王梓樂 高志強 汪 琳** 江海洋**

(1.中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，北京 100193；2.北京海關技術中心，北京 101113)

動物寄生蟲病多指由寄生于動物的致病性寄生蟲引起的疾病。目前，多數(shù)寄生蟲病為慢性消耗性疾病，臨床表現(xiàn)為感染動物逐漸消瘦，但病死率較低，因而社會各界對于動物寄生蟲病的關注度較低。近年來隨著人們生活水平的提高及對畜產(chǎn)品的營養(yǎng)、風味和口感要求的提高，食生、半生肉及水產(chǎn)品的現(xiàn)象屢見不鮮(俞強，2015)，在此背景下生肉與水產(chǎn)品中的寄生蟲對人體健康造成了嚴重威脅。據(jù)報道，全世界每年有超過一半以上的人口受到寄生蟲病的威脅,每年有數(shù)百萬的人死于寄生蟲病(俞強，2015)，我國衛(wèi)生部一項調(diào)查顯示，動物源性寄生蟲病已成為新“富貴病”，城鎮(zhèn)居民特別是沿海經(jīng)濟發(fā)達地區(qū)的感染人數(shù)呈逐年上升勢頭(張衛(wèi)兵等，2012)。

對動物(陸生和水生)進行寄生蟲檢測，是防控食源性寄生蟲病的關鍵(楊俊，2017)。我國雖然已就動物寄生蟲檢測制定了一系列相關標準，如《食品安全國家標準動物性水產(chǎn)制品》GB 10136—2015中明確要求即食生制動物性水產(chǎn)制品不得檢出吸蟲囊蚴、線蟲幼體及絳蟲裂頭蚴，但目前我國現(xiàn)有的寄生蟲檢測資源以及檢測依據(jù)——檢測標準的數(shù)量和質量并不能滿足食品安全的現(xiàn)實需求。本文系統(tǒng)整理了現(xiàn)有寄生蟲檢測方法及其相關標準情況，對各種檢測方法進行分析比較，以期為我國未來寄生蟲檢測標準的立項和制修訂提供相關依據(jù)。

1 寄生蟲檢測標準總體情況

目前，我國標準體系中，涉及寄生蟲檢測方法標準共有103個，其中國際標準13個、國家標準27個(表1)、檢驗檢疫行業(yè)標準31個(表2)、水產(chǎn)行業(yè)標準30個(表3)、農(nóng)業(yè)行業(yè)標準7(表4)、衛(wèi)生行業(yè)標準8個(表5)。

表1 寄生蟲檢測國家標準

表2 寄生蟲檢測檢驗檢疫行業(yè)標準

表3 寄生蟲檢測水產(chǎn)行業(yè)標準

表4 寄生蟲檢測農(nóng)業(yè)行業(yè)標準

表5 寄生蟲檢測衛(wèi)生行業(yè)標準

動物寄生蟲國家標準見OIE陸生動物診斷試驗和疫苗手冊-第七版,規(guī)范了棘球蚴/包蟲、利什曼原蟲、旋毛蟲、伊氏錐蟲、蜂孢子蟲、牛巴貝斯蟲、泰勒蟲、毛滴蟲、錐蟲、馬梨形蟲、隱孢子蟲、囊蟲、弓形蟲等的采樣和檢測方法。

國家標準中有6項規(guī)范人感染寄生蟲診斷和消除，包括血吸蟲病、絲蟲病、剛地弓形蟲的診斷，方法主要是臨床癥狀診斷和血清免疫檢查，由于國內(nèi)公共安全控制有效，人民生活水平提高，寄生蟲感染病例少，免疫學診斷方法基本能滿足診斷需求；有12項規(guī)范實驗動物中寄生蟲檢測，包括寄生蟲學等級及監(jiān)測、體外寄生蟲檢測方法，體內(nèi)弓形蟲、兔腦原蟲、卡氏肺孢子蟲、艾美耳球蟲、蠕蟲、瘧原蟲、犬惡絲蟲、腸道溶組織內(nèi)阿米巴、腸道鞭毛蟲和纖毛蟲的檢測方法，主要是免疫檢測方法。實驗動物標準發(fā)布時間早，主要集中在2001年，由于實驗動物環(huán)境控制好、染病動物少，有標準可依就能滿足實驗動物管理需求，所以實驗動物寄生蟲檢測標準基本沒有更新；有7項規(guī)范家畜感染寄生蟲診斷，包括血吸蟲、旋毛蟲、囊尾蚴、伊氏錐蟲病、球蟲病等的診斷技術，由于家畜感染寄生蟲病例多情況復雜，所以家畜寄生蟲檢測的方法發(fā)展最快，除了血清學免疫檢測，近年不斷發(fā)展出分子生物學檢測技術，如旋毛蟲實時熒光PCR、隱孢子蟲套式PCR等，目前家畜寄生蟲檢測的國標還不能完全滿足臨床診斷需求，又發(fā)展了很多行業(yè)標準作為補充；有2項是規(guī)范水生動物寄生蟲檢測，包括腦粘體蟲和派琴蟲的檢測。水生動物寄生蟲檢測國家標準很少，由于以前主要是水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)需要檢測水生動物寄生蟲，其他行業(yè)需求較少，水產(chǎn)行業(yè)標準基本就能滿足需求；近年由于食品安全關注到水產(chǎn)品中寄生蟲檢測，市場監(jiān)管部門也需要對水生動物寄生蟲開展檢測，故水生動物寄生蟲檢測需要更多的國家標準做支撐。

檢驗檢疫行業(yè)標準規(guī)范了部分種類活動物、動物源性食品和水產(chǎn)品中寄生蟲的檢測，包括微孢子蟲、弓形蟲、旋毛蟲、錐蟲、焦蟲、住白細胞蟲、囊尾蚴、隱孢子蟲、吸蟲等，基本是根據(jù)我國與不同國家簽到的議定書規(guī)定制定相應的檢測標準，所以涉及的寄生蟲種類多，方法種類也多，有顯微鏡檢、間接血凝、酶聯(lián)免疫吸附、補體結合、PCR法等，標準也在不斷更新。由于機構整合，2018年4月檢驗檢疫轉隸到海關，以后不會再有新的檢驗檢疫行業(yè)標準發(fā)布。

水產(chǎn)行業(yè)標準規(guī)范了牡蠣和魚類寄生蟲的檢測，包括單孢子蟲、小胞蟲、拍琴蟲、馬爾太蟲、納米蟲、異尖線蟲等，由于寄生蟲對水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)影響很多，故寄生蟲病的診斷得到高度重視，發(fā)布的標準也多，方法有細胞學診斷、病理學診斷、原位雜交診斷、透射電鏡診斷等，同一種寄生蟲檢測標準更新少，基本是新出現(xiàn)一種寄生蟲就發(fā)布一批不同方法、或者不同亞種、或者針對不同宿主的標準。

農(nóng)業(yè)行業(yè)標準規(guī)范了活動物寄生蟲檢測，包括棘球蚴、弓形蟲、線蟲、滴蟲、隱孢子蟲等，農(nóng)業(yè)標準數(shù)量不多，但基本都是綜合的診斷技術，一個標準包括了多種亞種和多種檢測方法，既能滿足實驗室病原檢測需求，也能指導臨床診斷。

衛(wèi)生行業(yè)標準規(guī)范了人感染寄生蟲病的診斷，包括絲蟲病、阿米巴蟲、包蟲病、吸蟲病、絳蟲病的診斷，早期發(fā)布的標準多是臨床癥狀診斷和免疫檢測方法，新發(fā)布的標準也開始利用分子生物學檢測技術。

2 我國動物寄生蟲病檢測標準前處理、采樣及檢測方法

選取我國動物寄生蟲標準，根據(jù)其適用范圍，樣品采集與前處理以及檢測方法進行了統(tǒng)計匯總(由于實驗動物類寄生蟲標準自成體系，因此未匯總在內(nèi))，見表6。

表6 我國動物寄生蟲病檢測標準內(nèi)容簡介

2.1 采樣和前處理

對于不同的寄生蟲病，不同的感染動物和不同的檢測方法，采樣種類和前處理過程也有所不同。我國現(xiàn)有寄生蟲標準對采樣和前處理方法均進行了詳細描述，使得現(xiàn)有標準可操作性較強。

2.2 蟲體檢測方法

我國現(xiàn)有寄生蟲標準主要為傳統(tǒng)肉眼或鏡檢檢測方法,這主要是由于寄生蟲個體相對較大，肉眼或鏡下有相對典型的形態(tài)特征，多數(shù)情況下可根據(jù)其形態(tài)特征即可作出診斷，這也是形態(tài)學檢查方法廣為使用的原因。

2.3 血清學檢測方法

就寄生蟲病而言，由于蟲體的抗原構成相對復雜，敏感而特異的血清學方法目前并不多見，采用血清學檢測的寄生蟲病多見于陸生動物血液寄生蟲病。這也是寄生蟲病血清學檢測標準為數(shù)不多的原因。目前寄生蟲病血清學檢測標準所用方法主要有間接血凝試驗(血吸蟲病、弓形蟲病、棘球蚴病)，乳膠凝集試驗(伊氏錐蟲病)，補體結合試驗(牛錐蟲病，牛、羊、馬焦蟲病)以及ELISA(旋毛蟲病、伊氏錐蟲病、棘球蚴病、馬焦蟲病和囊蟲病)。

2.4 核酸檢測方法

盡管蟲體形態(tài)學檢查目前仍然是動物寄生蟲病的主要手段和“金標方法”，但在某些蟲體小，形態(tài)特征存在多樣性、蟲荷低以及早期或不顯性感染時，形態(tài)學檢查就凸顯其局限性。隨著核酸技術的發(fā)展，DNA探針技術、PCR和實時PCR技術以及LAMP技術已經(jīng)開始用于一些寄生蟲病的檢測(肖樣，2000；魏永紅等，2011)。目前隨著對動物寄生蟲基因組序列的深入研究，許多種特異性、株特異性靶位點得以發(fā)現(xiàn)，可以預期，基于PCR的技術將會在寄生蟲病原快速檢測上發(fā)揮越來越重要的作用(許靜等，2007)。但目前我國動物寄生蟲病原核酸檢測技術標準的制定明顯滯后，從表6可以看出，很多寄生蟲標準缺乏核酸檢測方法，沒有跟上應用的技術發(fā)展步伐。

3 結論與建議

3.1 檢測標準的制定缺乏系統(tǒng)性，建議開展寄生蟲檢測標準體系研究

目前動物寄生蟲檢測標準制定缺乏頂層設計，動物寄生蟲病種類繁多、寄主復雜，有許多缺乏標準，而有的寄生蟲由多家單位獨立制定了多個標準，方法和適用性存在部分交叉，例如旋毛蟲檢測標準，有的只適用于豬，有的適用于多種動物；寄生蟲的名稱也不夠統(tǒng)一，例如梨形蟲檢測，有的標準稱為梨形蟲病，有的稱為焦蟲病。建議制定標準體系表來統(tǒng)領各類檢測標準，既便于指導新標準立項，也便于用戶的檢索和使用。

3.2 檢測標準側重于形態(tài)學檢測，建議豐富標準檢測方法

目前現(xiàn)有寄生蟲檢測標準多為形態(tài)學鑒定。盡管形態(tài)學檢查不需要特殊設備，具有簡單、快速的優(yōu)點。但對檢測人員要求高，需要深厚的寄生蟲基礎知識儲備，檢測判定存在主觀性較強的缺點。在很多情況下(如蟲體形態(tài)小、蟲荷低、特征多樣性等)，形態(tài)學檢查存在明顯的局限性。標準側重于形態(tài)學檢測可能是造成國內(nèi)很少檢測機構能開展寄生蟲檢測的原因之一。目前隨著動物寄生蟲基因組序列的深入研究，許多種特異性、株特異性靶位點得以發(fā)現(xiàn)，許多基于核酸檢測的方法已經(jīng)開始逐步用于寄生蟲的檢測(Wongetal.，2014)。但目前動物寄生蟲病原核酸檢測技術標準的制定略微滯后，建議加大寄生蟲核酸檢測標準的立項。

3.3 實物標準樣品匱乏，建議開展標準樣品的研制工作

由于很多寄生蟲采集困難，培養(yǎng)難度大，目前全國許多檢測機構都存在缺乏寄生蟲實物標本，沒有參比對照，在出現(xiàn)形態(tài)學特征不明顯的蟲體時，檢測人員無法比對鑒別；沒有實物做標準品，也不利于分子生物學快速檢測方法的驗證和推廣使用。為了提高全國寄生蟲檢測水平，急需開展寄生蟲標準樣品研制工作。在構建寄生蟲圖譜數(shù)據(jù)庫的基礎上，制備多種標準樣品(包括形態(tài)學實物標準樣品和核酸檢測標準樣品)，用于方法和標準驗證以及試驗時間比對，從而更好服務于寄生蟲檢測工作的推廣應用。整體提升動物寄生蟲病檢測水平，并應用于農(nóng)產(chǎn)品質控檢測中，為保障肉制品及水產(chǎn)品的安全和人民健康提供有力的技術支撐。