試驗(yàn)均為陽性。檢測結(jié)果符合葡萄球菌的生化特性[6]，由此判定為葡萄球菌（表1）。

4.2.4 藥敏試驗(yàn) 該菌對頭孢噻呋鈉、慶大霉素敏感，對青霉素、環(huán)丙沙星、紅霉素、林可霉素、氯霉素、磺胺甲惡唑、四環(huán)素、氨芐西林耐藥（表2）。

4.2.5 膠體金試紙檢測 PCV 檢測呈陽性，PRV、CSFV、PRRSV 檢測呈陰性，因而判定為PCV 感染（表3）。

5 治療

根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果，對于癥狀較輕的病豬，將凡士林、阿莫西林粉劑、阿昔洛韋乳膏均勻混合，涂抹在頭部、皮膚和四肢破潰處。對于癥狀較重的病豬，體表涂抹上述藥膏和注射藥物相結(jié)合進(jìn)行治療。藥物注射分3 種：第1 種，使用20 mL 黃芪多糖注射液溶解1 g 頭孢噻呋鈉粉劑，每頭仔豬注射1 mL；第2 種，使用鹽酸頭孢噻呋注射液（100 mL、5 g），每頭仔豬注射1 mL；第3 種，使用黃芪多糖注射液與地塞米松注射液各1 mL 混合注射。上述方法均有較好的治療效果。同時(shí)，鑒于該豬場未作PCV 疫苗免疫，全豬群緊急免疫接種豬圓環(huán)病毒Ⅱ型（PCV2）滅活疫苗。經(jīng)治療，該場病情得到有效控制。

表1 生化試驗(yàn)結(jié)果

表2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

表3 膠體金試紙結(jié)果

6 討論

6.1 本病誘因

本病發(fā)生與疫苗、病毒特性、豬群自身和外界條件等因素有關(guān)[7]。近年來，國內(nèi)大部分豬場PCV 陽性率居高不下[8]。多數(shù)豬場使用的疫苗為PCV2 滅活苗[9]，但其免疫保護(hù)率達(dá)不到100%[10]，效果不甚理想。同時(shí)，PCV 可導(dǎo)致豬群嚴(yán)重的免疫抑制[11]，使豬群對其他疫苗的免疫應(yīng)答減弱，極易繼發(fā)或并發(fā)其他傳染病，從而造成惡性循環(huán)。不健全的衛(wèi)生防疫措施也可導(dǎo)致繼發(fā)性疾病產(chǎn)生，如糞便清理不及時(shí)，仔豬剪牙、斷尾時(shí)未消毒，母豬產(chǎn)仔后乳房處皮膚消毒不徹底等。另外，豬群個(gè)體差異和母源抗體干擾也是誘發(fā)本病的一個(gè)重要原因[12]。

6.2 防治措施

本病防治重點(diǎn)在于加強(qiáng)預(yù)防和對癥治療。豬場內(nèi)嚴(yán)禁飼養(yǎng)貓、牛、羊、馬等動物，及時(shí)驅(qū)趕野貓，防止其攜帶病原傳播給豬群，導(dǎo)致疫病發(fā)生。定期使用含氯或醛類消毒劑對豬場及其周圍環(huán)境進(jìn)行噴灑消毒，對來往車輛和人員要使用消毒劑、紫外線或蒸汽嚴(yán)格消毒，防止野毒傳入[13]。平時(shí)可對豬群進(jìn)行藥物保健[14]，預(yù)防細(xì)菌病發(fā)生。接種時(shí)應(yīng)保證疫苗免疫效果優(yōu)良，也可配合使用免疫增強(qiáng)劑，提高疫苗免疫效率[15]。對癥治療在于合理使用藥物，病毒類疫病應(yīng)用干擾素、黃芪多糖等藥物；細(xì)菌類疫病應(yīng)根據(jù)藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果，選用敏感程度高的抗生素；寄生蟲類疫病則應(yīng)用阿苯達(dá)唑、伊維菌素等驅(qū)蟲藥[16]。有研究[17]表明，中藥及其提取物在治療細(xì)菌病、病毒病和寄生蟲病中效果明顯，但在畜牧行業(yè)普及中藥應(yīng)用尚需一定時(shí)間。傳統(tǒng)上可選用紅霉素、大觀霉素或萬古霉素等抗生素治療葡萄球菌感染[18-19]。本場經(jīng)藥物敏感試驗(yàn)及臨床應(yīng)用，證明頭孢噻呋鈉對抑制該場葡萄球菌感染效果極佳。

6.3 鑒別診斷

本病易與豬瘟、豬丹毒和豬皮炎腎病綜合征等疫病相混淆[20]，可通過多發(fā)季節(jié)、病豬日齡和剖檢病變作初診。豬瘟多發(fā)生在春秋兩季，致死率高，可感染各個(gè)年齡段的豬，急性病例死亡率可高達(dá)100%[21]；豬丹毒早期癥狀與葡萄球菌感染類似[22]，但剖檢病變有所不同，表現(xiàn)為特征性的“大紅腎”和心臟內(nèi)“菜花樣”增生[23]，多發(fā)生在夏季，主要侵害3～6月齡育肥豬；豬皮炎腎病綜合征鑒別在于其主要發(fā)生在斷奶仔豬和育肥豬，尤其是6～12 周齡最常見，通常在3 d 內(nèi)死亡，病程長的可持續(xù)2～3 周[24]。當(dāng)然，在生產(chǎn)實(shí)踐中需要通過實(shí)驗(yàn)室檢測進(jìn)行確診。

7 結(jié)語

本次豬圓環(huán)病毒病繼發(fā)葡萄球菌感染的診治提示，預(yù)防此類疫病，僅定期接種疫苗遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，還應(yīng)重視平時(shí)的飼養(yǎng)管理和豬場環(huán)境衛(wèi)生，只有做好全方位防護(hù)，才能保障豬群健康生長，使豬場經(jīng)濟(jì)效益最大化。